李欣
- 作品数：10 被引量：14H指数：2
- 供职机构：山西农业大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：山西省回国留学人员科研经费资助项目山西省科技攻关计划项目国家自然科学基金更多>>
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- 重组GSTA3蛋白对福美双诱导的肉鸡TD中抗凋亡基因BAG-3表达的影响
- 2020年
- 【目的】肉鸡胫骨软骨发育不良(TD)是肉鸡常见的一种骨骼性疾病,研究重组GSTA3蛋白对福美双诱导的TD肉鸡软骨细胞中抗凋亡基因BAG-3表达的影响,为治疗TD提供新的思路和方法。【方法】将120羽1周龄肉雏鸡随机分为6组(编号为A、B、C、D、E、F组)。A、B、C组为基础日粮对照组,D、E、F组为添加福美双日粮诱导TD组。试验饲喂福美双2 d诱发TD,在添加福美双第1、3、5、7天,腿部肌肉注射重组鸡GSTA3蛋白和磷酸盐缓冲液,A组与D组注射(100μg·kg^-1)磷酸盐缓冲液;B组与E组注射低剂量(100μg·kg^-1)GSTA3;C组与F组注射高剂量(200μg·kg^-1)GSTA3。试验历时23 d。添加福美双后1、2、4、6、10和15 d采集胫骨生长板。通过Real-time qPCR检测BAG-3基因的mRNA水平,利用免疫组化来检测BAG-3蛋白表达水平。【结果】Real-time qPCR结果显示,TD损伤修复期内,相比较于基础日粮对照组,福美双对照组肉鸡胫骨生长板中BAG-3 mRNA的表达水平基本都显著上调(P<0.05);相比较于福美双对照组,E和F组在第2、4、10、15天都有显著差异,且在第10和15天显著低于福美双对照组(P<0.05),表明与D组相比恢复较快。免疫组化结果表明BAG-3蛋白在肉鸡胫骨软骨细胞的增殖区和前肥大区无表达,只在肥大区细胞质中表达;福美双组与空白对照组相比,BAG-3蛋白表达增加;福美双高低剂量组与未注射蛋白的福美双组相比,重组GSTA3增加了肥大区的蛋白表达水平(第10和15天)。【结论】在福美双诱导肉鸡发生TD的过程中,GSTA3重组蛋白能够通过调控BAG-3表达参与凋亡途径,抑制细胞凋亡。在TD损伤修复期,注射GSTA3后使抗凋亡基因BAG-3蛋白表达增强,从而可参与细胞凋亡来缓解TD损伤,使得肉鸡TD生长板功能较快地恢复正常。
- 李桢杨世雄牛胜张宁李欣张阳阳贾云飞田志雄宁官保张鼎田文霞
- 关键词：胫骨软骨发育不良抗凋亡肉鸡
- 福美双诱导的肉鸡胫骨软骨发育不良软骨细胞凋亡被引量：9
- 2017年
- 为研究肉鸡胫骨软骨发育不良(TD)软骨细胞的凋亡分布及凋亡相关基因的表达水平,将80羽1日龄健康AA肉鸡基础日粮饲养1周后,随机分为对照组和处理组,处理组饲喂添加100mg·kg-1福美双的日粮,采用HE染色和TUNEL法分别对肉鸡胫骨生长板软骨细胞的形态学和凋亡情况进行观察,同时采用Real-time PCR方法和免疫组化技术分别对软骨细胞中凋亡相关基因的mRNA转录水平及蛋白质表达水平进行检测。结果显示,福美双诱发TD后第1、2、4和6天,肉鸡生长板软骨栓形成逐渐增大,异常软骨细胞增加,TD病变区软骨细胞,尤其是肥大区软骨细胞凋亡程度明显增加。Real-time PCR检测结果显示,与对照组比较,TD生长板促凋亡基因Bax在试验第1、2、4和6天表达量极显著上调(P<0.01);Caspase-3在第1、2和4天表达量极显著增加(P<0.01);抗凋亡基因BAG-1表达下调,在试验第1和2天差异极显著(P<0.01)。免疫组化结果显示,第1和4天处理组Bax的蛋白表达量明显高于对照组。本研究提示肉鸡TD生长板软骨细胞凋亡与促凋亡基因的表达增强和抗凋亡基因的表达下降有关。
- 张宁李欣宁官保张鼎Ali Raza Jahejo李宏全马海利郝卫芳高文伟赵宇军高诗敏李桂兰李建慧闫芳高荣琨田文霞
- 关键词：福美双胫骨软骨发育不良软骨细胞细胞凋亡肉鸡
- 肉鸡谷胱甘肽S-转移酶A3基因的克隆及蛋白的表达和纯化
- 2019年
- [目的]谷胱甘肽S-转移酶A3(GSTA3)是GSTs超家族中α家族的一员,具有解毒功能,同时还参与抗氧化应激引起的信号通路调节,另外在类固醇和前列腺素的合成中也必不可少。[方法]本试验采用RT-PCR方法扩增肉鸡GSTA3基因,连接pZeroBack/blunk克隆质粒,再与表达载体pET-28a连接,并转入E.coli BL21(DE3)中获得pET-28a-GSTA3重组表达质粒,使用IPTG诱导其蛋白的表达,应用镍柱亲和层析法纯化蛋白,并对其进行SDS-PAGE鉴定,使用谷胱甘肽-S转移酶活性测定试剂盒对重组蛋白进行活性检测。[结果]试验成功构建重组表达质粒pET-28a-GSTA3,并在大肠杆菌中成功表达,其大小为29.6 kDa,与预期一致,并且表达的重组GSTA3蛋白具有生物活性。[结论]本试验成功获得高纯度的可溶性GSTA3融合蛋白,为其在家禽领域的进一步研究奠定了基础。
- 卢晓晓杨世雄李娜娜张宁李欣宁官保张鼎赵宇军闫芳高荣琨田文霞
- 关键词：胫骨软骨发育不良基因克隆原核表达
- 塞来昔布对福美双诱导的肉鸡TD中COX-1/2、ColⅩ和MMP-13表达的影响
- 目的:研究环氧酶通路与肉鸡胫骨软骨发育不良(TD)早期发生关系.
