常志远
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
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- 毛果杨中与PtMKK4互作的PtMPKs的筛选及验证
- 2015年
- 【目的】在外界刺激传递到胞内引起细胞响应的信号转导网络中,促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)级联途径处于中心环节。该途径由MAPKKK,MAPKK和MAPK 3种蛋白激酶组成,各组分之间以逐级磷酸化的方式构成信号放大途径,特异感受上游刺激,将信号放大并向下传递给靶蛋白。迄今尚未在杨树中确定一条完整的MAPK信号通路。毛果杨MAPKK成员PtMKK4在干旱信号转导中发挥重要作用,筛选、鉴定其进一步激活的靶标MAPKs将为深入理解MAPK级联途径调控植物逆境响应机制提供重要信息。【方法】利用酵母双杂交和双分子荧光互补技术筛选、鉴定与PtMKK4互作的MAPKs,并采用半定量PCR方法对筛选到的PtMPKs在干旱和高盐胁迫处理下表达水平的变化进行分析。【结果】分别构建pGBKT7-PtMKK4诱饵表达载体和pGADT7-Pt MPKs猎物表达载体,共转化酵母Y2H感受态细胞。仅共转化p GBKT7-Pt MKK4和pGADT7-PtMPK6-1的酵母菌可在营养缺陷型筛选培养基SD/-Ade/-Trp/-Leu/-His和SD/-Ade/-Trp/-Leu/-His/X-α-gal中生长,且在SD/-Ade/-Trp/-Leu/-His/X-α-gal中生长的菌落显示蓝色。双分子荧光互补试验进一步证实PtMKK4和PtMPK6-1存在蛋白互作。此外,与PtMKK4相似,PtMPK6-1可被20%PEG和200 mmol·L-1NaCl诱导表达。【结论】在毛果杨MAPK级联途径中,PtMPK6-1可能为PtMKK4激活的靶标。
- 王磊宿红艳顾亮常志远陈娜
- 关键词：酵母双杂交
