李琦
- 作品数：19 被引量：57H指数：5
- 供职机构：甘肃农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金公益性行业(农业)科研专项上海市科技兴农重点攻关项目更多>>
- 相关领域：农业科学轻工技术与工程更多>>
- 产植酸酶促生菌特性、解磷机理及植酸酶基因功能鉴定
- 植酸盐,即肌醇六磷酸盐（myo-inositol hexakisdihydrogen phosphate,IHP）,是一类广泛存在于自然环境中的磷酸肌醇,是土壤、植物体以及动物饲料中有机磷的主要形态。由于缺乏水解植酸盐的...
- 李琦
- 关键词：植酸酶植物促生菌宏基因组植酸酶基因异源表达
- 小反刍兽疫病毒FY株全基因组序列的测定及其分子特征的研究被引量：2
- 2017年
- 根据小反刍兽疫病毒(PPRV)参考序列设计了11对特异性引物,然后用RT-PCR方法分段扩增出PPRV富阳分离株(PPRV-FY)的全基因组序列,用DNAstar软件和Mega软件对PPRV-FY株及参考毒株的基因序列进行了比对和分析,并根据N基因核苷酸序列绘制了系统进化树。结果,PPRV-FY株全长15 948 bp,编码6种结构蛋白(N、P、L、M、F和H),2种非结构蛋白(C和V),PPRV各毒株转录起始序列和转录终止序列都高度保守。同源性分析结果表明,PPRV-FY株与PPRV-Coted′Ⅰvoire89同源性最低,为89.0%,与PPRV/Tibet/30/2007株和PPRV/Tibet/2007株的同源性最高,为97.3%,其基因间隔区N-P长度一致,相似度最高,而M-F相似度最低。通过比较PPRV-FY株与参考毒株基因组末端调控序列,可以看出整个麻疹病毒属GP区和AGP区保守性较高,且存在不同程度的互补。氨基酸序列分析结果表明,PPRV-FY株在保守区域出现21处氨基酸突变,这些突变对其所编码蛋白的结构和功能有何影响尚需要进一步研究。此外,本文还基于N基因序列,对PPRV-FY株及参考毒株进行了系统进化分析。结果表明,PPRV-FY株与其它亚洲源PPRV野毒株共同形成一个拓扑群,属于第IV谱系。
- 刘柱缪秋红李琦宫晓华李传峰陈宗艳窦永喜张志东杨宗照刘光清张淼涛
- 关键词：小反刍兽疫病毒全基因组
- 鸭短喙-侏儒综合征病原的初步鉴定被引量：26
- 2015年
- 2014年下半年以来,在我国华东地区商品肉鸭养殖地区暴发了一种以生长迟缓、鸭喙变短、舌头外露下垂、跛行、瘫痪、拉稀以及翅腿易折断为主要临床特征的传染性疾病,暂命名为鸭短喙-侏儒综合征。剖检时可见发病鸭胰腺、肺脏和胸腺等组织出血。组织病理学变化主要表现为心脏、胰腺、肾脏、肺脏和肝脏等组织细胞变性、坏死以及充血、出血。RT-PCR/PCR检测结果显示,在患鸭组织中存在类似鹅细小病毒(Goose parvovirus,GPV)的特异性核酸,未见其他水禽病毒核酸。系统进化树分析显示本病病原与经典GPV密切相关。免疫组化进一步检测发现,患鸭组织中存在GPV特异性的抗原。鉴于本病与经典水禽细小病毒病的临床表征、剖检及组织病理学变化的差异性,我们初步确定鸭短喙-侏儒综合征病原为一种与GPV密切相关的新型鸭细小病毒(Novel duck parvovirus,NDPV)。
- 李传峰李琦陈宗艳唐井玉刘光清
- 关键词：鹅细小病毒免疫组化PCR
- 新型鸭呼肠孤病毒P18基因的表达与鉴定
- 为鉴定序列推导的新型鸭呼肠孤病毒(NDRV)P18基因是否存在,本研究采用RT-PCR扩增获得NDRV TH11株推导的P18基因,将其亚克隆至原核表达载体p Cold-TF,表达并纯化获得P18重组蛋白。以此重组蛋白为...
- 吴巧梅李传峰朱杰谭永贵李琦刘光清陈宗艳
- 关键词：新型鸭呼肠孤病毒多克隆抗体
- 文献传递
- 鸭BMP4基因相对实时荧光定量PCR方法的建立
- 引言实时荧光定量PCR分为相对定量和绝对定量,在检测于不同样本中特定基因的mRNA表达量进行分析时通常会选择相对荧光定量PCR。骨形态发生蛋白(Bone morphogenetic proteins,BMPs)是一种多功...