方法:参照本课题组前期研究方法复制肉鸡TD早期模型.通过添加塞来昔布,观察肉鸡早期临床症状,生长板剖检形态,进行TD评价,并应用荧光定量PCR,...
- 喻进宁官保李宏全马海利高文伟赵宇军高诗敏李桂兰李建慧闫芳陈书明张晨亮田文霞赵晋锋卢晓晓李娜娜王倩倩李欣张宁张鼎
- 关键词：肉鸡胫骨软骨发育不良塞来昔布环氧酶基质金属蛋白酶13
- 文献传递
- 福美双诱导的肉鸡胫骨生长板异常增殖软骨细胞相关基因表达研究
- 目的：探讨HDAC1、MTA1、H4、PCNA等与肿瘤发生和发展相关基因的差异表达与肉鸡TD发生之间的相关性.
方法：利用课题组已建立的肉鸡TD模型,采用荧光定量PCR技术及免疫组织化学技术,对TD模型胫骨生长...
- 张晨亮宁官保李宏全马海利高文伟赵宇军高诗敏李桂兰李建慧闫芳陈书明赵晋锋田文霞喻进王倩倩卢晓晓李娜娜李欣张宁张鼎
- 关键词：胫骨软骨发育不良福美双
- 文献传递
- 马立克病病毒感染鸡红细胞6种免疫相关因子转录水平的鉴定被引量：1
- 2018年
- 为了探究在感染马立克病病毒(MDV)后羽髓中病毒增殖情况以及红细胞中免疫相关因子的免疫应答反应,将4日龄雏鸡腹腔注射MDV超强毒株MD5,在攻毒后不同时间进行羽毛和血样采集,通过实时荧光定量PCR检测羽髓病毒载量和红细胞中6种免疫相关基因的mRNA表达水平。结果显示,在攻毒后第7天检测到MDV拷贝,并且14天检测到的拷贝数显著高于其他检测时间;与第14天对照组相比,攻毒组COX2的表达显著上调(P<0.05),而在第22天COX2的表达整体高于第14天(P<0.05);在第14和22天,PTGER4、HPGDS和GSTA3在攻毒组中的表达量显著低于对照组(P<0.05);与之相反,在第14天和第22天,PTGR1在攻毒组中的表达量显著高于对照组(P<0.05);第14天攻毒组的Ex-FABP表达水平显著低于对照组,而在第22天攻毒组显著高于对照组(P<0.05)。这表明感染MDV后红细胞中6种免疫基因发生显著的免疫应答,并且红细胞可能通过调节相关的免疫反应而在MDV感染过程中发挥一定的免疫调控作用。
- 牛胜李欣张宁宁官保张鼎Ali Raza Jahejo马海利郝卫芳高文伟赵宇军高诗敏李桂兰李建慧闫芳高荣琨毕玉海韩凌霞田文霞
- 关键词：红细胞马立克病病毒转录表达
- 重组鸡细胞外脂肪酸结合蛋白的原核表达及鉴定被引量：3
- 2020年
- 细胞外脂肪酸结合蛋白(Extracellular Fatty Acid-Binding Protein,Ex-FABP)是一种鸡胚发育过程中表达于肥大软骨、肌肉纤维和血粒细胞中的脂蛋白,大小约为21 ku。试验通过构建Ex-FABP原核表达载体,以实现Ex-FABP蛋白的大量表达,并对其进行纯化及鉴定;以艾维茵肉鸡胫骨软骨总RNA为模板,RT-PCR扩增Ex-FABP基因,连接pGEM-T克隆载体后,再与载体pET-28a连接并转化,获得含pET-28a-Ex-FABP重组表达质粒的Escherichia coli BL21(DE3)表达菌株;使用IPTG诱导表达蛋白,SDS-PAGE鉴定表达情况,利用镍柱亲和层析法纯化蛋白,对纯化蛋白进行Western Blot鉴定。结果表明,试验成功构建重组表达载体pET-28a-Ex-FABP;表达产物经SDS-PAGE和Western Blot鉴定,结果显示,目的蛋白在24 ku附近出现特异性条带,表明表达蛋白正确。试验成功表达了大量纯度比较高的Ex-FABP蛋白,可为后续的动物试验以及家禽疾病的研究提供理论依据。
- 田志雄李娜娜卢晓晓郭敏张宁李欣张鼎赵宇军闫芳高荣琨宁官保田文霞
- 关键词：基因克隆原核表达蛋白纯化
- 重组鸡GSTA3蛋白对福美双诱导胫骨软骨发育不良肉鸡红细胞免疫相关基因转录的影响被引量：1
- 2018年
