陈俊伟
- 作品数：11 被引量：27H指数：4
- 供职机构：广东温氏食品集团股份有限公司更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目国家质检总局科技计划项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 广西黄鸡β-防御素基因的克隆、序列分析与组织分布被引量：2
- 2008年
- 用设计的特异性引物，采用RT-PCR方法扩增到广西黄鸡β-防御素基因gallinacin-1（简称Gal-1）-gallinacin-13（简称Gal-13）．通过克隆、测序获得这13个基因的cDNA核苷酸序列，并提交到GenBank（Gal-1-Gal-13基因的注册号为：DQ858297-DQ858310）．比较分析广西黄鸡13种β-防御素Gal-1～Gal-13基因分别与GenBank中注册的防御素基因氨基酸序列的相似性，其氨基酸的相似性均在95．5％～100％之间．利用DNAStar软件对所获得的13种广西黄鸡β-防御素基因进行系统发育树分析，结果Gal-1与Gal-5、Gal-12、Gal-2在同一分支上，Gal-6、Gal-7、Gal-9、Gal-8在同一分支上，Gal-10、Gal-11、Gal-4在同一分支，Gal-13独自为一分支．同样用RT-PCR方法分析了广西黄鸡肛防御素Gal-1～Gal-13基因在不同组织中的分布，结果发现：Gal-1、Gal-2、Gal-4、Gal-5、Gal-6、Gal-7、Gal-10的表达分布非常广泛，Gal-3、Gal-8、Gal-9、Gal-11、Gal-12、Gal-13的分布较少．
- 冀君陈燕珊张祥斌陈俊伟马静云毕英佐谢青梅
- 关键词：Β-防御素
- 丝羽乌骨鸡β-防御素基因的克隆和序列分析被引量：3
- 2008年
- 用设计的特异性引物,采用RT-PCR技术特异性地扩增到丝羽乌骨鸡β-防御素基因Gal-1(Gallinacin-1),Gal-1(a)(Gallinacin-1(a)),Gal-2(Gallinacin-2),Gal-4(Gallinacin-4)～Gal-13(Gallinacin-13)基因共13个基因编码区全长片段。通过克隆、测序获得13个基因的cDNA核苷酸序列,并提交到GenBank,丝羽乌骨鸡β-防御素Gal-1,Gal-1(a),Gal-2,Gal-4～Gal-13基因的登录号为:DQ677632￣DQ677644。将丝羽乌骨鸡13种β-防御素Gal-1～Gal-13基因分别与GenBank中收录的防御素基因比对分析,其氨基酸序列的相似性均在95.5%～100%之间。利用DNAStar软件对所获得的13种丝羽乌骨鸡β-防御素基因进行系统发育树分析,结果Gal-1、5、12在同一分支上,Gal-1(a)、4、8在同一分支上,Gal-1、2、9在同一分支,Gal-6、7在同一分支,Gal-13独在一分支上。
- 张祥斌谢青梅马静云陈燕珊冀君陈俊伟毕英佐
- 关键词：丝羽乌骨鸡Β-防御素
- 5个中国地方品种鸡β-防御素基因的体内诱导表达
- 采用RT-PCR技术检测了13种β-防御素Gal-1～Gal-13基因在中国地方品种广西黄鸡、竹丝鸡、杏花鸡、清远麻鸡、胡须鸡5个地方鸡种各组织中的分布.结果表明,Gal-1、Gal-2、Gal-4、Gal-5、Gal-...
- 谢青梅曹永长舒鼎铭马静云陈燕珊陈俊伟毕英佐
- 关键词：种鸡基因表达
- 文献传递
- 微量抗原浓度条件下C1q-ELISA检测方法的建立与应用
- 本研究以纯化的H1N1亚型猪流感病毒(Swine Influenza Virus，SIV)作抗原，按常规制取单克隆抗体的方法筛选到3株能稳定分泌抗体的杂交瘤，分别命名为ⅢF6A4C10，ID4A3D8，IC3H5H4。其...
