刘缙
- 作品数：10 被引量：18H指数：2
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- 相关领域：农业科学生物学文化科学更多>>
- 双生病毒AC4基因的克隆及原核表达
- 2023年
- 通过设计特异性引物,利用PCR技术克隆双生病毒AC4基因,并与原核表达载体pGEX-4T-1连接,导入大肠杆菌BL21(DE3)中,利用IPTG成功诱导表达出分子量约36 KD的GST-AC4融合蛋白。对IPTG诱导浓度、诱导时间、诱导温度进行优化,获得最佳表达条件:IPTG诱导浓度0.50 mmol/L,诱导时间3 h,诱导温度32℃。研究结果对于下一步大量制备并分离纯化AC4蛋白、制备抗血清及研究SXYC-X4 AC4基因的功能具有指导意义。
- 郝浩永王红刘缙关正君李文清杨先先
- 关键词：双生病毒番茄黄化曲叶病毒原核表达
- 高质量提取银杏种仁总RNA的改良方法被引量：11
- 2010年
- 提取高质量的RNA是获取银杏（Ginkgo bilobaL.）种仁药用蛋白基因以及从基因表达水平研究林木良种银杏种子发育和后熟的必要条件。现有提取方法难以获得高纯度的银杏种仁总RNA。旨在改良现有提取方法,以满足抽提富含蛋白质、多糖、多酚等特殊材料高质量RNA的需要。文中将改进的CTAB法和Trizol一步法相结合,优化了试剂组合并改进实验细节,从银杏种仁中获得了高质量的总RNA。通过琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度计检测,提取的总RNA具有清晰的28SrRNA、18SrRNA条带,亮度满足2：1比例关系。OD260/OD280比值在1.85~2.00之间。将提取的总RNA用于Northern杂交分析可检测到清晰的信号,而用于RT-PCR和5＇-RACE也可获得清晰的目的条带。说明这种方法获得的总RNA完整度和纯度很高,完全可以满足下游分子生物学实验要求。
- 王亚红刘缙王玉国
- 关键词：总RNA提取
- 树莓组培及其初代培养和分化影响因素的研究被引量：1
- 2016年
- 以树莓(Rubus Corchorifolius L.f)品种,秋福(Au-tumn Bliss)的幼嫩茎段为外植体进行组培快繁研究。结果表明:树莓茎段外植体的最佳消毒方案为75%乙醇30 s+0.1%升汞7 min,最适初代培养基为MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.05 mg/L,最佳增殖培养基为MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L。
- 尉淑珍刘缙昝亚玲
- 关键词：树莓快速繁殖
- 分子生物学实验课程体系的构建与实践——以运城学院为例被引量：1
- 2017年
- 为适应生命科学的飞速发展,满足本科人才培养的需要,构建了适合生物科学专业的分子生物学实验课程体系。从实验项目的设置、实验内容的设计、实验材料的选择、实验指导的编写、实验时间的安排、课堂教学环节的设计、成绩考核与评定等方面着手进行探索与实践,取得了良好的效果。针对实践过程中出现的问题进行分析,并提出改进的对策与建议。
- 郝浩永刘缙周玉亭曹建斌崔东亚
- 关键词：分子生物学实验
- 山西省运城市番茄黄化曲叶病毒的分子鉴定被引量：3
- 2018年
- 从山西省运城市表现黄化曲叶典型症状的番茄植株上分离得到病毒分离物SXYC-X4(KY499720),对其DNA-A的全基因组进行序列分析。结果表明,SXYC-X4的DNA-A全长为2 781 bp,共编码6个开放阅读框。通过序列比对发现,SXYC-X4与山东省潍坊市的病毒分离物(KC999850)和河南省焦作市的病毒分离物(KX034543)的同源性较高,均为99. 5%,确认SXYC-X4是番茄黄化曲叶病毒。系统进化分析结果表明,该病毒分离物属于番茄黄化曲叶病毒(tomato yellow leaf curl virus,简称TYLCV)-Isreal株系,与烟草曲茎病毒(tobacco curly shoot virus,简称Tb CSV)在AC4氨基酸序列上的同源性高于部分TYLCV,推测在自然界中TYLCV与Tb CSV在AC4序列处可能已经发生了广泛的重组,TYLCV有可能会获得更强的致病性,应提高警惕。
- 郝浩永滕红梅刘缙许瑞祥王新
- 关键词：番茄黄化曲叶病毒PCR检测系统进化
- 小麦HMW-1Bx17基因启动子的功能验证被引量：1
- 2017年
