邱枫
- 作品数：10 被引量：8H指数：2
- 供职机构：浙江大学医学院附属第二医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金浙江省医药卫生科学研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 温度、冻存液体积和操作时间对小鼠卵子Cryotop玻璃化冻融复苏率的影响
- 2016年
- 目的 探讨Cryotop法中冷冻操作环境温度、加载覆盖的保护液微滴体积以及投入液氮前暴露于高浓度冷冻保护剂（CPA）的时间对小鼠MⅡ期卵子玻璃化冻融效果的影响。方法 对6周龄KM系小鼠促排卵、脱颗粒细胞以获得形态良好的MⅡ期卵子,用Cryotop法对其进行玻璃化冻融,卵母细胞随机分组后实验方案如下：根据冷冻环境温度的不同,设置37℃操作组和22℃操作组;根据薄膜上包被的保护液微滴体积的不同,设置〈0.1μL组、0.1~0.5μL组和〉0.5~1.0μL组;根据与CPA的接触时间的不同,将冷冻卵子分为30~40 s暴露组、〉40~90 s暴露组和〉90~180 s暴露组。随后对各组卵母细胞的复苏率进行统计比较。结果 22℃操作组小鼠卵子的复苏率为81.4%,显著高于37℃操作组的50.7%,差异有高度统计学意义（P〈0.01）。选择22℃的操作环境,〈0.1μL组、0.1~0.5μL组、〉0.5~1.0μL组复苏率（85.7%、90.5%、83.2%）比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。〉90~180 s CPA暴露组的卵子复苏率为74.7%,低于30~40 s暴露组（83.3%）和〉40~90 s暴露组（78.9%）,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 使用Cryotop法冻融卵母细胞时,不必刻意追求〈0.1μL的保护液加载体积。卵子在高浓度CPA中的暴露时间不宜过长,且控制在30~90 s内对其存活率无明显影响。在常温（22℃）环境下进行操作可改善复苏结局。
- 饶金鹏邱枫刘青蔡益婷金敏金帆
- 关键词：温度体积复苏率
- 新建体外受精实验室显微注射系统操作改进探究被引量：2
- 2019年
- 针对新建成的体外受精实验室中显微注射操作系统不稳定,导致卵胞浆内单精子显微注射(ICSI)卵膜刺破效果不佳或过程中损伤卵子纺锤体等问题,对连接了显微注射针的Eppendorf CellTram vario油压式手动显微注射仪的整体通道进行调整,提高卵子破膜及单精子注射的稳定性。通过增加显微注射仪管道内矿物油的更换频次并调节活塞相对位置,保证液压系统的通畅,通过控制显微注射针内介质从针尖至针尾依次为聚乙烯吡咯烷酮、培养油、空气、矿物油,保证针尖不污染、不堵塞,同时控制回吸、破膜、注射和退针的节奏,使ICSI操作得以顺利实施。经过分析及改进,ICSI后卵子退化率显著下降(P<0.05),而受精率、优质胚胎形成率以及临床妊娠率均有所提高。
- 饶金鹏邱枫蔡益婷金帆金敏
- 关键词：ICSI液压系统临床妊娠率
- 不同因素对IVF实验室试剂潜在胚胎毒性的影响
- 2019年
- 目的:探讨体外受精(IVF)胚胎培养液分装与否及开封时间长短对质量的影响,以降低因试剂不合理使用导致实验室不良情况发生,进而降低不良妊娠结局发生率。方法:分别将待检测的卵泡冲洗液、配子处理液、受精液、卵裂液、囊胚培养液取出1/2体积在无菌条件下分装;余下1/2未分装试剂同分装试剂均于-4℃保存0、14、28 d。在0、14、28 d时,以质控合格的精子冲洗培养液为对照,分装及未分装试剂加或不加血清平衡过夜后进行精子存活试验(human sperm motility assay,HSMA),72 h后计算并比较精子存活指数。结果:分装及未分装试剂精子存活指数均>0.85。分装及未分装试剂在同一时间点检测,受精液精子存活指数均为最高,卵裂液精子存活指数均为最低。同一时间点检测,分装试剂精子存活指数均高于未分装,差异均无统计学意义(P>0.05)。试剂在分装及未分装条件下检测,0 d精子存活指数高于14、28 d,14 d精子存活指数高于28 d,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:分装及未分装试剂在开封后28 d内,虽均未表现出明显的胚胎毒性,但精子存活指数随放置时间增加均有下降趋势。因此,试剂开封后28 d内应尽量缩短储存时间。在相同时间点,分装与否对潜在胚胎毒性均无明显影响,但分装可能会减少试剂的污染。因此,试剂未能一次性使用完毕应进行分装。
