李玲慧
- 作品数：72 被引量：523H指数：14
- 供职机构：中国中医科学院望京医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 基于网络药理学探讨黄芪-当归药对治疗膝骨关节炎的作用机制研究被引量：10
- 2021年
- 目的利用网络药理学的方法,建立黄芪-当归药对的"活性成分-作用靶点-通路"的网络图,对作用靶点的基因功能和通路进行富集分析,探讨黄芪-当归药对治疗膝骨关节炎(KOA)的作用机制。方法通过检索中药系统药理学数据库及分析平台(TCMSP)、台湾中医药资料库获得黄芪-当归药对的主要活性成分,采用SwissTargetPrediction预测活性成分的潜在靶点,同时利用OMIM、TTD、DiGSeE 3个疾病靶点数据进行比对,获得膝骨关节炎的核心作用靶点。借助STRING在线数据库进行蛋白质与蛋白质相互作用(PPI)网络的构建与分析。借助David数据库对作用靶点的GO(Gene ontology)注释和KEGG通路进行富集分析。最后通过Cytoscape 3.7.1构建黄芪-当归药对的"活性成分-作用靶点-通路"网络图,探究黄芪-当归药对治疗膝骨关节炎可能的靶点及作用机制。结果黄芪-当归共14个核心活性成分、61个重要作用靶点与其治疗膝骨关节炎密切相关。主要涉及黄芪-当归的核心化合物有槲皮素(quercetin)、刺芒柄花素(formononetin)、华良姜素(Jaranol)、β-谷甾醇(β-sitosterol)、山柰酚(kaempferol)、7-O-甲基异丙醇胺(7-O-methylisomucronulatol)、Inermine、异鼠李素(isorhamnetin)等;PPI网络图显示靠前的核心靶标有肿瘤蛋白p53(TP53),丝裂原活化蛋白激酶(MAPK),血管内皮生长因子A(VEGFA)、前列腺素内过氧化物合酶(PTGS),CJun氨基端激酶(JUN)、表皮细胞生长因子(EGF)、CC趋化因子配体2(CCL2)等;GO注释分析结果表明黄芪-当归活性成分具有促进细胞增殖,提高蛋白质结合活性、酶激活反应的作用;KEGG结果表明黄芪-当归药对发挥主要作用可能与PI3K-Akt信号通路(PI3K-Akt signaling pathway)、肿瘤坏死因子(TNF signaling pathway)、MAPK信号通路(MAPK signaling pathway)、血管内皮生长因子(VEGF signaling pathway)等信号通路有关。结论黄芪-当归药对可以通过多种途径,多种信号通路�
- 李凯明朱立国王尚全王尚全李玲慧展嘉文陈明谢瑞殷京
- 关键词：膝骨关节炎靶点网络药理学
- 不同浓度的Chir99021对软骨细胞增殖和Ⅱ型胶原表达的影响被引量：5
- 2016年
- 目的:探讨不同浓度的Wnt/β-catenin信号通路激活剂Chir99021对体外培养的大鼠软骨细胞增殖和Ⅱ型胶原表达的影响。方法:新生24hSD大鼠8只(雌雄不限),取出关节软骨进行软骨细胞培养,细胞培养48h后进行软骨细胞免疫荧光鉴定。以不同药物浓度将软骨细胞分为四组,分别加入浓度为0.00μmol/L(对照组),0.75μmol/L,1.50μmol/L,3.00μmol/L的Wnt/β-catenin信号通路激活剂Chir99021进行干预。24h后分别观察不同浓度组细胞形态的变化,蛋白印迹分析法(Western blot)检测Ⅱ型胶原、β-catenin和PCNA蛋白的表达情况。结果:在0.00μmol/L(对照组),0.75μmol/L,1.50μmol/L,3.00μmol/L的Wnt/β-catenin信号通路激活剂Chir99021干预下,各组细胞数量明显逐渐增加,与对照组相比较,各加药组β-catenin和PCNA蛋白的表达逐渐上调(P<0.05),而Ⅱ型胶原蛋白的表达逐渐下降(P<0.05)。结论:不同浓度的Chir99021激活Wnt/β-catenin信号通路后明显促进了软骨细胞的增殖,却抑制了软骨细胞分泌的Ⅱ型胶原。