- [目的]小麦HMW-1Bx17基因是在小麦胚乳中特异高表达的基因,该基因启动子的获得可为进一步研究小麦高分子量麦谷蛋白种子特异表达的调控模式提供基础材料,并为小麦品质改良的基因工程研究奠定基础。[方法]本文以改良的CTAB法提取小麦"舜麦1718"基因组DNA为模板,根据已知序列设计引物,利用嵌套PCR扩增1Bx17基因启动子片段。构建1Bx17基因启动子启动下的GUS(β-葡糖苷酸酶)基因表达载体,用基因枪法分别导入小麦根、茎、叶、胚乳及胚中进行瞬时表达,同时构建了1Bx17基因启动子驱动的抗菌蛋白Gnk2-1基因表达载体用于小麦幼胚稳定转化。[结果]X-gluc染色检测表明,GUS基因在该启动子的驱动下能在小麦胚乳中特异表达。通过对再生抗性植株的RT-PCR鉴定,初步表明已获得转基因植株,并进一步证明了启动子的驱动功能。[结论]本文所获得小麦1Bx17基因的启动子在小麦基因工程遗传改良等方面具有一定的利用潜力。
- 王亚红刘缙王玉国
- 关键词：小麦启动子
- 地方高校涉农专业研究生应用创新能力的培养途径
- 2024年
- 新农科背景下为提高地方高校涉农专业研究生的应用创新能力,助力乡村振兴,地方高校应积极探索研究生培养新途径。围绕农科研究生应用创新能力的培养,从研究生课程教学改革、创新人才师资队伍建设和校企合作联合模式3个方面阐述研究生应用创新能力培养方法。加强教学改革、建设师资队伍、拓宽校企联合渠道,提升涉农专业研究生培养质量对农业科技创新具有重要意义。
- 冯宝珍李培谦孙元琳刘缙
- 关键词：农业
- 小麦TaPBFB蛋白的原核表达及与顺式元件的结合被引量：1
- 2016年
- 为进一步了解小麦Dof(DNA binding with one figner)转录因子在小麦种子发育过程中的作用和功能,本文利用RTPCR技术,克隆到一个小麦PBF蛋白的等位基因cDNA序列(Gen Bank登录号为KX058135),命名为TaPBFB。该序列包含完整的开放阅读框(ORF)987 bp,编码了328个氨基酸的蛋白质,理论等电点8.75,理论分子量为33.9 kDa,这与原核表达后SDS-PAGE和Werstern blot检测结果一致。蛋白质序列分析表明,该基因编码的氨基酸序列与粗山羊草(Aegilops tauschii,AHZ44510)Ata PBF蛋白相似性最高为92%,而与已知的‘中国春’小麦(Triticum aestivum,AGR34055)WPBF蛋白相比同源性为91.5%。保守结构域分析表明,该蛋白中具有典型的Dof结构域,以及NLS核定位信号,推测该蛋白定位于细胞核并具有调控储藏蛋白基因表达的功能。凝胶阻滞实验结果也表明,融合蛋白能与小麦低分子量麦谷蛋白GluD-LMWGS基因上游的顺式元件Prolamin box(PB)特异结合,证明TaPBFB具有DNA结合活性。这为深入研究多个等位基因的小麦PBF转录因子如何共同调控储藏蛋白的表达机制提供研究材料,为进一步在转录调控水平实现农作物的遗传改良奠定基础。
- 刘缙王亚红滕红梅王玉国
- 关键词：小麦转录因子克隆原核表达
- 新建地方本科院校军事理论课教学的思考与实践
- 2016年
- 目前新建地方本科院校的军事理论教学中存在一些问题和不足,这对新形势下地方高校国防教育的发展极为不利,军事理论教学改革迫在眉睫。针对这些问题,在实践教学中探讨了如何在教学内容、教学手段、考评机制等方面对军事理论课堂教学进行改革,为切实提高地方本科院校军事理论课教学质量提供借鉴。
- 王亚红毛鹏杰刘缙闫建科
- 关键词：新建地方本科院校军事理论课教学质量
- 番茄内生菌的分离鉴定及菌株FQ-G3抗病促生特性
- 2024年
- 由灰葡萄孢(Botrytis cinerea)引起的灰霉病是番茄生产中最重要的病害之一,当前使用的杀菌剂因药物残留、病原菌抗药性及食品安全等原因逐渐受到限制。因此,利用拮抗微生物的生物防治逐渐成为灰霉病防控的有效策略。【目的】从番茄植株体内筛选具有抗病促生特性内生菌株并对其生防潜力进行评估,为开发番茄灰霉病生物防治新策略提供理论依据。【方法】采用组织分离法在番茄植株不同部位分离出内生细菌、真菌,结合16SrRNA和ITS序列分析,对候选菌株进行初步鉴定;通过菌株对峙培养、果实离体接种筛选对灰葡萄孢具有拮抗活性的内生菌;进一步测定菌株分泌生长素、嗜铁素的能力及其对拟南芥和番茄幼苗生长的促生特性。【结果】从番茄植株不同部位共分离出72株内生细菌和31株内生真菌,通过平板对峙法筛选出1株对多种病原菌具有较好抑菌活性的内生细菌FQ-G3,分子鉴定为Bacillus velezensis。FQ-G3对灰葡萄孢抑菌率达80.93%,并显著抑制灰葡萄孢在番茄果实上的扩展。该菌株能够分泌生长素、蛋白酶和嗜铁素,且对拟南芥、番茄幼苗具有明显的促生效果。【结论】本研究表明分离自番茄植株的内生菌FQ-G3具有抗病促生特性,对番茄灰霉病的防控具有潜在应用价值。研究结果丰富了番茄内生菌资源,为番茄灰霉病的防病促生提供技术和理论支持。
- 冯宝珍李培谦刘缙杨燕丽王晓静
- 关键词：灰霉病内生菌生物防治促生作用