- 邱枫饶金鹏
- 关键词：IVF胚胎毒性
- 影响小鼠体外受精关键因素的研究
- 2019年
- 目的:探讨促排卵方案及小鼠体外受精环节中去除颗粒细胞、精液洗涤、精卵共孵育时间对昆明小鼠体外受精的影响,为人类辅助生殖技术提供理论基础,并为新开展的辅助生殖实验室建立质控提供更直接可靠的方法。方法:(1)对昆明小鼠促排卵,促排药物孕马血清(PMSG)+绒毛膜促性腺激素(HCG)分为三个组合,分别为6 IU+6 IU,8 IU+8 IU,10 IU+10 IU,统计并比较三组获得的卵子数。(2)分别用卵丘复合体和去除卵丘的卵母细胞与小鼠精子进行体外受精,比较两组受精率。(3)用上游法和简单洗涤法处理小鼠精子,进行体外受精,比较两组受精率。(4)精卵共孵育4 h和16 h,比较两组受精率。结果:(1)促排药物PMSG+HCG为8 IU+8 IU时获得卵子数量显著高于其他两组(P<0.05)。(2)卵丘复合体和去除卵丘的卵母细胞相比,受精率显著增高(P<0.05)。(3)简单洗涤法洗涤精子后与卵子受精比上游法处理精子受精率高(P<0.05)。(4)精卵共孵育4 h的受精率高于共孵育16 h受精率(P<0.05)。结论:选择合适的促排卵药物组合PMSG 8 IU和HCG 8 IU可以获得最多数量的卵子,减少小鼠资源的浪费,体外受精时去除卵丘复合体的卵丘细胞导致受精率显著下降,洗涤法处理精液较上游法明显提高受精率,短时受精能减少氧化应激对受精过程的影响,较隔夜受精受精率高。
- 邱枫饶金鹏蔡益婷
- 关键词：昆明小鼠促排卵体外受精
- 3类洗涤法处理不同质量精液标本的效果比较及在IUI中的应用选择被引量：3
- 2017年
- 目的:通过比较密度梯度离心法(density-gradient centrifugation,DGC)、上游法(swim-up,SU)和简单洗涤法(simple washing,SW)处理不同质量精液标本的效果,优选出最合适的宫腔内人工授精(Intrauterine insemination,IUI)精液洗涤方法。方法:选取男科实验室行精液常规检查的患者中收集精液量≥3 m L的精液标本90份,其中精子浓度<15×10~6/m L的少精症患者精液标本23份,浓度与活力正常(浓度≥15×10~6/m L,PR≥32%且PR+NP≥40%)的精液标本67份,每份精液标本各取3个1 m L分别用密度梯度离心法、上游法和简单洗涤法处理。通过不同方法的洗涤处理,比较各组精子洗涤前后的浓度、活力(PR)及回收率。结果:3种处理方法洗涤后的PR较洗涤前均有显著提高(P<0.05);在处理后的精子浓度方面,简单洗涤法处理要显著高于其余两类方法(P<0.05);在处理后的PR和活率(PR+NP)方面,密度梯度离心法和上游法又要高于简单洗涤法(P<0.05);在回收率方面,密度梯度离心法和简单洗涤法则显著高于上游法组(P<0.05)。结论:在处理少精症患者精液标本时,上游法因其较低的回收率不适宜被采用;当精子浓度<15×10~6/m L且精子总数小于正常值(39×10~6个)时,为保证处理后最终前向精子总数>10×10~6个,精子标本不适合过多次数的洗涤处理,宜采用简单洗涤法;而只有当精液体积较大时,在保证IUI精子终浓度的同时,密度梯度离心法较简单洗涤法能更好地去除白细胞和不成熟生殖细胞等杂质,而更适宜被采用;在处理浓度活力正常精液标本时,密度梯度离心法和上游法较之简单洗涤法能获得更高的精子活力(P<0.05)而更适宜被采用;同时,密度梯度离心法因较之上游法具有更高的回收率(P<0.05),且具备操作易标准化和操作时间短等特点而更具实用价值。
