蒋望
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
- 供职机构：中国科学院上海巴斯德研究所更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- RIK蛋白的重组表达、多克隆抗体制备及其功能的初步研究
- 2016年
- 目的本研究从MHV68转化得到的小鼠B淋巴瘤细胞中筛选出一种功能尚未明确的蛋白质,暂时命名为RIK。通过对RIK基因克隆、表达和纯化并成功制备其多克隆抗体,并初步探讨其生物学功能,为该蛋白的进一步深入研究奠定基础。方法通过RT-PCR的方法检测B淋巴瘤细胞系和原代B细胞中的RIK m RNA水平,并扩增出RIK的基因片段,采用基因重组技术构建出RIK的原核表达载体,经诱导表达后,利用镍离子柱亲和纯化出RIK重组蛋白,免疫新西兰大耳兔,制备抗RIK多克隆抗体,ELISA和Western blot检测抗体灵敏度和特异性。最后,通过在过表达鼠源RIK的小鼠NIH3T12细胞中,进行MHV68病毒感染实验,初步确定其生物学功能。结果 RT-PCR检测发现RIK在B淋巴瘤细胞系中m RNA水平高于原代B细胞,并且成功构建人源和鼠源重组表达质粒p ET-28a(+)-h/m RIK,实现包涵体形式RIK蛋白的诱导表达纯化和抗体制备,SDS-PAGE和Western blot证实获得的抗RIK多克隆抗体与预期结果一致,能够特异地识别RIK蛋白。同时,研究发现,在小鼠NIH3T12细胞中过表达m RIK蛋白,能够有效的抑制MHV68对该细胞的感染。结论本研究成功实现了RIK的重组表达、抗体制备,并且发现RIK蛋白对于MHV68的感染具有十分有效的抑制作用,实现了对其功能的初步研究,并且为深入研究奠定了基础。
- 张朝璨邝林林蒋望陈桂芳梁小珍
- 关键词：RT-PCR多克隆抗体
- 一种新型构建HCV病毒感染可视化报告系统的细胞修饰方法
- 本发明提供了一种新型构建HCV病毒感染可视化报告系统的细胞修饰方法使用该方法能够简单灵敏实时进行丙型肝炎病毒(HCV)病毒感染的检测，能清晰准确的显示被感染细胞，可应用于感染细胞筛选及抗HCV病毒药物的高通量筛选。
- 龙钢赵凡凡马鹏娟杨再立蒋望
- 文献传递