- 杜国庆丁道芳李玲慧宋奕王辉昊张玉民郑昱新詹红生
- 关键词：WNT/Β-CATENIN软骨细胞增殖
- 补肾活血方治疗骨性关节炎疗效的Meta分析被引量：6
- 2017年
- 目的系统评价补肾活血方治疗骨性关节炎的有效性和安全性。方法搜集与补肾活血方治疗骨性关节炎相关的随机对照研究,将纳入的研究按照Cochrane协作网推荐的方法评价其方法学质量,对纳入研究的测量指标通过Revman 5.3软件进行相关统计学分析。结果经筛选后共纳入19项研究,共计2638例患者;Meta分析结果显示:单独服用或加服补肾活血方与单纯西医疗法相比其治疗总有效率[RR=1.14,95%CI(1.07,1.21)],疼痛减轻程度[RR=-0.76,95%CI(-0.93,-0.6)],药物不良反应发生率[RR=0.26,95%CI(0.11,0.63)],差异有统计学意义;倒漏斗图显示不对称。结论补肾活血方治疗骨性关节炎具有一定的疗效和优势。但本系统评价存在样本量小、低质量纳入研究较多以及各研究间异质性较大等不足,因此今后有必要开展大样本、高质量的随机对照试验进行验证。
- 尹逊路朱立国冯敏山李玲慧李学朋于杰银河魏戌
- 关键词：补肾活血方骨性关节炎随机对照试验META分析
- 基于从筋治骨理论的康复锻炼对膝骨关节炎的疗效观察被引量：16
- 2017年
- 目的:基于从筋治骨的中医理论,观察自主康复锻炼对膝骨性关节炎的有效性和安全性。方法:门诊收治90例膝骨关节炎患者,分为试验组45例和对照组45例。试验组男11例,女34例;年龄45~70岁,平均(55.47±8.66)岁;病程1周~5年,平均(6.66±7.96)周;对照组男11例,女34例;年龄48~67岁,平均(54.07±5.36)岁;病程1周~7年,平均(4.82±3.95)周。在股四头肌等长训练的基础上,试验组采用自主功能锻炼的干预方法 ,对照组则采用器械训练方法,共治疗2周。分别于治疗前、治疗后采用VAS、Lysholm评分和愈显率对两组临床疗效进行评价。结果:经过2周治疗,试验组的愈显率(86.67%)显著高于对照组(71.11%)。两组患者的VAS评分和Lysholm评分均较治疗前显著改善(P<0.05),其中试验组均优于对照组(P<0.05),两组均无严重不良事件。结论:自主功能锻炼联合股四头肌等长训练的康复方案对KOA临床疗效确切,且无严重不良反应发生。
- 闫安张宽秦伟凯郭江舟李玲慧陈明王尚全
- 关键词：膝骨关节炎康复病例对照研究
- 温肾阳、滋肾阴中药复方对大鼠成骨细胞活性及Wnt/β-catenin通路影响的差异被引量：29
- 2015年
- 目的:观察温肾阳、滋肾阴中药复方对大鼠成骨细胞影响的差异以及相关的分子生物学机制。方法:提取新生SD大鼠颅盖骨处的成骨细胞,分为3组:右归丸组、左归丸组及对照组,分别诱导培养7d后进行碱性磷酸酶(ALP)染色;并检测β-catenin及糖原合成激酶-3β(GSK-3β)蛋白的表达差异。结果:ALP染色结果显示,右归丸组及左归丸组均有大量阳性颗粒,多于对照组;其中右归丸组细胞培养皿大面积蓝黑色深染,优于左归丸组。蛋白免疫印迹法显示,右归丸可显著上调β-catenin蛋白表达(P<0.05)、下调GSK-3-β蛋白表达(P<0.05),较左归丸更为显著(P<0.05)。结论:温肾阳复方右归丸可通过激活Wnt/β-catenin信号通路提高成骨细胞分泌ALP的能力。
