公共文化服务平台

肠炎沙门氏菌的LAMP检测方法的建立被引量：13: 2013年; 建立肠炎沙门氏菌(Salmonella enteritidis)的环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)方法,实现对肠炎沙门氏菌的快速检测。通过针对肠炎沙门氏菌血清型特异性基因lygD设计LAMP内外引物对,优化LAMP扩增反应条件,采用包括肠炎沙门氏菌在内的10种不同菌株进行LAMP引物特异性检测;通过系列梯度稀释肠炎沙门氏菌菌液进行LAMP扩增,计算检出限;并对鲜鸡蛋模拟样本进行LAMP检测。结果表明LAMP法可快速特异地检测出肠炎沙门氏菌;细菌培养液检出限为2.33×101cfu/mL,鲜鸡蛋模拟样品为2.67×101cfu/mL。该方法反应灵敏度高,可用于食品中肠炎沙门氏菌的快速检测。; 袁发浒尹欢李琦陈江源刘烈炬刘志国; 关键词：肠炎沙门氏菌环介导等温扩增检出限

慢性排斥肾移植大鼠继发对自身组织蛋白vimentin的细胞和体液免疫反应被引量：4: 2012年; 目的:研究慢性排斥肾移植受体对自身组织抗原——波形蛋白(vimentin)的细胞和体液免疫反应。方法:近交系Lewis大鼠接受F344大鼠供肾行左侧原位肾移植,7天后对侧肾切除,建立肾移植慢性排斥反应模型。术后每2周检测受体蛋白尿水平,术后第49天与98天取供肾作病理检查,观察慢性移植肾肾病(CAN)进程。术后第14、49、98天收获受体脾细胞,以酶联免疫斑点法(ELISPOT)检测vimentin特异性IFN-γ分泌T细胞的数量;收获受体血清以酶联免疫吸附法(ELISA)检测vimentin特异性抗体水平。自体肾移植Lewis大鼠持续行肾功能检测,第98天收获肾脏、脾脏、血清作病理及免疫检测。结果:同种肾移植受体蛋白尿水平在6周后逐渐升高,49天时病理检查发现肾间质纤维化、肾小管萎缩等典型CAN病变,CAN病情逐渐加重。而自体肾移植大鼠术后98天蛋白尿水平无改变,无CAN病变。经体外vimentin特异性刺激,同种肾移植大鼠IFN-γ分泌T细胞的数量在肾移植后49天明显增多(28.3±2.0 vs.10.1±2.1),98天时其数量显著上升(126.0±10.4vs.26.3±4.1,P<0.01)。而自体肾移植大鼠vimentin特异性IFN-γ分泌T细胞数量无明显变化。同种肾移植大鼠vimentin特异性抗体水平术后14天即显著升高(0.230±0.018 vs.0.063±0.008,P<0.05),并维持在较高水平。而自体肾移植大鼠vimentin特异性抗体水平无明显改变。结论:慢性排斥肾移植受体继发针对自身抗原vimentin的细胞与体液免疫反应,继发自身免疫可能参与CAN的发展。; 方成李琦刘立陈薇胡汉宁梁慧芳王加谋瞿永华谢德芳; 关键词：波形蛋白肾移植慢性排斥

噬菌体基因Ⅴ蛋白基因的合成、重组表达及功能分析被引量：1: 2012年; 目的:研究丝状噬菌体基因V蛋白(gene V protein,GVP)基因的合成、重组表达及其功能。方法:根据GVP的基因序列,选择大肠杆菌偏爱的密码子,设计合成了8个寡核苷酸片段,利用重叠延伸PCR合成GVP基因序列,将其与原核表达载体pET-28a-c(+)质粒重组,转化大肠杆菌,获得GVP蛋白阳性表达菌株,异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达,产物经Ni+-NTA琼脂糖凝胶层析纯化,获得目的蛋白GVP,DNA结合实验检测其功能。结果:成功合成出GVP基因,重组体在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导获得高效表达,DNA结合实验表明GVP与单链DNA间解离平衡常数Kd=7.27×10-5mol/L。结论:重组构建并高效表达的GVP蛋白具有较高单链DNA结合能力,可用于食品病原微生物特定单链DNA分子的浓缩和分离。; 张大川房国梁李琦陈江源王岚李睿刘烈炬刘志国; 关键词：大肠杆菌BL21(DE3)

溶血性链球菌LAMP检测方法的建立被引量：9: 2010年; 目的:研究溶血性链球菌的环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测方法,实现对溶血性链球菌的快速检测。方法:针对溶血性链球菌的scpA基因设计4条特异性LAMP内外引物进行LAMP扩增;优化扩增反应条件;采用包括溶血性链球菌在内的6种不同菌株进行LAMP的特异性检测,并酶切鉴定;对溶血性链球菌菌液以无菌水进行10倍系列梯度稀释后,进行LAMP扩增检测其灵敏度;将菌掺入牛奶样本并进行LAMP检测。结果:本法可快速灵敏地检测出溶血性链球菌,反应特异性高,检出限为16.7CFU/mL,而牛奶样本的检出限则达10CFU/mL。结论:LAMP法可用于食品溶血性链球菌的快速检测。; 尹欢李琦陈江源马寅众李睿刘志国; 关键词：溶血性链球菌检出限

