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缺氧诱导因子1-α参与结直肠癌细胞上皮间质转化及DNA同源重组修复的机制被引量：4: 2016年; 目的:研究氯化钴(CoCl_2)模拟的细胞体外缺氧微环境对结直肠癌细胞株SW480及Caco-2上皮间质转化及DNA同源重组修复的影响并探究其机制。方法:应用不同浓度的氯化钴(CoCl_2)处理SW480及Caco2细胞72 h后,CCK8法检测细胞增殖能力,划痕及Transwell试验检测细胞的迁移及侵袭能力,流式细胞术(FCM)检测细胞周期及凋亡情况,RT-PCR及Western blotting实验检测细胞内相关基因mRNA及蛋白水平的变化情况。结果:CCK-8实验提示细胞在缺氧后增殖能力明显增加(P<0.05);划痕试验及Transwell侵袭实验提示细胞在缺氧条件下迁移及侵袭能力明显增强(P<0.05);流式细胞术提示细胞在缺氧后被阻滞在S期(P<0.05),凋亡率明显下降(P<0.05);RT-PCR试验表明缺氧后细胞内缺氧诱导因子1-α(hypoxia inducible factor 1 alpha,HIF-1α)及RAD51的mRNA水平上调(P<0.05);Western blotting实验表明在缺氧环境下细胞内HIF-1α表达上调(P<0.05),上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition)相关蛋白:钙黏附蛋白E(E-cadherin)表达下调,波形蛋白(vimentin)及转录抑制因子(snail)表达上调(P<0.05),DNA同源重组相关蛋白BRCA1及RAD51表达上调(P<0.05),PI3K/AKT(磷脂酰肌醇-3-羟激酶)信号通路下游关键信号分子AKT1及共济失调毛细血管扩张症突变基因(ataxia-telangiectasia mutant gene)的编码产物ATM激酶磷酸化水平显著上调(P<0.05)。结论:慢性缺氧环境可促进结直肠癌细胞SW480及Caco-2的增殖、迁移和侵袭能力,抑制凋亡,其机制可能与HIF-1α/PI3K-AKT、HIF1-α/ATM信号通路介导EMT及DNA同源重组修复过程有关。; 唐康程勇庞云伍鑫张百川王五艺; 关键词：缺氧诱导因子1-Α 结直肠癌上皮间质转化

FBXW7基因点突变对结直肠癌HCT-116细胞的增殖、迁移、侵袭和抗凋亡能力的影响被引量：3: 2018年; 目的:探讨FBXW7基因点突变对结直肠癌细胞株HCT-116增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法:通过构建FBXW7基因野生型及突变型过表达的重组载体,并将其转染HCT-116细胞,应用Western blotting检测转染后FBXW7蛋白表达情况。CCK-8检测细胞增殖能力,平板细胞克隆形成实验(HTCA)检测肿瘤细胞克隆形成能力,流式细胞术检测细胞凋亡情况,划痕及Transwell细胞迁移实验检测细胞迁移和侵袭能力。结果:转染野生型FBXW7基因的HCT-116细胞中FBXW7蛋白表达水平高于对照组(转染突变型FBXW7基因的HCT-116细胞)、阴性对照组(转染空质粒载体p EZ-M90的HCT-116细胞)及空白对照组(未进行任何特殊处理的HCT-116细胞)(均P<0.05)。转染野生型FBXW7的HCT-116细胞的增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力相较于其余各组均显著下降(均P<0.05),且细胞凋亡率显著升高(P<0.05)。结论:FBXW7基因点突变可使其蛋白表达水平降低,从而促进结直肠癌HCT-116细胞的增殖、迁移和侵袭,并抑制其凋亡。; 张百川程勇王祥峰唐康王五艺; 关键词：基因突变结直肠癌泛素蛋白酶体系统