- 李玲慧詹红生丁道芳赵咏芳杜国庆石印玉
- 关键词：温肾阳成骨细胞左归丸右归丸
- 补肾活血方对兔退变椎间盘模型MMP-3表达影响被引量：3
- 2020年
- 目的观察补肾活血方对兔退变椎间盘组织形态结构及MMP-3表达的影响。方法选取3月龄健康兔共40只,随机分为5组,每组8只,依次为对照组、模型组、中药低剂量组、中剂量组和高剂量组,除正常对照组外,其余兔均行椎间盘退变造模术。造模后3 d开始给药,对照组及模型组每日以生理盐水灌胃代替中药,中药低、中、高剂量组补肾活血方每日灌胃,连续给药8周。采用HE染色、免疫组化染色等检测方法观察椎间盘组织形态学变化,并运用PCR法检测MMP-3表达水平。结果HE染色显示:药物干预后,低剂量组髓核细胞数量变化不明显,纤维环及髓核存在裂隙,中、高剂量组细胞数量较低剂量组显著增加;免疫组化染色显示:与模型组相比,中药低剂量组MMP-3表达未见明显变化(P>0.05);中剂量组和高剂量组MMP-3的表达均有显著下调(P<0.05);PCR法检测法显示:与模型组相比,中药干预后,椎间盘组织内增高的MMP-3表现出降低趋势,其降低程度与药物剂量呈正比,中剂量组及高剂量组的MMP-3表达量有统计学差异(P<0.05)。结论造模成功后MMP-3表达量显著上调,经补肾活血方干预后可抑制MMP-3的表达,说明补肾活血方可在一定程度上起到延缓椎间盘退变的作用。
- 李玲慧魏戌朱立国李凯明常德友冯敏山冯敏山于杰王尚全陈明
- 关键词：补肾活血方椎间盘退变MMP3
- 补肾活血方联合富血小板血浆介导Wnt信号通路调节脂肪间充质干细胞活性和功能被引量：3
- 2021年
- 目的探讨补肾活血方与富血小板血浆介导Wnt/β-catenin信号通路对共培养体系中脂肪间充质干细胞(ADSCs)增殖活性和功能表达作用的机制研究。方法取手术患者皮下脂肪组织及退变髓核组织,采用多次酶消化法原代分离、培养ADSCs及NPCs,建立细胞共培养体系。纳入腰椎间盘退变患者,连续服用补肾活血方2周,分别于初次服药前和末次服药后1 h抽取静脉血各50 mL,采用二次离心法制备富血小板血浆,以不同血浆干预培养,实验共分为5组:富血小板血浆组(PRP)、贫血小板血浆组(PPP)、含药富血小板血浆组(M-PRP)和含药贫血小板血浆组(M-PPP)、胎牛血清组(FBS)。倒置相差显微镜下观察共培养体系中细胞的形态变化;利用RT-PCR方法检测WNT3A、CTNNB1和MMP3 mRNA的表达情况;Western blotting法检测Wnt3a、β-catenin蛋白表达。结果倒置相差显微镜下显示,M-PRP组细胞以多角形或短梭形为主,细胞轮廓清晰、折光度较好。RT-PCR结果显示:与FBS组相比:PRP组WNT3A、CTNNB1表达量显著提高(P<0.05),MMP3达量显著下调(P<0.05);M-PRP组CTNNB1、MMP3表达量显著下调(P<0.05);PRP组基因表达量显著高于M-PRP组(P<0.05)。Western blotting法检测结果:与FBS组相比:PRP组、M-PRP组和M-PPP组β-catenin蛋白表达量显著下调(P<0.05)。结论补肾活血方与富血小板血浆联合应用可能通过抑制Wnt信号通路而发挥提高ADSCs细胞活性和功能的作用。
