陈建亮
- 作品数：3 被引量：7H指数：1
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- 受体相互作用丝氨酸-苏氨酸激酶3在胆汁淤积性肝损伤中的作用及机制被引量：1
- 2017年
- 目的：探讨受体相互作用丝氨酸-苏氨酸激酶3（RIP3）在胆汁淤积性肝损伤中的作用及机制。
方法：采用实验研究方法。（1）肝星状细胞株HSC-T6细胞处理和活性检测：采用RIP3-siRNA和NC-siRNA转染HSC-T6细胞。采用CCK8法检测未转染、转染RIP3-siRNA、转染NC-siRNA的HSC-T6细胞存活率。采用100 μmol/L甘氨鹅脱氧胆酸（GCDCA）试剂处理HSC-T6细胞后0、2、4、8、12 h取材细胞并保存，检测12 h细胞存活率。采用100 μmol/L GCDCA试剂处理RIP3敲低HSC-T6细胞后培养12 h，检测细胞存活率。（2）胆管结扎小鼠模型建立：采用随机数字表法将40只小鼠分为8组，每组5只。Sham组：仅游离胆总管，不结扎，于术后第7天取下腔静脉血和肝组织；BDL-1 d组、BDL-3 d组、BDL-5 d组、BDL-7 d组、BDL-14 d组、BDL-21 d组、BDL-28 d组：分别于行胆总管结扎术后第1、3、5、7、14、21、28天取材。（3）RT-PCR检测细胞和肝组织RIP3、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、TNF-α mRNA相对表达量。（4）Western blot检测细胞和肝组织RIP3、α-SMA、TNF-α蛋白相对表达量。正态分布的计量资料以±s表示，不同时间点数据检验采用方差分析，多组间比较采用方差分析，两组间比较采用t检验。
结果：（1）不同HSC-T6细胞活性和RIP3、α-SMA、TNF-α mRNA及蛋白表达情况： CCK8检测结果显示：采用100 μmol/L GCDCA试剂处理HSC-T6细胞和RIP3敲低HSC-T6细胞后12 h细胞存活率分别为61.3%±0.3%和83.2%±0.4%，与未采用100 μmol/L GCDCA试剂处理HSC-T6细胞和RIP3敲低HSC-T6细胞培养12 h存活率（98.4%±0.7%和97.4%±0.7%）4者比较，差异有统计学意义（F=115.200，P〈0.05）。其中后两者比较，差异无统计学意义（t=1.283，P〉0.05）；未采用100 μmol/L GCDCA试剂处理HSC-T6细胞存活率分别与采用100 μmol/L GCDCA试剂处理HSC-T6细胞和RIP3敲低HSC-T6细胞存活率比较，差异均有统计学意义（t=17.910，
- 李书陈建亮周澍曹守纪楼芸沈海源李国强
- 关键词：肝损伤胆汁淤积
- 内质网应激调节肝星状细胞HGF表达的作用机制被引量：1
- 2016年
- 目的:探讨内质网应激对肝星状细胞分泌肝细胞生长因子(hypatocyte growth factor,HGF)的影响及其可能机制。方法 :通过在培养的大鼠肝星状细胞T6中分别加入5.0μg/m L衣霉素或0.2μmol/L毒胡萝卜素建立肝星状细胞内质网应激模型,4.0 mmol/L 4-苯基丁酸钠(4-phenylbutyrate,4-PBA)和200.0μmol/L salubrinal作为内质网应激抑制剂对T6细胞进行预处理,重组慢病毒LV-e If2α-sh RNA-GFP敲减T6细胞中的e If2αm RNA表达,并提取m RNA和全蛋白进行RT-PCR和Western blot实验检测HGF、分子伴侣重链结合蛋白(glucose-regulated protein 78,GRP78)、真核翻译起始因子2α(eukaryotic translation initiation factor 2α,e If2α)、磷酸化e If2α、激活转录因子4(activating transcription factor 4,ATF4)以及凋亡信号分子C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)。结果:衣霉素、毒胡萝卜素可诱导T6细胞GRP78升高,激活内质网应激状态的同时抑制HGF表达,4-PBA和salubrinal可阻止内质网应激引起的HGF降低,但对ATF4和CHOP的表达作用不同。慢病毒转染T6降低细胞e If2α表达的同时成比例降低HGF表达。结论:ERS激活后可通过影响e If2α表达从而抑制HGF表达。
- 刘雨亭李书陈建亮周澍曹守纪俞悦李国强
- 关键词：内质网应激肝细胞生长因子肝星状细胞
- 微小RNA-30a在肝纤维化中的表达及其影响被引量：5
- 2016年
- 目的 观察微小RNA（miRNA,miR）-30a在肝纤维化中的表达及其对肝纤维化的影响.方法 通过C57BL/6小鼠胆管结扎（对照组10例,胆管结扎组15例）和10 ng/ml转化生长因子-β1（TGF-β1）处理肝星状细胞（LX-2和HSC-T6）分别构建体内和体外肝纤维化模型.通过转染miR-30a mimics和miR-30a agomir分别在肝星状细胞和小鼠体内过表达miR-30a.提取总RNA和全蛋白进行反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot实验检测miR-30a、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、Ⅰ型胶原蛋白（collagen Ⅰ）和基质金属蛋白酶抑制剂-1（TIMP-1）.通过苏木素-伊红（HE）染色、胶原纤维染色（Masson染色）检测肝组织纤维化程度.结果 RT-PCR检测10例对照组和15例胆管结扎组小鼠肝脏miR-30a相对表达水平（2.037 ±0.256,n=10;1.007 ±0.126,n=15;P＜0.01）.10 ng/ml TGF-β1处理肝星状细胞24h和48 hmiR-30a相对表达水平（LX-2：24 h,0.578±0.055,48 h,0.585±0.048;HSC-T6：24 h,0.698±0.055,48 h,0.610±0.033）,明显低于对照组（LX-2：1.013±0.080;HSC-T6：1.001±0.013,P＜0.05）,表明miR-30a在体内和体外诱导的肝纤维化模型中表达下降.通过miR-30a mimics转染肝星状细胞株诱导细胞内过表达miR-30a、α-SMA相对表达水平（LX-2：对照组1.024±0.106,miR-30a高表达组0.464±0.021,P＜0.05;HSC-T6：对照组1.031±0.095,miR-30a高表达组0.352±0.042,P＜0.05）.通过尾静脉注射miR-30a agomir在小鼠体内高表达miR-30a,胆管结扎预处理小鼠α-SMA相对表达水平（对照组2.618±0.116,miR-30a高表达组1.207±0.197,P＜0.05）.表明过表达miR-30a能够抑制体内和体外肝纤维化进程.结论 miR-30a在肝纤维化中表达下降,过表达miR-30a能抑制肝纤维化进程.
- 陈建亮李书刘雨亭周澍曹守纪李国强
- 关键词：肝星状细胞肝纤维化