利拉鲁肽调节Sirtuin表达对高糖诱导的人内皮集落形成细胞生物学行为的影响被引量：4: 2019年; 目的探索利拉鲁肽是否通过调节Sirtuin影响高糖诱导的人内皮集落形成细胞(ECFC)的生物学行为。方法采用密度梯度离心法从外周血中分离获取单个核细胞,用EBM-2诱导培养出ECFC,随机分为正糖组(5.5 mmol/L D-葡萄糖)、渗透压组(5.5mmol/LD-葡萄糖+24.5 mmol/L甘露醇)、高糖组(30 mmol/LD-葡萄糖),均处理6d。随后采用EdU实验、Transwell实验、成管实验、β-半乳糖苷酶实验分别测定ECFC的增殖、迁移、成管及衰老情况,采用免疫印迹法测定Sirtuins(Sirtuin1–7)、血管内皮生长因子(VEGF)、血管生成素的表达水平。研究利拉鲁肽对ECFC的影响时,将细胞分为4组,除上述正糖组与高糖组外,还设有正糖利拉鲁肽干预组(5.5 mmol/L D-葡萄糖+100 nmol/L利拉鲁肽)、高糖利拉鲁肽干预组(30 mmol/L D-葡萄糖+100 nmol/L利拉鲁肽),均处理6d,观察4组细胞的生物学行为变化并测定VEGF和血管生成素的表达水平。结果 EdU实验显示高糖组的细胞增殖率明显低于正糖组[(30.16±12.36)%vs.(88.00±13.77)%],Transwell实验显示高糖组的细胞迁移能力明显低于正糖组(25.11±6.05vs.64.89±10.73),成管实验显示高糖组细胞成管能力明显低于正糖组(27.50±3.90 vs. 69.61±5.48),β-半乳糖苷酶染色实验显示高糖组细胞衰老率明显高于正糖组[(87.63±9.63)%vs.(71.35±7.58)%],差异均有统计学意义(P<0.05)。高糖情况下,Sirtuins家族表达普遍降低,VEGF和血管生成素表达均显著下降(P<0.05),Sirtuin1的表达随利拉鲁肽浓度的升高而升高。予以适宜浓度的利拉鲁肽干预后,VEGF和血管生成素的表达均明显增加(P<0.05)。EdU实验显示高糖利拉鲁肽干预组的细胞增殖率明显高于正糖组[(54.09±27.29)%vs.(29.01±7.56)%],Transwell实验显示高糖利拉鲁肽干预组的细胞迁移能力明显高于高糖组(32.25±4.99 vs. 21.75±3.10),成管实验显示高糖利拉鲁肽干预组的细胞成管能力明显高于高糖组(69.61±8.11vs.39.; 张路唐康周波; 关键词：利拉鲁肽沉默信息调节因子血管生成素

AGE/RAGE参与结直肠癌细胞上皮-间质转化及肿瘤干性的调控被引量：16: 2017年; 目的:探讨晚期糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)对结直肠癌HCT116细胞上皮-间质转化及肿瘤细胞干性的影响,及其可能的作用机制。方法:200μg/mL AGEs和200μg/mL AGEs联合50μmol/L磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3 kinase,PI3K)特异性抑制剂LY294002处理HCT116细胞后,分别应用CCK-8法、划痕愈合实验、Transwell小室法、克隆形成实验和肿瘤细胞成球实验检测HCT116细胞的增殖、迁移、侵袭、克隆形成和细胞成球能力。200μg/mL AGEs和200μg/mL AGEs联合50μmol/L LY294002处理HCT116细胞球后,应用Transwell小室法检测细胞的侵袭能力,FCM法检测CD133+细胞球所占比例,蛋白质印迹法检测HCT116细胞球中CD133、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和MMP-9蛋白的表达。不同浓度AGEs、200μg/mL AGEs和200μg/mL AGEs联合50μmol/L LY294002处理HCT116细胞后,应用蛋白质印迹法检测细胞中晚期糖基化终末产物受体(receptor of advanced glycation end products,RAGE)、E-cadherin、N-cadherin、vimentin、Snail、PI3K、磷酸化PI3K(phosphorylated PI3K,p-PI3K)、蛋白激酶B1(protein kinase B1,PKB1,又称Akt1)和磷酸化Akt1(phosphorylated Akt1,p-Akt1)的表达。结果:200μg/mL AGEs处理后,HCT116细胞的增殖、迁移、侵袭、克隆形成和细胞成球能力均明显增强(P<0.01,P<0.05,P<0.01,P<0.01,P<0.05),而50μmol/L LY294002处理后这一作用被明显抑制(P<0.05,P<0.05,P<0.01,P<0.01,P<0.05)。AGEs处理后,HCT116细胞球的侵袭能力增强(P<0.01),CD133+细胞球所占比例增加(P<0.05),CD133、MMP-2和MMP-9蛋白的表达水平均明显上调(P值均<0.05);而50μmol/L LY294002处理后这一作用被明显抑制(P<0.01,P<0.05,P值均<0.05)。不同浓度AGEs处理后,HCT116细胞中RAGE蛋白的表达水平上调(P<0.05)。200μg/mL AGEs处理后,HCT116细胞中p-PI3K、p-Akt1、N-cadherin、vimentin和Snail蛋白表达水平均上调(P值均<0.05),E-cadherin蛋白表达水平下调(P<0.05);而50μmol/L LY; 唐康程勇; 关键词：细胞运动上皮-间质转化晚期糖基化终末产物受体