- 李凯明朱立国朱立国李玲慧张清杨少锋王尚全陈明展嘉文
- 关键词：补肾活血方富血小板血浆脂肪间充质干细胞WNT信号通路
- 补肾活血方联合富血小板血浆对脂肪间充质干细胞增殖活性和功能表达的影响被引量：3
- 2019年
- 目的:探讨补肾活血方联合富血小板血浆对共培养体系中脂肪间充质干细胞(ADSCs)增殖活性和功能表达的影响。方法:取手术患者皮下脂肪组织及退变髓核组织,采用多次酶消化法原代分离、培养ADSCs及NPCs,建立细胞共培养体系。纳入腰椎间盘退变患者,连续服用补肾活血方2周,分别于初次服药前和末次服药后1 h抽取静脉血,采用二次离心法制备富血小板血浆,以不同血浆干预培养,实验共分为5组:富血小板血浆组(PRP)、贫血小板血浆组(PPP)、含药富血小板血浆组(M-PRP)和含药贫血小板血浆组(M-PPP)、胎牛血清组(FBS)。倒置显微镜下观察共培养体系中细胞的形态变化;采用MTT法分别在干预24、48 h及72 h检测细胞增殖率;一周后采用甲苯胺蓝染色检测蛋白聚糖表达情况;两周后采用RT-PCR法检测细胞COL2A1、ACAN、SOX9基因表达水平。结果:本研究经原代消化分离、共培养体系中获得的细胞胞质体积略增大,形态由长梭形逐渐转变为短梭形或多角形为主,折光性较好。采用MTT法检测发现,与FBS组相比,PRP组及M-PRP组细胞增殖率显著提高(P<0.05)。甲苯胺蓝染色结果显示,M-PRP组、M-PPP组及PRP组细胞的数量及阳性染色率均明显高于PPP组和FBS组,其中M-PRP组的作用最显著。RT-PCR结果显示,与FBS组相比,PRP组和M-PRP组COL2A1 mRNA表达显著上调(P<0.05),其余组无明显变化(P>0.05);PRP组ACAN mRNA表达显著上调(P<0.05);PRP组和M-PRP组SOX9 mRNA表达量维持不变(P>0.05)。结论:补肾活血方联合富血小板血浆可以提高共培养体系中ADSCs细胞增殖活性,上调COL2A1、ACAN、SOX9的mRNA表达,促进成软骨分化,为椎间盘退变的治疗提供了新方向。
- 李玲慧李凯明杨少锋朱立国朱立国王尚全陈明展嘉文
- 关键词：补肾活血方富血小板血浆脂肪间充质干细胞增殖活性
- 股密葆含药血清对成骨细胞分化成熟的影响及其作用机制被引量：2
- 2014年
- 目的:探讨股密葆含药血清对成骨细胞分化成熟的影响及其作用机制。方法:将20只2月龄雌性SD大鼠随机分成4组,对照组8只,高、中、低浓度股密葆组各4只。对照组按10 mL·kg-1体质量以生理盐水灌胃,高浓度组按10 mL·kg-1体质量以2 430 mg·mL-1股密葆混悬液灌胃,中浓度组按10 mL·kg-1体质量以1 215 mg·mL-1股密葆混悬液灌胃,低浓度组按10mL·kg-1体质量以607.5 mg·mL-1股密葆混悬液灌胃。每天灌胃1次,连续3 d。末次灌胃后1 h提取各组实验大鼠含药血清,低温保存备用。将10只新生SD大鼠处死,取其颅骨,采用多次酶消化法分离出成骨细胞。将第1代成骨细胞分别在含有对照组大鼠血清及高、中、低浓度股密葆含药血清的培养基中培养1周后,采用染色法检测碱性磷酸酶表达情况,采用Western Blotting法检测Ⅰ型胶原、Runt相关转录因子2、β连环素及转录因子4的蛋白表达情况。结果:①成骨细胞中碱性磷酸酶的表达。与对照组比较,各浓度股密葆含药血清组碱性磷酸酶染色较深,其中中浓度组染色最深。②成骨细胞中Ⅰ型胶原蛋白的表达。对照组、高浓度组、中浓度组、低浓度组Ⅰ型胶原蛋白的表达量比较,差异有统计学意义[(1.172±0.047),(2.023±0.131),(2.792±0.737),(2.235±0.525),F=6.466,P=0.016]。