- 陈俊伟
- 关键词：单克隆抗体酶联免疫吸附试验灵敏度
- 文献传递
- 广西黄鸡β-防御素Gal-4基因的克隆和体内诱导表达被引量：4
- 2006年
- 采用RT-PCR方法从广西黄鸡骨髓中扩增了β-防御素Gal-4基因的cDNA片段。序列分析结果表明,获得的广西黄鸡Gal-4基因大小为321 bp,推导的Gal-4由63个氨基酸组成,其中N端20个氨基酸为信号肽,C端38个氨基酸组成Gal-4的成熟肽。另外,分析了Gal-4基因在正常广西黄鸡(对照组)和H9N2禽流感病毒感染的广西黄鸡(感染组)的肺、肝、腔上囊、十二指肠、肾、气管组织中的表达情况。分析结果表明,在检测的6个组织中,肺、十二指肠、肾组织Gal-4基因的表达在感染组和对照组之间没有明显的差别,而在肝、气管和腔上囊组织中的表达有明显差异,感染组比对照组的Gal-4阳性样品数多。在肝组织中,对照组的30个样品检测到26个阳性样品,而感染组的30个样品全都是阳性；在气管组织中,对照组30个样品检测到19个阳性样品,而感染组的30个样品检测到24个阳性样品；在腔上囊组织中,Gal-4基因的诱导表达情况非常明显,对照组30个样品中仅有9个阳性,而感染组的30个样品中有21个阳性。
- 谢青梅陈燕珊马静云陈俊伟毕英佐曹永长
- 水泡性口炎病毒血清型特异LUX实时荧光RT-PCR检测方法的建立被引量：8
- 2008年
- 采用LUX荧光核酸扩增技术原理,以水泡性口炎病毒(VSV)NJ、IND型NS基因为模板分别设计并合成单标记LUX荧光引物,建立血清型特异的VSV荧光RT-PCR检测方法。试验表明,两种型特异的LUX荧光RT-PCR能分别特异地鉴定VSV血清型,对口蹄疫、猪水泡病等病毒以及对照细胞、健康动物组织RNA样品的检测结果均为阴性。对比检测试验表明,LUX荧光RT-PCR的检测敏感性比常规RT-PCR提高达10倍以上,对VSV细胞增殖病毒液的检测灵敏度可达1 TCID50。对人工感染豚鼠样品以及临床样品的检测试验证实,该LUX荧光RT-PCR可有效检测到人工感染动物组织以及进口牛临床样品中的水泡性口炎病毒,并能鉴定感染病毒血清型。所报道的检测方法,包括样品核酸提取、LUX荧光RT-PCR以及熔解曲线分析,可在3 h内完成。
- 陈茹刘中勇曾碧健曹永长陈俊伟赵吟林志雄毕英佐
- 关键词：水泡性口炎病毒
- 新生仔猪小肠上皮细胞体外培养的研究被引量：4
- 2010年
- 采用灌肠消化、组织块消化、机械刮取+胰蛋白酶消化和机械刮取+胶原酶消化等4种方法对仔猪小肠黏膜上皮细胞(Intestinal epithelial cell,IEC)的体外分离培养进行了比较.结果表明,使用机械刮取+胶原酶消化法分离IEC,可简便快速地获得数量大、活性高的小肠上皮细胞,其中原代培养细胞24 h出现贴壁,7～8 d明显增殖,10～12 d贴壁细胞汇合成片,18～21 d细胞呈"铺路石"状;传代培养细胞3 h出现贴壁,3～4 d快速增殖.采用碱性磷酸酶显色反应检测,90%以上的贴壁细胞呈阳性反应.
- 李莉高淑静张守全陈俊伟陆咸赏罗园江青艳
- 关键词：小肠上皮细胞原代培养传代培养
- H5亚型禽流感病毒单克隆抗体的制备
- 本实验用纯化的H5禽流感病毒免疫BALB/C小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经三次克隆和间接ELISA筛选,获得ⅡB6C3、ⅠE6、ⅡA8H11、ⅢF6G8、ⅢC2D1、ⅡE9G8、ⅡA8F12、D...
- 谢青梅陈俊伟王玲玲马静云毕英佐曹永长
- 关键词：禽流感病毒H5亚型单克隆抗体
- 文献传递
- 牛流行热病毒一步法RT-PCR检测方法的建立被引量：4
- 2014年
- 根据NCBI上公布的牛流行热病毒G基因序列设计、合成了一对检测牛流行热病毒G基因的RT-PCR引物,以牛流行热疫苗为模板,建立了牛流行热的RT-PCR检测方法,经扩增得到大小799bp的片段。该方法具有良好的特异性、敏感性,能扩增出含量为9.576pg的BEFV RNA。从17份疑似牛流行热病毒感染的牛全血中检测出阳性病例5份,经测序后证明为牛流行热病毒G基因片段。结果表明,建立的一步法RT-PCR方法简便易行,可用于牛流行热的分离鉴定、临床病料的检测和分子流行病学调查。
- 廖承球周庆丰陈俊伟潘永飞卢围王东东蔡新斌宋延华
- 关键词：牛流行热病毒一步法RT-PCR
- 猪萨佩罗病毒YC2011株1D基因的克隆及原核表达被引量：4
- 2014年
- 为研发猪萨佩罗病毒(PSV)检测试剂,根据PSV YC2011毒株核苷酸序列,设计针对1D基因的特异引物,以YC2011毒株为模板,利用RT-PCR方法,成功扩增出1D基因,将该基因与原核表达载体pET-32a(+)连接,转化表达菌株BL21。经PCR和测序鉴定,阳性菌株IPTG诱导表达,融合蛋白1D进行SDS-PAGE和Western blot检测分析。结果表明,成功构建了原核表达菌株,其所表达的融合蛋白分子质量约为51ku,且可被猪萨佩罗病毒阳性血清所识别。
- 陈俊伟张祥斌张云静周庆丰宋延华李薇陈峰薛春宜毕英佐曹永长
- 关键词：原核表达
