谭鹏
- 作品数：5 被引量：2H指数：1
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- 抗家蚕BmGATA6多克隆抗血清的制备方法及多克隆抗血清与应用
- 本发明提供一种抗家蚕BmGATA6多克隆抗血清的制备方法及由其制备的多克隆抗血清与应用。其中，所述方法包含采用SEQ ID NO:1所示序列表示的抗原通过动物免疫获得所述抗家蚕BmGATA6多克隆抗血清。所述抗原通过下述...
- 崔红娟徐曼谭鹏杨丽群向仲怀
- 文献传递
- 家蚕GATA转录因子BmGATA6的抗体制备及其在中肠中的功能分析
- 家蚕作为一种良好的鳞翅目模式生物，在其变态发育中发生着大量的细胞凋亡过程，是作为细胞凋亡研究的一个理想材料。此外在哺乳动物的研究中发现，GATA6上调会促进Bax蛋白的表达，引起细胞凋亡。而在斑马鱼中的研究发现，GATA...
- 谭鹏
- 关键词：家蚕
- 家蚕GATA转录因子BmGATA6的克隆、多克隆抗体制备及组织细胞定位被引量：1
- 2016年
- 【目的】克隆家蚕(Bombyx mori)GATA转录因子BmGATA6,将其在原核细胞中进行表达,纯化重组蛋白,多次免疫小鼠获得BmGATA6多克隆抗体,为进一步分析BmGATA6在家蚕变态发育中的功能提供抗体条件。【方法】解剖家蚕获得5龄第3天的各组织及4眠至熟蚕整个时期的中肠组织,在液氮中研磨为粉末,利用Trizol法提取RNA,体外反转录得到c DNA。基于家蚕BmGATA6的基因编码序列设计全长特异引物,并以Bm Actin3作为内参,进行家蚕5龄第3天各组织及4龄眠期至熟蚕期各时期的RT-PCR检测。设计原核表达引物,扩增原核表达片段连接到p ET32a载体上,构建原核表达载体,转化至BL21(DE3)Escherichia coil表达菌株。加入IPTG至终浓度分别为0.4、0.6、0.8、1.0 mmol·L^(-1)。在16℃条件下培养20 h和37℃条件下培养5 h分别进行BmGATA6蛋白诱导表达。选取最佳诱导条件进行BmGATA6蛋白的大量诱导,用镍柱亲和层析法纯化家蚕BmGATA6蛋白,经多次免疫昆明小鼠后,最终获得BmGATA6多克隆抗体。利用ELISA法测定鼠抗BmGATA6蛋白多克隆抗体的效价,通过Western blot检测BmGATA6抗体的特异性。以家蚕5龄第6天中肠的石蜡切片作为样本,通过免疫荧光对家蚕中肠组织中的BmGATA6蛋白进行亚细胞定位。【结果】家蚕GATA转录因子BmGATA6的c DNA全长4 011bp,ORF长为1 974 bp,编码657个氨基酸,包括205 bp的5′非翻译区序列(5′UTR)和1 832 bp的3′非翻译区序列(3′UTR)。该基因位于15号染色体上,基因全长12 326 bp,为多外显子基因,共含有8个外显子和7个内含子,具有2个典型的GATA锌指结构域,分别位于第470—521和531—582氨基酸区域。RT-PCR结果显示BmGATA6在5龄第3天家蚕中肠中显著高量表达,其次在马氏管中有少量表达,而在其他组织中没有检测到BmGATA6的表达。同时RT-PCR结果显示BmGATA6在4龄眠期到熟蚕期的中肠组织中持续高表达。构建BmGATA6原核表达载体,通过不同温
- 谭鹏徐曼梁航华张亚军胡仁建崔红娟
- 关键词：家蚕原核表达多克隆抗体亚细胞定位
- 抗家蚕BmGATA6多克隆抗血清的制备方法及多克隆抗血清与应用
- 本发明提供一种抗家蚕BmGATA6多克隆抗血清的制备方法及由其制备的多克隆抗血清与应用。其中，所述方法包含采用SEQ ID NO:1所示序列表示的抗原通过动物免疫获得所述抗家蚕BmGATA6多克隆抗血清。所述抗原通过下述...
- 崔红娟徐曼谭鹏杨丽群向仲怀
- 文献传递
- 家蚕BmBrat基因的克隆与鉴定被引量：1
- 2016年
- NHL家族蛋白具有调控细胞增殖与分化的功能,在哺育动物中被广泛研究。本文克隆得到家蚕NHL蛋白家族成员BmBrat基因,通过RACE技术获得该基因cDNA全长序列为3 614 bp,其ORF为2 580 bp,编码859个氨基酸,预测其蛋白分子量为94.3 kDa,等电点为6.65。利用RT-PCR技术检测其在五龄3 d家蚕各组织表达情况,结果表明其在幼虫各组织均有表达,包括丝腺、中肠、脂肪体、马氏管等,且卵巢和头部表达量最高;胚胎时期表达谱分析显示其在胚胎发育第4天和第5天有高量表达。经原核表达、蛋白纯化及免疫小鼠后获得家蚕BmBrat多克隆抗体,且Western blotting及免疫荧光检测显示该抗体可以特异检测家蚕BmBrat蛋白;免疫荧光结果表明BmBrat蛋白定位于家蚕血细胞胞质中,为进一步研究BmBrat基因的生物学功能奠定了基础。
- 梁航华高洪燕徐曼谭鹏崔红娟
- 关键词：家蚕表达谱抗体制备亚细胞定位
