杨奇
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
- 供职机构：南华大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖南省研究生科研创新项目湖南省科技厅重点项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 耐辐射奇球菌pprI和pprA基因在真核细胞293T中的表达被引量：2
- 2016年
- 以pGADT-7-pprA、pet28a-pprI载体为模板,构建pEGFP-N1-pprA、pDsRed1-N1-flag-pprI真核表达载体,脂质体2000介导将两个重组载体共转入293T细胞。双酶切及琼脂糖凝胶电泳显示在4700、1000 bp处与4800、1100 bp处出现目的条带。测序结果显示构建序列与模板序列一致,氨基酸序列100%正确。荧光显微镜下见到红色和绿色荧光;Western blot结果显示在不同检测水平65 kDa及60 kDa大小处有融合蛋白表达。结果提示pEGFP-N1-pprA、pDsRed1-N1-flag-pprI真核表达载体构建成功,并在离体293T细胞中共同表达蛋白。证明原核基因pprI、pprA能够在真核细胞中共表达,为后续实验验证DR菌高抗性基因pprA、pprI及其产物在辐射调控网络中的相互作用和协同作用、提高真核细胞的辐射抗性提供了研究基础。
- 肖潇马云肖方竹唐艳杨奇黄波唐旻何淑雅
- 关键词：耐辐射奇球菌PPRI真核细胞
- 耐辐射奇球菌pprM与pprI基因修饰对真核293T细胞辐射抗性的影响
- 研究背景与目的：耐辐射奇球菌（Deinococcus radiodurans, DR）是已发现物种中电离辐射耐受性最强的生物之一，可耐受超过15kGy的电离辐射，其辐射耐受剂量是大多数脊椎动物的3000多倍。pprI基因...
- 杨奇
- 关键词：耐辐射奇球菌基因修饰辐射抗性
- 耐辐射奇球菌pprM基因在真核细胞中的表达被引量：1
- 2017年
- 目的 扩增耐辐射奇球菌辐射抗性基因pprM,构建pEGFP-C 1-pprM重组载体,转入293T细胞并表达PprM蛋白,为研究原核细胞辐射抗性基因pprM是否提高真核细胞的辐射抗性及其可能存在的作用机制奠定实验基础.方法 以无任何突变的pGEX-6p-1-pp rM重组质粒为模版,设计引物PCR扩增pprM基因,利用琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒纯化回收目的片段,EcoRI、BamHI双酶切回收的目的片段及质粒pEGFP-C1,将双酶切产物进行连接,连接产物转化至大肠杆菌JM109感受态细胞后涂布于含卡那霉素（Kan）抗性的Luria-Bertani（LB）固体培养基上进行筛选,所筛选的阳性克隆进一步用菌落PCR,EcoR I、BamHI双酶切及测序鉴定.通过Lipofectamine2000转染试剂将pEGFP-C 1-pprM重组质粒转入293T细胞,倒置荧光显微镜观察绿色荧光融合蛋白的表达.裂解细胞抽提蛋白,Western blot进一步验证PprM蛋白的表达.结果 菌落PCR结果及双酶切结果显示,在400 bp左右处有一条明显的目的条带,测序结果显示碱基序列与原基因序列一致,载体构建成功.荧光拍照结果显示,pEGFP-C 1-pprM重组质粒成功转染293T细胞并表达绿色荧光融合蛋白;Western blot结果显示在40×10^3处有融合蛋白表达.结论 笔者成功将所构pEGFP-C 1-pprM重组质粒转入293T细胞,并表达相应蛋白,为后续实验研究原核基因pprM及其产物对真核细胞辐射抗性的影响奠定了良好的实验基础.
- 何淑雅杨奇王茹静肖方竹王五洲唐艳蒋雨薇马云
- 关键词：耐辐射奇球菌293T细胞
