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人g2型溶菌酶的多克隆抗体制备及其在睾丸中的表达分析被引量：3: 2016年; 目的以真核表达的人g2型溶菌酶(human goose-type lysozyme 2,LysG2)为免疫原制备抗LysG2的兔多克隆抗体,检测LysG2在睾丸组织中的定位,为阐明其生理功能提供线索。方法对LysG2毕赤酵母GS115转化菌株进行高密度培养,甲醇诱导目的蛋白表达并通过甲壳素亲和色谱纯化,以重组蛋白为免疫原制备兔抗LysG2多克隆抗体。通过ELISA检测抗体效价后,对人体各组织、精子及精液标本进行Western印迹分析,并对人睾丸组织进行免疫组化检测。结果以毕赤酵母表达LysG2为免疫原制备的抗体具有高效价,表达谱分析表明LysG2在睾丸中有表达,在精子蛋白提取物中没有检测到其存在,在精浆中检测到了LysG2。免疫组化检测结果显示LysG2在睾丸中主要定位于间质组织的Sertoli细胞。结论本研究成功以真核表达的LysG2制备了该蛋白多克隆抗体,LysG2在睾丸Sertoli细胞有表达,并分泌到精浆中,提示LysG2可能在男性生殖系统先天性免疫中发挥作用。; 黄鹏杨智昉谢君徐一新鲍建瑛曹晓娥张宁余龙; 关键词：毕赤酵母多克隆抗体睾丸先天性免疫

人精浆中人鹅型溶菌酶2(HLysG2)的纯化及其酶学活性分析被引量：1: 2017年; 目的从人精浆中分离纯化天然人鹅型溶菌酶2(HLysG2)并对其酶活性进行分析。方法通过Western blot法检测HLysG2在精液中的分布;分别使用阳离子交换层析、甲壳素亲和层析和分子筛层析技术从精浆中分离目的蛋白并利用Western blot法及质谱分析对其进行鉴定;使用高效液相色谱(HPLC)法分析纯化产物的纯度;使用比浊法测定HLysG2的最适pH值、最适离子浓度、最适温度和标准酶活性;使用克隆形成单位法测定HLysG2的杀菌活性。结果利用Western blot法在精浆中检测到HLysG2的存在;从人精浆中分离到相对分子质量(Mr)约21 500的目的蛋白并通过Western blot法及质谱分析鉴定其为HLysG2。纯化产物纯度达到99.0%以上。在pH6.4,30℃,Na+浓度为0.09 mol/L的条件下,HLysG2最高酶活性达到13 800 U/mg。体外检测显示HLysG2对溶壁微球菌、枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌具有杀菌作用,但对铜绿假单胞杆菌和大肠埃希菌的杀菌作用不显著。结论使用层析方法可以从人精浆中成功分离纯化到天然HLysG,其在体外具有对Gram阳性菌的杀菌活性,提示其可能在男性生殖系统的先天免疫中发挥作用。; 黄鹏杨智昉鲍建瑛张宁李文姝; 关键词：精浆纯化先天性免疫

人源类溶菌酶蛋白4的多克隆抗体制备及其表达分析被引量：4: 2017年; 目的:以原核表达的人源类溶菌酶蛋白4(LYZL4)为免疫原制备多克隆抗体,检测LYZL4在睾丸组织中的定位,为阐明其生理功能提供依据。方法:将LYZL4编码基因克隆于原核表达载体pET32a,IPTG诱导重组LYZL4(r LYZL4)表达。分别使用Ni-NTA树脂和甲壳素亲和层析纯化rLYZL4,采用双层琼脂平板扩散法检测杀菌活性。以Ni-NTA树脂纯化产物为免疫原制备兔抗rLYZL4多克隆抗体,通过ELISA测定抗体效价,Western印迹检测抗体特异性后,检测LYZL4蛋白在人体各组织的分布及其在精子和精浆中存在情况,免疫组化确认LYZL4在人睾丸组织中的定位。结果:原核表达系统可有效表达rLYZL4,其对溶壁微球菌及大肠杆菌无杀灭活性。制备的兔抗rLYZL4多克隆抗体具有很高的效价和特异性,在睾丸、附睾及人精子蛋白提取物中可检测到LYZL4存在,在生精小管中,LYZL4定位于圆形精子细胞及长形精子细胞的顶体上。结论:本研究成功以原核表达的rLYZL4制备了该蛋白的多克隆抗体,确认LYZL4在睾丸和附睾有表达,并定位于精子顶体上,提示其可能与顶体结构或功能相关。; 黄鹏杨智昉徐一新鲍建瑛张宁曹晓娥李文姝; 关键词：原核表达系统多克隆抗体睾丸精子

基于临床病理相似度的阿尔茨海默病转基因小鼠模型优化研究与应用: 孙安阳张宁; (一)科技领域：新近的流行病学资料显示，全球已有大约4680万阿尔茨海默病(AD)患者，用于AD的年费用高达8000亿美元(引自世界阿尔茨海默病最新报告)，远高于苹果等巨头公司的市场价值；其中中国AD患者约为800万。...; 关键词：; 关键词：阿尔茨海默病临床病理治疗药物动物实验

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张宁