- 宫晓华李琦唐井玉刘柱李传峰王桂军刘光清
- 犬细小病毒SH14株VP2基因原核表达及免疫原性分析被引量：3
- 2016年
- 根据犬细小病毒(Canine Parvovirus,CPV)SH14株基因序列设计引物,采用PCR方法扩增CPV VP2基因,经Bam HⅠ、XhoⅠ双酶切后,将其克隆至p GEX-4T-1载体,构建重组表达载体p GEX-4T-VP2,经酶切鉴定和测序验证正确后转化大肠杆菌BL21中进行诱导表达,应用SDS-PAGE法检测蛋白的表达。然后,使用纯化的重组VP2蛋白制备其兔源多克隆抗体,分别应用蛋白免疫印迹、间接免疫荧光检测该抗体的免疫原性。结果表明,p GEX-4T-VP2能在大肠杆菌中以包涵体形式高效表达,所制备的兔抗CPV-VP2抗体能与重组蛋白和病毒蛋白发生特异性反应。本研究为研发CPV亚单位疫苗、检测技术及致病机理研究等奠定了物质基础。
- 唐井玉李传峰宫晓华李琦丁明洋陈宗艳王桂军刘光清
- 关键词：犬细小病毒VP2基因原核表达免疫原性
- 一株犬瘟热病毒变异株的基因组特征
- 引言犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV)隶属于副黏病毒科麻疹病毒属,是单股负链RNA病毒。传染性极强,发病率和致死率都很高。发病率可达100%,死亡率也高达80%,宿主主要包括犬科、猫科、鼬...
- 刘柱李丹丹李琦宫晓华缪秋红李传峰陈宗艳张淼涛刘光清
- 文献传递
- SYBR Green II荧光定量PCR结合熔解曲线鉴别不同亚型兔病毒性出血症病毒方法的建立被引量：2
- 2017年
- 本研究建立了一种荧光定量PCR(Real-time fluorescence quantitative PCR)结合熔解曲线区分不同亚型兔病毒性出血症病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)方法。根据GenBank数据库中已公布的不同亚型RHDV(经典RHDV和RHDV2)的衣壳蛋白VP60序列保守区设计了1对特异性引物,利用SYBR Green II荧光染料,在实时荧光定量PCR方法的基础上结合熔解曲线进行分析,经典RHDV和RHDV2熔解温度(Tm)分别为(86.3±0.1)℃和(85.1±0.1)℃,扩增产物的熔解曲线分析均只出现单特异峰。结果表明,本研究建立的方法能够快速地鉴别经典RHDV和RHDV2。
- 谭永贵刘腾朱杰郭慧敏吴巧梅李琦缪秋红陈宗艳李传峰刘光清
- 关键词：兔病毒性出血症病毒荧光定量PCR熔解曲线
- 钾肥与有机肥配施对食用百合土壤酶活性、土壤养分及产量的影响
- 食用百合是我国国家卫生部认定的具有花、药、食多功能的药食同源植物,但近年来由于土壤肥力退化引起百合鳞茎产量降低,已是食用百合产业发展亟待解决的问题。肥料的科学、高效利用是调节土壤养分均衡、提高作物产量和品质的重要措施。本...
- 李琦
- 关键词：食用百合土壤酶土壤养分植株养分
- 文献传递
- 新型鸭细小病毒VP3基因的原核表达及多克隆抗体的制备被引量：8
- 2016年
- 应用PCR方法扩增了新型鸭细小病毒(novel duck parvovirus,NDPV)的VP3基因,然后将其克隆到原核表达载体p GEX-4T-1中,获得重组质粒p GEX-VP3。将p GEX-VP3转化BL21感受态细胞后,用1.0mmol/L IPTG于37℃进行诱导。最后,分别用SDS-PAGE和Western-blot对表达产物进行分析和鉴定。结果,NDPV VP3蛋白在大肠杆菌细胞中成功获得表达,表达产物主要以包涵体形式存在,分子质量为84 ku。将纯化的重组VP3蛋白免疫实验家兔,制备多克隆抗体。Western-blot检测结果表明,该抗体能同时与重组的NDPV VP3蛋白及自然感染的NDPV发生反应,说明制备的抗体具有良好的抗原反应性。这些结果为进一步建立NDPV检测方法和研发新型疫苗研究奠定了物质基础。
- 李琦李传峰唐井玉刘柱宫晓华陈宗艳王桂军吴润刘光清
- 关键词：VP3基因原核表达多克隆抗体
