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刘海洋
作品数:
2
被引量:0
H指数:0
供职机构:
深圳北京大学香港科技大学医学中心
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发文基金:
国家自然科学基金
国家重点基础研究发展计划
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相关领域:
生物学
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合作作者
刘伟
香港科技大学
游霞
深圳北京大学香港科技大学医学中...
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作者
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刘伟
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刘海洋
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游霞
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中国生物化学...
年份
1篇
2016
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果蝇钙调蛋白和肌球蛋白NINAC相互作用分析
2016年
果蝇的视觉信号转导途径是已知的最快的G-蛋白偶联信号通路。这其中涉及到TRP/TRPL通道的开放以及钙离子的内流等一系列反应的形成。NINAC(neither inactivation nor afterpotentialC)是一种特异性存在于果蝇感光细胞中的第3类肌球蛋白(Myosin III),其在终止果蝇的视觉信号转导通路中起着非常重要的作用。NINAC蛋白具有两种亚型:一种是132 kD的蛋白亚型(p132),另一种则是174 kD的蛋白亚型(p174)。这两种不同的蛋白亚型都具有相同的激酶催化结构域(kinase domain),以及与肌球蛋白相似的马达结构域(motor domain)。但是,它们在C末端却存在着非常大的差异,这其中包括了钙调蛋白结合基序(IQ motif)。NINAC的这两种蛋白亚型在果蝇的感光细胞中的定位以及作用有很大不同,尤其是在与钙调蛋白的相互作用方面。钙调蛋白结合基序与钙调蛋白(CaM)之间的相互作用对于果蝇的视觉信号通路具有重要的意义:NINAC结合钙调蛋白能力的缺失将导致果蝇的视觉传导缺陷。本文通过蛋白共表达的方法,成功表达并纯化得到了不同版本的NINAC与钙调蛋白的蛋白复合物。静态光散射的结果表明,在Ca2 +存在情况下,p174蛋白可以结合2个Ca2 +-CaM,而p132只结合1个Ca2 +-CaM。通过分析型凝胶过滤以及等温量热滴定技术,进一步鉴定了p174及p132的IQ2(第2个钙调蛋白结合基序)序列与Ca2 +-CaM的相互作用。通过序列分析及进一步的突变实验发现,p174 IQ2中的3个疏水氨基酸(F1083,F1086和L1092)对于钙调蛋白的结合非常重要,并导致了p174与p132蛋白和Ca2 +-CaM结合能力的差异。本文的研究提供了NINAC与Ca2 +-CaM相互作用的生化机制,将为进一步在果蝇视觉信号通路中深入研究CaM是如何调节NINAC的体内功能实验打下基础。
游霞
刘海洋
刘伟
关键词:
钙调蛋白
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