组间两两比较,中浓度组、低浓度组高于对照组(P=0.003,P=0.022);高浓度组与对照组比较,差异无统计学意义(P=0.052);其余各组间比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。③成骨细胞中Runt相关转录因子2蛋白的表达。各组Runt相关转录因子2蛋白的表达量比较,差异有统计学意义[(1.968±0.263),(2.255±0.286),(2.675±0.181),(2.652±0.211),F=6.066,P=0.019]。组间两两比较,中浓度组、低浓度组高于对照组(P=0.007,P=0.008);高浓度组与对照组比较,差异无统计学意义(P=0.180);其余各组间比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。④成骨细胞中β连环蛋
- 宋奕丁道芳李玲慧杜国庆刘锦涛詹红生姜宏
- 关键词：股骨头坏死成骨细胞含药血清碱性磷酸酶Β连环素
- 丹酚酸A调控miR-940与miR-576-5p促进退变终板软骨细胞修复的作用研究
- 2023年
- 目的:观察丹酚酸A(salvianolic acid A,SAA)对退变终板软骨细胞(cartilaginous endplates cells,CEPCs)的干预作用,及其调控的潜在非编码RNA(micro-RNA,miRNA)作用靶点。方法:从腰椎间盘手术标本中分离CEPCs,用不同浓度SAA(2、5、10μM处理24、48、72 h,利用CCK-8检测细胞活性确定SAA的最适剂量和干预时间。通过阿利新蓝染色和对血小板反应蛋白解整合素金属肽酶-5(A disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin-5,ADAMTS-5)、基质金属肽酶3(matrix metallopepridase 3,MMP-3)、Ⅱ型胶原a1(clollagen typeⅡa1,Col2a1)的蛋白表达检测,分析SAA对IL-1β诱导的退变CEPCs的干预作用。进一步结合生信分析,以及实时荧光定量PCR(quantitative real-time,qRT-PCR)与Western blot检测,并应用miRNA模拟物(miR-mimics)与抑制剂(miR-inhibitor),验证SAA对潜在靶miRNAs的调控作用。结果:10μM SAA处理48 h显著提高了CEPCs活性,增加了白细胞介素(interlenkin-1β,IL-1β)所抑制的糖胺聚糖积累与Col2a1表达,并降低了细胞基质中ADAMTS-5与MMP3表达(P<0.05)。通过生物信息分析筛选与差异基因表达检测,确定了SAA的潜在靶miRNAs为miR-940和miR-576-5p。进一步在SAA处理组中加入miR-940-mimic或miR-576-5p-mimic,与SAA处理组相比过表达miR-940或miR-576-5p后CEPCs基质中ADAMTS-5与MMP3表达显著升高,Col2a1表达显著降低。结论:SAA能够提高CEPCs活性,改善退变CEPCs的基质成分表达,而SAA的调控作用与抑制miR-940和miR-576-5p表达有关,两者可能是SAA调节CEPCs退变的作用靶点。
- 展嘉文王尚全王尚全孙凯陈明李玲慧魏戌孙武于杰李玲慧张伟业魏戌孙武陈忻朱立国
- 关键词：椎间盘丹酚酸AMICRO-RNA
