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张玲玲: 作品数：16 被引量：47H指数：4; 供职机构：黑龙江八一农垦大学更多>>; 发文基金：国家自然科学基金黑龙江省自然科学基金“十二五”国家科技计划农村领域更多>>; 相关领域：农业科学医药卫生生物学社会学更多>>

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C基因型牛副流感3型病毒分离株全基因组测序及分析被引量：2: 2016年; 目的对宁夏地区分离得到的1株C基因型牛副流感3型病毒(bovine parainfluenza 3 virus,BPIV3)进行全基因组测序,并进行同源性及进化树分析。方法参考Gen Bank上登录的BPIV3中国分离株SD0835基因组序列设计5对引物,覆盖病毒基因组全长,提取BPIV3总RNA,以其为模板,进行RT-PCR扩增,扩增产物与p MD誖18-T Vector连接,连接产物转化大肠埃希菌DH5α感受态细胞,将阳性克隆进行核苷酸测序,测序结果通过分子生物学软件进行拼接,并与Gen Bank上登录的参考序列进行比较,构建系统进化树。结果成功分离得到1株BPIV3,命名为NX49,NX49株全基因组核酸序列为15 474 nt,提交至Gen Bank的序列号为KT071671。NX49与中国山东C型分离株SD0835的同源性最高,为99.3%;与中国内蒙古A型分离株NM09的同源性为82.5%;与澳大利亚B型分离株Q5592的同源性为81.4%。结论 NX49与SD0835同属一个进化分枝,但由于地域及时间上的不同,可能造成它们之间在基因水平上存在差异。; 冉旭华张峣卢元赫曹思张玲玲刘阳阳倪宏波闻晓波; 关键词：全基因组 C基因型测序

铝佐剂的作用机制研究进展被引量：5: 2016年; 随着亚单位疫苗、合成肽疫苗等新型疫苗的出现,免疫佐剂的研究也逐渐得到人们关注,铝佐剂作为唯一被应用于人用疫苗的佐剂,其作用机制尚未完全明确。随着研究的深入,早期的部分理论也面临诸多质疑。本文结合近年来对铝佐剂自身性质、作用机制等研究数据进行论述,以求促进对铝佐剂作用机制的深入了解和应用。; 闻晓波张玲玲冉旭华; 关键词：佐剂铝佐剂

中华优秀传统文化融入新时代家庭家教家风建设的路径探析: 2024年; 中华优秀传统文化是中华民族的“根”和“魂”,是中华民族最独特的精神标识,承载着中华民族伟大复兴的历史使命。家庭家教家风建设是新时代中国特色社会主义精神文明建设的重要组成部分,中华优秀传统文化蕴含着丰富的家庭伦理观念和家庭教育方法,为新时代家庭家教家风建设提供了丰富的资源。新时代家庭家教家风建设,应以优秀传统文化为指引,继承和发扬中华优秀传统文化中蕴含的道德思想和价值观念,结合现代家庭实际情况,构建家校社协同育人机制,创新家庭家教家风建设的方法和途径。; 张玲玲; 关键词：中华优秀传统文化

C基因型牛副流感3型病毒的分离鉴定被引量：6: 2016年; 为了对宁夏地区患有呼吸系统疾病的舍饲牛进行病原鉴定,试验主要利用RT-PCR方法对样品进行牛副流感3型病毒(BPIV3)M基因序列扩增,将扩增产物连接在pMD18-T载体后转化到大肠杆菌DH5α感受态细胞中进行亚克隆。通过氨苄青霉素平板筛选,将鉴定为阳性的克隆菌进行核苷酸序列测定并利用分子生物学软件与GenBank上参考序列进行同源性比对。测序结果表明,从样品中分离到了1株BPIV3,并命名为NX49,其M基因全长为1 056bp;进化分析表明,NX49隶属于BPIV3C基因型,其M基因与中国山东C型分离株SD0835具有较高同源性,核苷酸同源性为99.4%;理化分析表明,该毒株对温度、酸及有机物均敏感,高温孵育下Mg2+对该病毒无保护力;血凝试验表明,NX49对豚鼠红细胞凝集效价仅为1∶4,且仅在4℃孵育时出现凝集反应。本研究成功分离得到一株BPIV3C型毒株,这将有助于中国BPIV3分子进化规律及病毒流行特点的进一步研究。; 冉旭华张峣曹思卢元赫张玲玲刘阳阳倪宏波朱战波闻晓波; 关键词：C基因型

牛副流感病毒3型Q-PCR及间接ELISA方法的建立: 牛副流感病毒3型(Bovine parainfluenza virus type 3,BPIV3)为单股负链RNA病毒,副黏病毒科、呼吸道病毒属成员,与牛疱疹病毒I型(Bovine herpes virus I,Bo H...; 张玲玲; 关键词：Q-PCR 间接ELISA NP基因; 文献传递

牛轮状病毒VP6蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备被引量：4: 2016年; 目的原核表达牛轮状病毒(rotavirus,RV)VP6蛋白,并制备其多克隆抗体。方法根据Gen Bank中登录的牛RV UK株VP6基因序列(X53667.1)设计一对特异性引物,RT-PCR扩增牛RV UK株VP6全长编码区片段,克隆至载体p ET-28a,构建重组表达质粒p ET-28a-Bo-RV-VP6,转染至E.coli Rosetta(DE3),IPTG诱导表达,重组蛋白进行SDS-PAGE和Western blot分析。将重组蛋白与弗氏佐剂混合后免疫豚鼠,共免疫3次,每次间隔2周,末次免疫后2周,经心脏采血,分离血清,制备VP6多克隆抗体,Western blot法检测其与牛RV的反应原性。结果经双酶切和测序鉴定,重组表达质粒p ET-28a-Bo-RV-VP6构建正确。重组蛋白以包涵体的形式表达,表达产物分别为43 000、34 000、27 000和15 000 4种不同相对分子质量的重组蛋白,纯化后纯度可达95%以上,可与牛RV阳性血清发生特异性反应。制备的VP6蛋白多克隆抗体效价>1∶7 000,且可识别RV天然VP6蛋白。结论原核表达了牛RV VP6蛋白,并制备了抗VP6多克隆抗体,为后续RV疫苗效力评价及RV侵入机理等方面的研究奠定了基础。; 冉旭华曹思刘阳阳张玲玲张峣倪宏波闻晓波; 关键词：牛轮状病毒 VP6基因原核细胞基因表达多克隆抗体

