邵霞
- 作品数：4 被引量：23H指数：3
- 供职机构：上海交通大学医学院附属仁济医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市科委重大科技攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- shRNA干扰己糖激酶Ⅱ基因表达对人淋巴瘤细胞恶性生物学行为的影响被引量：5
- 2017年
- 目的 :观察shR NA干扰己糖激酶(hexokinase,HK)Ⅱ基因表达对人淋巴瘤Raji和SU-DHL-4细胞代谢、增殖、凋亡及耐药的影响,初步评价HKⅡ基因靶向治疗在淋巴瘤中的潜在应用前景。方法 :构建慢病毒介导的shRNA靶向干扰HKⅡ基因表达的淋巴瘤细胞株Raji和SU-DHL-4(HKⅡshRNA转染组),同时设置阴性shRNA转染对照组。采用实时荧光定量PCR法和蛋白质印迹法分别检测细胞中HKⅡmRNA和蛋白的表达水平。锥虫蓝拒染法检测细胞存活数并绘制生长曲线;CCK-8法检测多柔比星(doxorubicin,DOX)对淋巴瘤细胞的半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)。FCM法分析细胞周期分布及细胞凋亡。蛋白质印迹法检测细胞中凋亡相关蛋白caspase-3及其剪切体、Bcl-2和Bcl-6的表达;分别应用乳酸和葡萄糖检测试剂盒检测细胞培养上清液中乳酸和葡萄糖的浓度。结果 :与空质粒转染对照组细胞相比,HKⅡshRNA转染组细胞中HKⅡmRNA及蛋白的表达水平均明显降低(P值均<0.05)。shRNA干扰HKⅡ基因表达能抑制2种淋巴瘤细胞的增殖活性(P值均<0.01),并使细胞周期阻滞在G0/G1期(P值均<0.05),同时促进细胞凋亡(P值均<0.01)。与对照组细胞相比,HKⅡ基因沉默可降低DOX对2种淋巴瘤细胞的IC50值(P值均<0.05),抑制细胞中葡萄糖消耗(P值均<0.05),减少乳酸生成(P值均<0.01)。与对照组细胞相比,HKⅡshRNA转染后2种淋巴瘤细胞中Bcl-2蛋白的表达水平明显降低(P值均<0.05),而caspase-3剪切体表达水平明显升高(P值均<0.05);加入DOX作用后,2种淋巴瘤细胞的Bcl-2表达水平无明显差异(P值均>0.05),但HKⅡshRNA转染组细胞中caspase-3前体蛋白表达水平明显降低(P值均<0.01),而caspase-3剪切体表达水平升高更加明显(P值均<0.05)。结论 :shRNA干扰HKⅡ基因表达可抑制淋巴瘤细胞增殖,促进细胞凋亡,纠正细胞糖酵解代谢表型,提高细胞对化疗药物DOX的敏感性。提示HKⅡ基因可
- 许壁榆邵霞张义炜蔡佳翌陈芳源王婷
- 关键词：糖酵解
- 硼替佐米联合有氧氧化抑制剂寡霉素靶向Burkitt淋巴瘤细胞Raji的杀伤作用及机制被引量：4
- 2016年
- 目的 :研究硼替佐米(bortezomib,BTZ)联合寡霉素(oligomycin,OM)对Burkitt淋巴瘤Raji细胞增殖及凋亡的影响,并探讨可能的作用机制。方法:采用不同浓度的BTZ(0、5、10、15、20、25和30 nmol/L)单药或联合OM(0.05μg/m L)作用于Raji细胞,CCK-8法检测对细胞增殖抑制率的影响;实时荧光定量PCR法和蛋白质印迹法检测原癌基因C-myc、缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)及其靶基因血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和葡萄糖转运体1(glucose transporter 1,GLUT1)m RNA及蛋白的表达,以及代谢途径中关键酶己糖激酶Ⅱ(hexokinaseⅡ,HKⅡ)、乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDHA)和琥珀酸脱氢酶(succinate dehydrogenase,SDHA)m RNA及蛋白表达水平的变化;葡萄糖检测试剂盒[己糖激酶(hexokinase,HK)法]和乳酸检测试剂盒分别检测Raji细胞培养液中葡萄糖和乳酸浓度的改变;FCM法检测细胞周期分布及细胞凋亡的改变。