周良
- 作品数：3 被引量：9H指数：2
- 供职机构：南方医科大学公共卫生与热带医学学院放射医学系更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 14-3-3σ在中波紫外线诱导的HaCaT细胞增殖和周期中的作用被引量：1
- 2016年
- 目的 初步研究14-3-3σ在中波紫外线（UVB）照射诱导的HaCaT细胞增殖和周期阻滞中的作用。方法 不同剂量UVB（0、10、20、30、40、50、60和80 mJ/cm2）照射HaCaT细胞和14-3-3σ稳定干扰细胞系（HaCaTKD14-3-3σ,以下简称HaCaTKD）。照后48 h,结晶紫染色法观察细胞生长密度。30 mJ/cm2UVB照射后,CCK-8法检测HaCaT和HaCaTKD细胞的增殖变化,流式细胞术分析细胞G2/M期细胞比例的变化,Western blot检测UVB照射后两种细胞的14-3-3σ、Cdc2、Cdc25c和Cyclin B1蛋白表达水平。结果 UVB照后48 h,两种细胞存活率均呈剂量依赖性下降,且HaCaTKD在10 mJ/cm2即可出现明显下降（t=8.83~49.63,P〈0.05）。HaCaTKD细胞的增殖能力显著低于HaCaT细胞（F=32.89,P〈0.05）;30 mJ/cm2的UVB照射后,HaCaT细胞在24 h后恢复增殖能力,但HaCaTKD细胞在72 h仍未见增殖变化。HaCaTKD细胞在各观察点G2/M期细胞比例均未改变（P〉0.05）;30 mJ/cm2UVB照射后,HaCaT细胞在6~18 h发生G2/M期阻滞（t=7.41、9.22、9.16,P〈0.05）,HaCaTKD细胞G2/M期细胞比例未发生改变（P〉0.05）。UVB照后6、12、18、24 h和照前相比,HaCaT细胞中14-3-3σ表达量上调（t=5.42~9.57,P〈0.05）;HaCaT和HaCaTKD两种细胞中的Cdc25c和Cyclin B1的表达水平在照后均下调（t=3.95~11.21,P〈0.05）;Cdc2在HaCaT细胞中下调（t=4.93~5.37,P〈0.05）,在HaCaTKD细胞中无变化（P〉0.05）。结论 UVB照射或不照射,14-3-3σ的表达情况均能影响HaCaT细胞的增殖变化和细胞周期,UVB照射能诱导HaCaT细胞发生G2/M期阻滞,这种阻滞可能是由14-3-3σ的表达所介导,进而引起周期相关蛋白Cdc2、Cdc25c和Cyclin B1的表达改变而引发的。
- 黄海波周良王同帅周美娟
- 关键词：中波紫外线增殖细胞周期
- 长链非编码RNA MALAT1促进皮肤鳞癌的发生和发展被引量：6
- 2018年
- 目的探索长链非编码RNA MALAT1在皮肤鳞癌发生发展中的作用,为皮肤鳞癌的临床治疗提供基础理论依据。方法收集55例皮肤鳞癌样本和10例正常皮肤组织样本,采用qRT-PCR与原位杂交方法检测MALAT1在皮肤鳞癌组织和正常组织中的表达情况。在皮肤鳞癌细胞株A431中,采用siRNAs(si NC,si MALAT1-1,si MALAT1-2)和Lipofectamine2000进行细胞转染来敲减基因,采用Transwell实验,细胞划痕实验,CCK增殖实验检测皮肤鳞癌细胞的迁移侵袭能力,运动能力和增殖能力。采用qRT-PCR方法检测A431中MALAT1与上皮间质转化(EMT)样转化相关因子(E-cadherin,Vimentin,β-catenin)的变化;明确其关系。结果相比正常组织,皮肤鳞癌组织的不同分化水平上(高分化,中分化,低分化),MALAT1的表达率均升高(P<0.001)。在皮肤鳞癌细胞A431中,转染MALAT1 siRNAs下调其表达后,与对照相比,其增殖能力(P<0.001),迁移能力(P<0.01),侵袭能力(P<0.01),细胞划痕运动能力均下降(P<0.01)。且EMT相关因子中上皮表型标志物E-cadherin,β-catenin的表达升高(P<0.01),间质表型分子vimentin表达降低(P<0.01)。结论长链非编码RNA MALAT1在皮肤鳞癌的发生发展中起促进作用,可以为皮肤鳞癌的临床治疗提供基础理论依据。
- 李姗姗周良高琳王颖慧丁振华
- 关键词：皮肤鳞癌上皮间质转化
- ABT-263诱导A431细胞凋亡及其对AKT下游信号通路影响被引量：2
- 2018年
- 目的观察抗凋亡蛋白抑制剂ABT-263对人皮肤鳞状细胞癌细胞系A431细胞功能的影响,并探讨相关分子机制。方法 (1)取对数生长期的人永生化表皮细胞(Ha Ca T细胞)与A431细胞提取总蛋白,采用蛋白印迹法检测B淋巴细胞瘤-2(BCL-2)和BCL-XL的蛋白表达水平。(2)分别以浓度为50μmol/L的ABT-263(抑制剂组)和二甲基亚砜(对照组)处理A431细胞,培养4和9 h后,采用透射扫描电子显微镜(TEM)检测各组细胞的形态变化。(3)以剂量为0、10、25、40和50μmol/L的ABT-263处理A431细胞24 h后,采用CCK-8法检测细胞活力。(4)以不同剂量的ABT-263处理A431细胞,采用蛋白印迹法检测活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase-3)、活化聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶-1(PARP-1)、磷酸化蛋白激酶B(p AKT)ser473、磷酸化糖原合成酶激酶-3β(p GSK3β)和磷酸化组蛋白H2AX(γH2AX)的蛋白相对表达水平。结果 A431细胞中的BCL-2和BCL-XL蛋白相对表达水平均高于Ha Ca T细胞(P<0.01)。TEM检查结果显示,抑制剂组A431细胞从正常的形态逐渐变化为凋亡的形态,表现为微绒毛消失,核染色质密度增高并凝聚在核膜周边,核仁裂解。10、25、40和50μmol/L剂量组A431细胞的细胞活力均低于对照组(P<0.05)。10、30和50μmol/L剂量组A431细胞的活化Caspase-3和活化PARP-1蛋白的相对表达水平均高于对照组(P<0.05)。10、25、40、50μmol/L剂量组A431细胞的p AKT(ser473)和p GSK3β的蛋白相对表达水平均低于对照组(P<0.05),γH2AX蛋白相对表达水平高于对照组(P<0.05)。A431细胞活力和p GSK3β蛋白相对表达水平均随抑制剂剂量的增加而减少(P<0.01),活化Caspase-3和γH2AX的蛋白相对表达水平均随抑制剂剂量的增加而增加(P<0.01),均呈剂量-效应关系。结论 ABT-263可诱导A431细胞发生线粒体途径的凋亡,并可诱导AKT/GSK3β信号通路失活,从而促进A431细胞凋亡,呈一定程度的剂量-效应关系。
- 高瑞瑞周良丁振华
- 关键词：A431细胞皮肤鳞状细胞癌