- 饶金鹏邱枫蔡益婷金敏
- 关键词：密度梯度离心法上游法少精症IUI
- 距离-温度联合的新型筛选法提高人精子质量的效果分析
- 2020年
- 目的探讨基于精子前向运动性和温度趋向性的新型筛选方法在提高人精子质量的效果。方法将密度梯度离心后获能的精子置于不同长度(2、5和8 cm)条状液滴的一端,同时设置不同的环境温度条件(恒温32℃、恒温37℃、32℃~37℃温度梯度),孵育60 min后,从液滴的另一端收集精子样本,比较不同距离及温度条件下筛选获得精子的浓度、活力、正常形态率及DNA碎片率等指标的差异。结果在相同的环境温度条件下,经过长距离(5、8 cm)筛选获得的精子比初始精子(0 cm)具有更高的正常形态率(P<0.05);随着距离的延长,精子活力未见显著性改变,但精子的浓度则呈极显著下降趋势(P<0.01)。长距离(5、8 cm)条件下,32℃~37℃温度梯度环境获得的精子浓度高于无温度差值组(恒温32℃和恒温37℃)(P<0.01),且精子DNA碎片率更低(P<0.05)。结论长距离水平游动能淘汰大量形态异常的精子,但过长的距离将导致精子浓度急剧下降,温度梯度的设置能富集得到更多DNA完整性较好的具有正常趋热应答能力的精子。5 cm,32℃~37℃条件下优选精子效果较好,可降低体外受精过程中缺陷精子与卵子发生结合的风险。
- 饶金鹏邱枫蔡益婷魏凯金敏金帆
- 关键词：精子
- 密度梯度离心法、上游法、简单洗涤法处理不同质量精液标本的比较分析
- 饶金鹏邱枫金敏
- 三维扫描重建女性生殖系统模型在胚胎移植培训中的应用
- 2020年
- 目的探讨三维扫描重建技术在胚胎移植培训中的效果。方法用三维扫描仪、数据处理软件EXScan-Pro、3D打印机重建出标准及子宫颈内口狭窄两套女性生殖系统模型。对20位临床及实验室人员进行废弃胚胎的模拟移植培训教学,并对培训前后胚胎种植部位准确性、胚胎移植操作时间以及更换移植导管的频次进行统计和评价。结果胚胎种植部位准确性得分由(0. 60±0. 41)分提高至(1. 37±0. 29)分(P<0. 05);胚胎移植操作时间由(340±146) s缩短至(180±59) s(P<0. 05);更换移植导管的频次由(0. 83±0. 37)次下降(0. 23±0. 13)次(P<0. 05)。结论三维扫描重建女性生殖系统模型应用于胚胎移植教学培训,能有效增加操作者正式上台手术前的实践经验,提高胚胎移植技术实施的稳定性,也有利于建立规范的操作流程,是传统观摩和带教方法的有益补充。
- 饶金鹏邱枫蔡益婷魏凯金敏金帆
- 关键词：生殖系统胚胎移植培训教学
- 解冻液I温度设定对小鼠卵母细胞玻璃化冻融效果的影响被引量：3
- 2016年
- 目的探讨预热至37℃的解冻液I和预热至室温(22℃)的解冻液I对小鼠卵母细胞玻璃化冻融效果的影响。方法对6周龄昆明系雌鼠进行促排卵,脱去颗粒细胞后选取形态良好的MII期卵母细胞,用含不同浓度DMSO+EG的磷酸盐缓冲液(5%DMSO+5%EG,10%DMSO+10%EG,20%DMSO+20%EG+30%蔗糖)对其进行玻璃化冷冻,储存2天后对小鼠卵子进行解冻复温。将卵子随机分为两组,一组投入预热至37℃的解冻液I(含30%蔗糖的磷酸盐溶液),另一组投入预热至室温(22℃)的相同浓度的解冻液I中,再分别移至预热至室温(22℃)的解冻液II、III和IV(分别含20%、10%、5%蔗糖的磷酸盐溶液),随后对两组卵母细胞的复苏率进行统计比较。结果共计对119枚小鼠卵子进行玻璃化冻融,其中61枚置于预热至37℃的解冻液I,有52枚存活良好,复苏率为82.25%(52/61),其余58枚置于预热至室温(22℃)的解冻液I进行解冻,有23枚存活良好,复苏率为39.66%(23/58),37℃组的复苏率显著高于室温(22℃)组(P<0.01)。结论虽然降低平衡时的温度可以减少高浓度玻璃化冷冻保护剂对卵子的毒性作用,但较快的升温速度可以帮助卵子快速通过-120℃^-35℃的危险阶段,而37℃的解冻液I环境较之室温(22℃)能更好地加速这一过程,避免重结晶对细胞的致命损伤。
- 饶金鹏邱枫金敏
- 关键词：玻璃化冷冻复苏率
