- 人IL-29定点突变体抗肿瘤细胞增殖活性分析
- 2017年
- 为分析人白细胞介素-29(h IL-29)变异体抗肿瘤细胞增殖活性,采用大引物PCR方法对人h IL-29基因第104位碱基进行点突变,使h IL-29肽链第35位Arg定点改造为Lys。得到的h IL-29变异体基因经重组后转化毕赤酵母GS115和诱导表达,经纯化获得重组蛋白rh IL-29mut35。SDS-PAGE分析显示rh IL-29mut35的相对分子质量约23×103,Western Blotting鉴定显示其与羊抗人IL-29多克隆抗体发生特异性结合反应。用CCK-8试剂检测rh IL-29mut35对肿瘤细胞增殖的影响,rh IL-29mut35在不同质量浓度时对胃癌细胞SGC7901、肝癌细胞BEL7402、肺腺癌细胞A549和结肠癌细胞HCT8的增殖均有抑制作用,高剂量组(1 000 ng/m L)rh IL-29mut35对胃癌细胞SGC7901、肝癌细胞BEL7402、肺腺癌细胞A549和结肠癌细胞HCT8增值的抑制率分别为(34.20±1.50)%、(27.30±0.31)%、(30.20±0.68)%、(29.13±1.40)%,与阴性对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01)。而且高剂量组的抗增殖效应高于野生型rh IL-29的(P<0.01),这为进一步研制开发IL-29的抗肿瘤药物奠定基础。
- 李利云陆源葛春蕾彭荣刚李昕哲谭敬陈永康陈伟
- 关键词：定点突变重组蛋白抗肿瘤活性
- 人IL-29第43位Lys的定点突变及抗肿瘤活性初步分析被引量：1
- 2016年
- 为获得人白介素-29(h IL-29)变异体并考察其对肿瘤细胞增殖的影响,基于对h IL-29成熟肽生物信息学的分析结果,通过大引物PCR方法将其肽链第43位赖氨酸(Lys)编码基因进行定点突变。将得到的h IL-29变异体基因插入质粒p PIC9KM,构建重组真核表达质粒p PIC9KM-h IL-29^(mut43),导入毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115,经G418筛选得到高产菌株p PIC9KM-h IL-29^(mut43)/GS115,用甲醇诱导表达重组蛋白rh IL-29^(mut43)。检测rh IL-29^(mut43)对肿瘤细胞增殖的影响,结果显示该重组蛋白对结肠癌细胞HCT8、肺腺癌细胞A549、胃癌细胞SGC7901和肝癌细胞BEL7402的增殖均有抑制作用,且高浓度(1 000 ng/ml)下对上述4种肿瘤细胞的增殖抑制作用更强,增殖抑制率分别为(18.45±0.83)%、(27.14±2.99)%、(29.94±1.95)%和(25.22±0.42)%。与阴性对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01)。且其抑制增殖效应强于野生型h IL-29和阳性对照药人干扰素(IFN)-a2b。
- 李利云李昕哲彭荣刚谭敬陈伟
- 关键词：重组蛋白抗增殖抗肿瘤活性