- 为研究胫骨软骨发育不良(TD)肉鸡红细胞免疫相关基因转录水平的变化及重组鸡谷胱甘肽S-转移酶A3(chGSTA3)蛋白对TD肉鸡红细胞免疫相关基因转录的影响,将120只肉雏鸡饲喂一周后,随机分为基础日粮组(A、B、C组)和福美双处理组(D、E、F组),对福美双处理组肉鸡通过饲料中添加100mg·kg^(-1)福美双诱发建立肉鸡TD模型,通过腿部肌肉注射法,对B组和E组肉雏鸡注射有活性的低剂量(20μg·kg^(-1))重组GSTA3蛋白,对C组和F组肉雏鸡注射高剂量(50μg·kg^(-1))重组GSTA3蛋白,对A和D组的肉雏鸡注射等体积的磷酸盐缓冲液(PBS);使用Real-time PCR对肉鸡红细胞中免疫基因的信使RNA(mRNA)转录水平进行检测。结果显示,Toll样受体(TLR)2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR7、TLR15、髓样分化因子88(MyD88)、主要组织相容性复合体(MHC)Ⅱ、核苷酸结合寡聚化结构域样受体家族中的C5型受体(NLRC5)、肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)、白细胞介素-7(IL-7)基因可以在鸡红细胞转录;福美双处理组D与磷酸缓冲盐溶液(PBS)处理组A相对比,TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR7、TLR15、MyD88、TRAF6、MHCⅡ和NLRC5在试验的第4天显著升高,IL-7显著降低(P<0.05),在试验的第15天TD肉鸡红细胞中TLR2、TLR4、MyD88和NLRC5显著下调(P<0.05),IL-7、TLR3、TLR5、TLR7、TLR15、MHCⅡ、TRAF6变化不明显(P>0.05);E组和F组与D组相比,在试验第4天,除E组TLR4、TLR5和MyD88外,其余基因都有显著性变化(P<0.05);在第15天,E组中TLR4、TLR5、MyD88和NLRC5,及F组中TLR3、TLR5、MyD88、TRAF6和IL-7变化不显著,其他基因都有显著性差异(P<0.05)。鸡红细胞可能通过免疫相关基因TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR7、TLR15、IL-7、MyD88、TRAF6、MHCⅡ和NLRC5转录水平的变化,在早期诱导TD发生,后期减轻肉鸡TD症状;GSTA3能够对福美双诱导肉鸡TD的作用产生影响。
- 贾发杰牛胜张宁李欣宁官保张鼎李宏全马海利郝卫芳高文伟赵宇军高诗敏李桂兰李建慧闫芳高荣琨田文霞
- 关键词：福美双胫骨软骨发育不良红细胞TLRS
- 福美双诱导的TD肉鸡生长板中p-STAT3、SOCS3的时序性表达研究
- 目的：研究旨在观察p-STAT3与SOCS3在肉鸡TD发生过程中的时序性表达,初步探讨JAK-STAT信号通路与肉鸡TD的相关性.
方法：利用实验室建立的肉鸡TD模型,采用Real-time qPCR、免疫组化...
- 赵晋锋宁官保李宏全马海利高文伟赵宇军高诗敏李桂兰李建慧闫芳陈书明张晨亮田文霞喻进李娜娜卢晓晓王倩倩张宁李欣张鼎
- 关键词：肉鸡胫骨软骨发育不良生长板时序性表达
- 文献传递
- 重组鸡GSTA3蛋白对福美双诱导肉鸡TD的血清GST-α含量的影响
- 2017年
- 为研究重组鸡GSTA3蛋白对肉鸡TD抗氧化功能的影响,先构建肉鸡TD模型,即通过肌肉注射不同剂量(20,50μg/kg)的原核表达鸡GSTA3蛋白,运用ELISA技术检测血清中GST-α的含量。结果表明,与空白组相比,饲喂福美双第1,2,4天,血清GST-α的含量显著上升(P<0.05),注射蛋白组与饲喂福美双组相比,试验第1天,GST-α的含量没有显著差异,试验第2,4天,GST-α的含量显著降低(P<0.05),而高剂量组与低剂量组之间GST-α的含量无显著性差异。GSTA3可通过修复肝脏损伤增强其抗氧化能力,直接或间接调节软骨组织中软骨细胞在TD发生过程中的功能。
- 李欣李桢李娜娜张旭华张靖陈柳妃宁官保张鼎田文霞
- 关键词：肉鸡胫骨软骨发育不良抗氧化功能