结直肠癌合并糖尿病患者组织中EMT相关蛋白的表达被引量：4: 2016年; 目的观察结直肠癌合并糖尿病患者组织中促进上皮间质转换(EMT)进展的相关蛋白的表达。方法收集直肠癌及合并糖尿病患者的肿瘤组织及非肿瘤组织,分为对照组和肿瘤组;根据是否合并糖尿病,又分为伴及不伴糖尿病组。用免疫组化检测晚期糖基化终末产物(AGE)及其相应受体(RAGE)、上皮标志物钙黏连蛋白E(E-cad)、β-连环蛋白(β-catenin)、波形蛋白(vimentin);蛋白质印迹法检测各组中不同分化程度下相关蛋白的表达。结果 RAGE、AGE、E-cad和vimentin主要染色于细胞膜上,β-catenin主要染色于胞质内,且两个肿瘤组染色较对照组更深(P<0.01);与对照组相比,不伴糖尿病组及伴糖尿病中各蛋白表达均增高,E-cad表达降低(P<0.01);在同一分化状态下,伴糖尿病组中各蛋白表达水平较不伴糖尿病组高,E-cad较之降低(P<0.01)。结论结直肠癌合并糖尿病患者组织中相关蛋白β-catenin和vimentin表达上调,E-cad表达下降,从而促进EMT进展,对结直肠癌发生发展起重要促进作用。; 庞云程勇伍鑫唐康; 关键词：结直肠癌肿瘤 EMT 糖尿病

终末糖基化产物对结肠癌SW620细胞EMT及肿瘤干细胞标志物的影响被引量：5: 2016年; 目的:探讨终末糖基化产物(advanced glycation end products,AGEs)对结肠癌SW620细胞上皮间质转化(epithelial-to-mesenchymal transition,EMT)及肿瘤干细胞标志物CD133的影响及其作用机制。方法:用不同浓度(0、50、100、200μg/ml)的AGEs处理SW620细胞后,采用划痕实验检测细胞的迁移能力;Transwell小室检测细胞的侵袭能力;流式细胞术检测CD133^+细胞的含量;Western blotting检测AGEs受体(receptor of AGEs,RAGE)、E-cadherin、Vimentin、ERK1/2、p-ERK1/2、CD133蛋白的表达情况。结果:与对照组(0μg/ml)比较,AGEs处理组(50、100、200μg/ml)在AGEs作用后,SW620细胞24h迁移距离[(1.55±0.15)、(1.58±0.19)、(1.75±0.21)vs(0.95±0.18)mm,均P<0.05]及48 h迁移距离[(2.11±0.22)、(2.21±0.37)、(2.68±0.23)vs(1.60±0.24)mm,均P<0.05]均明显增加;穿过Matrigel胶的数量明显增加[(176±19.52)、(194±17.70)、(220±25.5)vs(125±26.06)个,均P<0.05];CD133^+细胞比例明显增加[(4.75±1.49)、(10.34±1.54)、(14.45±2.41)%vs(0.77±0.41),均P<0.05]。与对照组比较,AGEs处理组(50、100、200μg/ml)Vimentin、RAGE、p-Erk1/2、CD133蛋白表达明显增加;而ERK1/2蛋白无明显变化;E-cadherin蛋白表达明显减少。结论:AGEs可以提高结肠癌SW620细胞体外的侵袭迁移能力,促进EMT的发生,诱导肿瘤干细胞的生成。其机制可能通过AGE-RAGE受体配体的激活,上调p-ERK1/2,从而调控EMT相关蛋白的表达,促进肿瘤干细胞的生成。; 伍鑫程勇庞云唐康张百川; 关键词：终末糖基化产物结肠癌上皮间质转化肿瘤干细胞

人外周血晚期内皮祖细胞中的高糖记忆效应被引量：1: 2018年; 目的:探索人外周血晚期内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)是否存在高糖代谢记忆。方法:密度梯度离心法分离获取人外周血中的单个核细胞,诱导培养2周时间待细胞呈现立体的鹅卵石状后,即为晚期EPCs,采用细胞免疫化学染色对分离培养的细胞进行鉴定。MTT比色法摸索出高糖作用的浓度和时间梯度后,分3组处理细胞,即正糖组(NG,5.5 mmol/L D-葡萄糖×6 d),高糖组(HG,30 mmol/L D-葡萄糖×6 d),记忆组(MG,30 mmol/L D-葡萄糖×6 d+5.55 mmol/L D-葡萄糖×6 d)处理细胞,采用粘附实验、MTT比色法、Ed U实验、Transwell小室实验、成管实验,测定3组细胞的粘附、增殖、迁移、成管功能。结果:粘附结果显示高糖组(38.296±6.615)、记忆组(37.815±6.196)均较正糖组(63.370±10.363)粘附能力下降(P<0.05);MTT结果显示高糖组(79.041±19.678)、记忆组(81.524±6.710)均较正糖组(100.000±0.000)增殖能力下降(P<0.05);Ed U结果显示高糖组(45.809±7.945)、记忆组(37.740±8.206)均较正糖组(88.858±5.727)增殖能力下降(P<0.05);迁移结果显示高糖组(25.111±6.051)、记忆组(25.778±6.037)均较正糖组(64.889±10.729)迁移能力下降(P<0.05);成管结果显示高糖组(12.690±3.616)、记忆组(14.198±4.073)均较正糖组(64.407±6.358)成管能力下降(P<0.05);记忆组与高糖组相比,粘附、增殖、迁移、成管功能均未能改善(P>0.05)。结论:晚期EPCs存在高糖代谢记忆。; 唐康张敏周波; 关键词：内皮祖细胞密度梯度离心法高糖代谢记忆

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唐康

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