目的验证人血清中福氏2a及宋内志贺菌O-特异性多糖(分别简称福氏2a多糖及宋内多糖)抗体IgG含量的ELISA定量检测方法,并用于福氏宋内痢疾双价疫苗免疫前后人血清样本的检测。方法将参考血清及质控血清按一定比例混合,制备成10份不同浓度的血清样本(编号为S1~S10),采用企业提供的间接ELISA定量检测方法检测样本,连续测定6 d,计算多糖抗体IgG回收率和变异系数(coefficient of variation,CV),并以回收率CV低于20%的相应参考血清含量作为定量限(limit of quantitation,LOQ)。采用相同检测方法连续6 d测定血清样本S10及质控血清,每天重复检测3次,计算CV;采用参考血清进行多糖竞争抑制ELISA试验,计算血清对多糖的抑制率。采用企业提供的方法检测参考血清,确定线性范围,获得曲线方程,计算相关系数(R^(2))。采用验证的方法检测1842份福氏宋内痢疾双价疫苗免疫前后的人血清样本。结果10份血清样本中福氏2a和宋内多糖抗体IgG回收率分别为73.21%~222.68%和83.67%~123.56%;试验间及试验内精密性CV均<30%;参考血清对100μg/mL福氏2a和宋内多糖的抑制率分别为85.95%和88.42%;福氏2a和宋内多糖抗体IgG检测的线性范围分别为0.05~0.125和0.025~0.125 EU/mL,R^(2)均≥0.99,LOQ分别为0.050和0.025 EU/mL。福氏宋内痢疾双价疫苗免疫后血清IgG含量大幅高于免疫前。结论企业提供的ELISA定量检测方法具有良好的准确性、精密性及特异性,可用于痢疾疫苗免疫血清的检测。
目的制备甲型副伤寒沙门菌菌体抗原单克隆抗体,并对其进行鉴定及初步应用。方法用甲醛灭活的甲型副伤寒沙门菌免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合,筛选出稳定分泌甲型副伤寒沙门菌特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株,对克隆纯化后的阳性细胞扩大培养后,免疫BALB/c小鼠,收获腹水,间接ELISA法检测抗体效价,并进行Ig类和亚类鉴定;腹水经辛酸-硫酸铵盐析法纯化后,采用间接ELISA法、玻片凝集试验、SDSPAGE法、免疫扩散试验进行检测。将纯化后的2株单克隆抗体用于双抗体夹心ELISA法的建立,并用自制配对抗体检测甲型副伤寒患者血浆、乙型副伤寒患者血浆、伤寒患者血浆和正常人血浆。结果共筛选出2株持续分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为1H4和2A9,腹水抗体效价为1∶10~7和1∶10~6,分别为IgG_1和Ig G_3亚类,轻链均为κ型。纯化后的单克隆抗体1H4、2A9效价分别为1∶10~7和1∶10~3,1H4纯度大于85%,2A9纯度小于60%。2株单克隆抗体与甲型副伤寒沙门菌50503、50973可产生凝集反应,与伤寒沙门菌50096不产生反应;1H4在稀释度为1∶8时可与甲型副伤寒沙门菌菌体特异多糖(organism specific polysaccharide,OSP)产生凝集反应,而2A9在每个稀释度与OSP均不发生反应。将1H4和2A9用于双抗体夹心ELISA检测法建立,确定1H4/HRP-2A9的组合为最佳配对,用该配对抗体检测阳性样本检出率为100%,正常人血浆样本检出率为0。结论获得2株甲型副伤寒沙门菌菌体抗原单克隆抗体,可用于甲型副伤寒沙门菌的快速鉴定。