结果 :不同浓度的BTZ单药作用于Raji细胞后,可明显抑制Raji细胞的增殖且呈剂量依赖性(P值均<0.01)。BTZ(5、10、15和20 nmol/L)联合OM对Raji细胞的增殖抑制率显著高于BTZ单药组(P值均<0.01)。BTZ单药作用于Raji细胞后,可不同程度抑制细胞中C-myc、HIF-1α、VEGF、GLUT1、HKⅡ、LDHA及SDHA m RNA及蛋白的表达;联合OM处理Raji细胞后,代谢相关基因m RNA及蛋白的表达水平进一步下调(P值均<0.05)。联合用药组抑制葡萄糖消耗及糖酵解代谢产物乳酸生成的能力明显高于BTZ单药组(P值均<0.05)。BTZ单药组能明显促进Raji细胞的凋亡且呈剂量依赖性,BTZ浓度为25 nmol/L时,Raji细胞主要被阻滞于G2/M期;而联合用药组能进一步提高细胞的凋亡率,BTZ浓度为5和15 nmol/L时,Raji细胞主要被阻滞于G0/G1期。结论 :BTZ可抑制Raji细胞的糖酵解通路,联合OM可协同增强这一抑制作用,这种协同机制可能与2种药物联用后,可同时抑制糖酵解及有氧氧化�
- 邵霞蔡佳翌许壁榆钟济华陈芳源王婷
- 关键词：硼替佐米糖酵解
- 2-脱氧-D-葡萄糖抗肿瘤作用机制及联合应用治疗肿瘤的研究进展被引量：3
- 2016年
- 肿瘤细胞和正常组织细胞具有许多相似的细胞表型特征,因此如何增强治疗的靶向性极为重要。沃伯格效应是指肿瘤细胞在有氧条件下仍依赖糖酵解,而2-脱氧-D-葡萄糖(2DG)是最常用的糖酵解抑制剂,能特异性地抑制恶性细胞增殖、侵袭、迁移和黏附并增强免疫原性。由于单独应用2DG所需剂量较大使其在临床推广受限,故现研究多着手于2DG与传统化疗药物的联用或与其他代谢抑制剂及新药合用。
- 邵霞王婷
- 关键词：肿瘤糖酵解
- 阿霉素对斑马鱼心脏毒性的评估及机制探索被引量：12
- 2016年
- 目的 :通过观测阿霉素致斑马鱼胚胎产生心脏毒性的表型,及联用右丙亚胺保护剂,建立实验室心脏毒性药物评价及研究的模型。方法:选择受精后24 h的AB系野生型斑马鱼胚胎,分别暴露于不同浓度的阿霉素中后,选择心脏毒性表型最明显的阿霉素浓度,将其分别联用或不联用右丙亚胺作用48 h。在斑马鱼胚胎发育至受精后72 h时,在显微镜下观察其心血管系统的形态学改变,记录心率变化,并分别抽提斑马鱼胚胎RNA,检测心脏发育相关基因及氧化、抗氧化相关指标。结果:随着阿霉素浓度的升高,斑马鱼出现了如胚胎发育畸形、心包水肿等改变,且死亡率升高,心脏毒性表型最明显的阿霉素浓度为64.40μmol/L,而联用右丙亚胺(130.47μmol/L、260.93μmol/L)则可有效挽救阿霉素对斑马鱼心脏的毒性作用,并可分别将其胚胎生存率由35%显著提升至90%和88.3%(P<0.001)。通过反转录聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测斑马鱼心脏发育相关基因NK2转录因子相关基因5、心肌肌球蛋白轻链2、心房肌球蛋白重链、心室肌球蛋白重链,均未发现显著改变。检测氧化抗氧化指标后发现,64.40μmol/L的阿霉素可致斑马鱼胚胎丙二醛含量显著上升(P<0.001),超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性则明显下降(P<0.001),而右丙亚胺可有效清除丙二醛并恢复SOD活性。结论:成功建立了斑马鱼评价心脏毒药物的模型。阿霉素对斑马鱼胚胎的心脏毒性呈浓度依赖性增加,且与斑马鱼胚胎死亡率亦呈正相关,而右丙亚胺则可有效挽救阿霉素致斑马鱼胚胎的心脏毒性,并降低其死亡率,且此作用与斑马鱼心脏发育相关基因无关,但与氧化及抗氧化通路有明显的相关性。
- 徐卓然陈芳源沈莉菁钟济华郎雯竞邵霞
- 关键词：阿霉素右丙亚胺心脏毒性