G6P[5]型牛轮状病毒的分离鉴定被引量：17: 2016年; 轮状病毒(Rotavirus,RV)是全世界范围内引发多种幼龄动物及婴幼儿病毒性腹泻的最主要病原之一,给畜牧业发展和人类健康造成严重危害。通过RT-PCR对来自宁夏犊牛腹泻粪样进行检测,选取阳性样品经MA104细胞进行病毒分离。细胞盲传4代后出现CPE,至7代后细胞CPE现象明显,获得1株牛轮状病毒,扩增VP7、VP4基因并测序分析,结果表明该分离株属于G6P[5]型轮状病毒,命名为NX28。研究明确了G6P[5]型在国内牛群中的存在及流行,并为下一步的牛轮状病毒的分子流行病学研究奠定基础。; 闻晓波张玲玲倪宏波刘阳阳曹思冉旭华; 关键词：轮状病毒基因型

牛副流感病毒3型血凝素-神经氨酸酶蛋白在杆状病毒中的表达被引量：4: 2016年; 目的在杆状病毒中表达牛副流感病毒3型(bovine parainfluenza virus type-3,BPIV-3)血凝素-神经氨酸酶蛋白(hemagglutinin-neuraminidase,HN)。方法提取BPIV-3 BN-1株RNA,设计特异性引物扩增HN全长ORF,将其克隆至杆状病毒供体载体p Fast Bac HTA中,获得重组供体质粒p Fast Bac-HN。将p Fast Bac-HN转化至感受态细胞E.coli DH10Bac,制备穿梭质粒Bacmid-HN。将纯化的Bacmid-HN经脂质体转染至Sf21昆虫细胞,拯救重组杆状病毒,并进行Western blot鉴定。结果经PCR及测序鉴定证明,HN基因重组供体质粒p Fast Bac-HN及穿梭质粒Bacmid-HN构建正确。利用Sf21昆虫细胞成功拯救重组杆状病毒,连续传代扩增3代的病毒滴度为2×108 CPE/ml。重组HN蛋白的相对分子质量约70 000,可与BPIV-3阳性血清发生特异性反应。结论在杆状病毒表达系统中成功表达了BPIV-3重组HN蛋白,为BPIV-3的诊断及疫苗效力评价奠定了基础。; 卢元赫张玲玲张峣任博雯祝子涵冉旭华倪宏波刘阳阳李维香闻晓波; 关键词：杆状病毒真核细胞基因表达

猪轮状病毒重组VP8*蛋白的原核表达及免疫原性分析被引量：5: 2015年; 为了分析原核表达的猪轮状病毒（PRV）Gottfried株截短的VP8＊（△VP8＊aa64—223）重组蛋白的免疫原性，通过构建原核表达载体pET-28a—Gotffried—△VP8＊（aa64—223），转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞，IPTG诱导表达、经SDS—PAGE和Westernblotting检测，并纯化后，肌肉免疫Balb／c小鼠，证明重组蛋白相对分子质量约25．0kDa，以包涵体和可溶性两种形式存在，纯化的重组蛋白纯度在95％以上，可溶性蛋白产量可达14～15mg·L-1。ELISA方法检测表明该重组蛋白可以诱导高滴度的特异性抗体，证明其具有良好的免疫原性，为进一步研制PRV亚单位疫苗及建立ELISA诊断方法奠定基础。; 毕艳铎魏晓曼冉旭华曹思张峣张玲玲苗艳闻晓波; 关键词：猪轮状病毒原核表达

破伤风毒素T细胞表位P2对猪轮状病毒△VP8^＊蛋白免疫原性的增强作用被引量：1: 2016年; 仔猪轮状病毒腹泻严重危害养猪业，为了开发亚单位疫苗，本课题组前期构建了猪轮状病毒SB-1A株截短的VP8^＊蛋白（△VP8^＊，64～223位氨基酸）原核表达载体pET28a—SB1A△VP8^＊。为了进一步提高亚单位疫苗的免疫原性，将破伤风毒素的通用T细胞表位P2引入重组亚单位蛋白，构建重组载体pET28a—P2-SB-IA△VP8^＊。P2-S13-1A△VP8^＊和S13-1A△VP8^＊在大肠杆菌中表达并纯化。重组蛋白与氢氧化铝佐剂混合后经肌肉注射免疫Balb／c小鼠，利用间接ELISA法检测免疫小鼠的血清抗体水平。结果显示：P2-S13-1A△VP8^＊和S昏1A△VP8^＊在大肠杆菌中得到了高水平、可溶性表达；重组蛋白P2-SB-1A△VP8^＊诱导的血清抗体水平显著高于SB-1A△VP8^＊，说明P2可以增强SB-1A△VP8^＊的免疫原性，为日后开发猪轮状病毒亚单位疫苗奠定了基础。; 闻晓波魏晓曼冉旭华曹思张峣倪宏波张玲玲; 关键词：猪轮状病毒 T细胞表位 P2

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