环介导等温扩增法快速检测阪崎肠杆菌被引量：12: 2010年; 目的:研究阪崎肠杆菌的环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,简称LAMP)方法,实现对食品中阪崎肠杆菌的快速检测。方法:针对阪崎肠杆菌16S rRNA基因(16S rDNA)及外膜蛋白A(OmpA)基因设计LAMP引物,扩增后通过电泳或加入显色剂SYBR-GREENⅠ检测。结果:LAMP法能有效特异地检测出阪崎肠杆菌;以16S rRNA引物检测阪崎肠杆菌的最低检出限为32CFU/mL,用OmpA引物检测阪崎肠杆菌的最低检出限达3CFU/mL,扩增产物加入SYBR-GREENⅠ在紫外条件下可见荧光,与电泳检测具有同样的灵敏度。结论:LAMP法可实现对阪崎肠杆菌的快速检测,在食品检测中具有广阔的应用前景。; 马寅众陈江源房国梁李琦李睿周帼萍刘志国; 关键词：阪崎肠杆菌环介导等温扩增

ELISA法测定热加工食品中的丙烯酰胺被引量：15: 2011年; 该研究建立了热加工食品中丙烯酰胺的间接竞争ELISA检测方法。首先用戊二醛法合成丙烯酰胺-BSA免疫抗原,注入兔体内以产生抗丙烯酰胺多克隆抗体。结果显示,在包被抗原为1.5μg/mL,抗体稀释度为1∶16000倍的优化条件下,间接ELISA法检测范围为50μg/L～1280μg/L,IC50为检测限为350μg/L,最低检测限为50μg/L。加标回收率为92.6%～95.5%。该检测方法准确快速,特异性强,适用于热加工食品中丙烯酰胺的快速检测。; 付云洁李琦陈江源王岚李睿周帼萍刘志国; 关键词：丙烯酰胺多克隆抗体 ELISA

麦角碱的提取与分离纯化被引量：4: 2010年; 通过大孔树脂D-101吸附法提取雀稗麦角菌发酵液中麦角总碱粗品。采用硅胶薄板层析确定粗品组分及洗脱条件,进行碱性硅胶柱低压层析,单因素实验确定洗脱溶剂的比例及洗脱次数,最终分离纯化得到麦角总碱,计算总回收率。结果表明:总生物碱回收率为77.6%。硅胶层析分离上样量与硅胶质量比为1∶20,去杂洗涤剂为氯仿:甲醇=5∶1(V/V)的混合液,依次洗涤5次。用氯仿-甲醇2∶1(V/V)的洗脱剂洗脱,得到麦角总碱;从雀稗麦角菌发酵液中提纯麦角碱法回收率及纯度较高,具有广阔的应用前景。; 曾丽娟李琦刘志国马寅众付云洁; 关键词：纯化

当归抗高脂致家兔主动脉粥样硬化效果观察被引量：6: 2003年; 目的 :通过观察当归影响实验性高脂致家兔主动脉粥样硬化的效果 ,探讨当归抗动脉粥样硬化作用的机制。方法 :取健康家兔随机分正常对照组 (普通饲料喂养 ) ;高脂组 (高脂饲料喂养 )和当归治疗组 (高脂饲料加当归注射液 )。喂养 10周末处死动物 ,检测主动脉AS斑块面积 ,透射电镜观察主动脉超微结构的变化 ,并速将主动脉条置入不同乙酰胆碱 (Ach)浓度中 ,用Griess反应法检测一氧化氮 (NO)含量。结果 :当归可显著减小粥样斑块面积 ,抑制动脉壁泡沫细胞形成 ,并增加主动脉NO的生成含量。结论 :当归可拮抗高脂导致的动脉粥样硬化的形成 ,这种作用可能与它保护内皮细胞、减少泡沫细胞形成、影响NO生成有关。; 李琦欧阳静萍余追李银萍; 关键词：当归高脂家兔主动脉粥样硬化乙酰胆碱一氧化氮

环介导等温扩增法对乙肝病毒的快速检测和分型被引量：6: 2012年; 目的针对乙肝病毒(HBV)不同亚型,建立环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)方法,实现对HBV的快速检测及基因分型。方法分别设计HBV B、C、D三亚型基因组特征序列的LAMP引物,优化反应条件,建立特异灵敏的HBV亚型LAMP检测方法,并与Real-time PCR方法进行临床样本检测结果比对。结果 LAMP法在数十分钟内有效地检测出HBV的B、C、D三亚型;其中,HBV-B亚型的检出限为17拷贝;C亚型的检出限为25拷贝;D亚型的检出限为10拷贝。与Real-time PCR法相比,灵敏度提高1 000倍左右。结论 LAMP法可实现HBV的快速检测及分型,具有高特异度和高灵敏度,可用于临床检测诊断。; 马寅众李琦李奎王岚余晓丽刘志国; 关键词：乙型肝炎病毒

不同纯化兔抗苏丹红ⅠIgG方法的比较被引量：3: 2011年; 采用辛酸-硫酸铵法和亲和层析法两种方法纯化兔抗苏丹红I IgG。纯化产物通过BCA法、琼脂双向扩散、SDS-PAGE凝胶电泳试验进行蛋白浓度、效价及纯度的验证。实验结果表明,利用辛酸硫酸铵纯化的产物蛋白质浓度高于亲和层析法,但经亲和层析纯化的产物纯度和效价均优于饱和硫酸铵。因此亲和层析法是一种快速高效的纯化方法,纯化产物可适用于免疫学检测方法的研究,为今后食品中苏丹红添加剂的快速检测奠定了良好的基础。; 张大川付云洁刘志国梁莉甜李琦; 关键词：多克隆抗体亲和层析法凝胶电泳

渝B2-20050021-1　渝公网安备 50019002500403号　违法和不良信息举报中心　互联网出版许可证　新出网证(渝)字10号

李琦

合作作者

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户反馈

李琦

合作作者

文献类型

领域

主题

机构

作者

传媒

年份

用户登录

用户反馈