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基于生物质谱的胶原蛋白定量检测方法被引量：6: 2015年; 本研究旨在建立一种基于特征多肽的胶原定量检测方法,通过序列比对的方法筛选胶原蛋白特征多肽,利用胰蛋白酶将牛Ⅰ型胶原蛋白标准品进行酶解,采用液质联用技术(HPLC-MS)对特征多肽进行检测,建立特征多肽丰度与胶原蛋白浓度对应关系并用于实际样品分析。结果表明,牛Ⅰ型胶原蛋白中检测出6种特征多肽,其中多肽GEAGPSGPAGPTGAR由于其丰度高且二级质谱稳定适合作为定量检测的特征多肽,多肽信号强度与蛋白浓度(0.1-3.0 mg/m L)呈良好线性关系。将所建方法用于实际样品分析,牛跟腱胶原蛋白含量为90.2%,胶原海绵中胶原蛋白含量为93.4%,检测结果与基于氨基酸组成分析的结果一致。该研究表明基于HPLC-MS的特征多肽分析方法进行胶原蛋白定量检测具有可行性,该方法在含胶原蛋白医疗器械等生物制品质量控制方面具有应用前景。; 孙坤杨帆孔英俊康跻耀曹玮杨小雁查圣华张贵锋王明林; 关键词：胶原蛋白

羟基化修饰对大鼠胶原热稳定性的影响研究被引量：1: 2015年; 采用差示扫描量热仪(DSC)研究羟脯氨酸(Hyp)含量对胶原热稳定性的影响。以不同周龄BN大鼠皮肤为原料制备了胶原,分析制备胶原中Hyp的含量;采用DSC测定不同Hyp含量胶原的临界变性温度及焓变;采用圆二色光谱(CD)检测提取胶原的二级结构。结果表明,提取胶原在41.3℃发生三螺旋解聚,CD光谱分析结果表明,当样品经临界变性温度处理后,部分三螺旋结构转化为无规则线圈结构。胶原变性过程中所需热量与羟脯氨酸含量呈正相关,实验建立了胶原热变性过程中焓变与Hyp含量的关系。该研究表明胶原中脯氨酸羟基化修饰是影响胶原热稳定性的关键因素。; 焦昀孔英俊高建萍康跻耀孙坤査圣华张贵锋张贵锋; 关键词：胶原热稳定性差示扫描量热仪圆二色光谱

胶原蛋白肽氨基酸组成对小鼠肠道吸收的影响研究被引量：3: 2016年; 研究了胶原蛋白肽氨基酸组成对其在小鼠体内吸收程度的影响。利用离子交换层析分别制备出富含碱性和酸性氨基酸的胶原蛋白肽,小鼠灌胃后检测了血清中羟脯氨酸和胶原蛋白降解后的多肽相对丰度的差异。氨基酸组成分析结果表明阳离子交换层析制备的胶原蛋白肽(CPC)富含精氨酸(Arg)和赖氨酸(Lys),含量比未经过层析分离的多肽(CPo)分别高12.2%和7.4%。阴离子交换制备的多肽(CPA)中Arg和Lys含量比CPo低18.3%和26.5%。通过离子阱质谱技术从CPC中检测到9种含Arg或Lys的多肽,其含量远大于CPA中的含量。动物实验结果表明CPC在小鼠体内吸收高于CPA,小鼠血清中CPC在吸收峰值时Hyp的浓度是CPA的1.39倍,采用三重四级杆质谱(TSQ)从CPC灌胃后小鼠血清中检测出含Hyp的寡肽(Ser-Hyp-Gly、Pro-Hyp-Gly、Leu-Hyp),3种寡肽分别是CPA灌胃后小鼠血清中浓度的2.1、1.48和1.51倍,初步证明了氨基酸组成是影响胶原蛋白肽在小鼠体内吸收的重要因素。; 曹玮孔英俊康跻耀孙坤查圣华张贵锋王明林; 关键词：胶原蛋白肽离子交换氨基酸组成分析碱性氨基酸

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孙坤