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红汁乳菇16个萜类合成酶基因的鉴定与表达被引量：1: 2022年; 为了解真菌红汁乳菇(Lactarius hatsudake)萜类合成酶(TPS)基因的功能,从红汁乳菇全基因组中分离获得TPS基因,并对其进行生物信息学分析,系统发育树构建,对它们在不同碳源和氮源培养条件下的表达情况进行分析。结果显示:在红汁乳菇基因组中共分离出16个LhTPS基因,LhTPS10、LhTPS13、LhTPS14仅具有萜烯合酶的DXXD保守结构域,其余蛋白均具有DXXD和NSE保守结构域,因此把16个萜类合成酶分成两类。系统发育树将16个LhTPS分为4个大分支,第Ⅰ、Ⅱ分支为倍半萜合成酶,第Ⅲ分支为倍半萜及二萜合成酶,第Ⅳ分支为倍半萜和三萜合成酶,LhTPS6、LhTPS8、LhTPS11、LhTPS16主要生成Δ-6 protoilludene的相似物或者衍生物,LhTPS7主要生成γ-cadinene的相似物或者衍生物;LhTPS10主要生成δ-cadinene的类似物或者衍生物。表达分析表明,不同氮源的培养基培养条件下的表达情况整体上要优于不同碳源的培养基培养条件下的表达情况。在不同碳源及质量浓度培养基中,以10.0 g·L^(-1)山梨醇培养基为最优,在不同氮源培养基中以番茄培养基为最优。基因簇分析显示7个编码基因所在重叠群有基因簇的存在。; 李云琴王毅原晓龙杨文忠; 关键词：红汁乳菇生物信息学分析基因表达

一个含有CMeT新型NR-PKS基因的克隆与鉴定: 2019年; 地衣中含有种类丰富并具有生物活性的聚酮类化合物,目前对地衣聚酮类化合物的生物合成尚不清楚。本研究通过对皮革肾岛衣地衣型真菌转录组数据的分析,获得一个新的含有甲基转移酶结构域的非还原型聚酮合酶(NR-PKS)基因(NpPKS1),利用RT-PCR技术首次从皮革肾岛衣地衣型真菌中克隆得到该基因全长cDNA,并检测不同培养基对NpPKS1基因表达的影响。结果显示:NpPKS1基因cDNA全长7 857 bp,编码2 618个氨基酸;该蛋白不存在信号肽,在细胞质基质中发挥作用;与含有甲基转移酶结构域的构巢曲霉(Aspergillus nidulans, XP664052)、壳球孢菌(Macrophomina phaseolina, EKG19938)聚为一支;表达分析显示该基因在不同培养基上的表达量差异极其显著,在BMG培养基上的表达量最高,其相对表达量可达39.15。本研究为下一步异源表达皮革肾岛衣地衣型真菌的聚酮合酶、探讨皮革肾岛衣聚酮化合物的生物合成及基因资源的有效利用提供必要的研究材料。; 原晓龙陈中华李云琴王毅; 关键词：基因表达

乳油木叶绿体基因组密码子偏好性分析被引量：15: 2020年; 为了解乳油木叶绿体基因组密码子的使用模式,该研究以从乳油木叶绿体基因组中筛选得到53条长度大于300 bp且非重复的CDS(Coding DNA sequence)序列为材料,利用Codon W 1.4.2和在线软件CUSP分析其密码子偏好性。结果显示,密码子第3位GC含量为27.47%,ENC范围在36.31~56.88,平均值为42.98。RSCU值大于1的密码子有28个,其中27个以A或U为结尾。中性绘图分析、ENC-plot分析和PR2-plot分析的结果显示乳油木叶绿体基因密码子偏好性主要受突变的影响。最优密码子为GGA、GAU、CAU和UUG。本研究结果为提高异源基因表达水平、改良乳油木重要经济性状等提供参考依据。; 原晓龙李云琴张劲峰王毅; 关键词：叶绿体基因组密码子偏好性突变

牡丹花瓣高效液相色谱指纹图谱研究: 2018年; 以不同引种地不同品种的9个新鲜牡丹花瓣为实验材料,采用高效液相色谱法(HPLC)测定9个不同引种地不同品种牡丹花瓣样品中的化学成分。液相色谱条件为Eclipse plus C18色谱柱(4.6×150mm,5μm),流动相为乙腈-1%乙酸梯度洗脱,流速0.8mL/min,检测波长360nm,柱温为35℃。通过中药色谱指纹图谱相似度评价系统(国家药典委员会)进行相似度分析,建立9个样品牡丹花瓣的指纹图谱,为科学评价与有效控制牡丹花瓣产品质量提供新方法。结果表明,本研究建立的分析方法有较好的重复性,9个引种牡丹花瓣样品指纹图谱共有6个主要共有峰,可作为鉴别引种地牡丹花瓣质量的主要依据。; 华梅原晓龙王毅杨卫陈剑马惠芬呼延丽杨宇明杨宇明; 关键词：高效液相色谱指纹图谱

牛樟芝发酵液提取物抗菌活性研究被引量：4: 2017年; 牛樟芝作为一种珍稀食用和药用菌,具有极大的开发潜力。该研究以麦芽浸粉肉汤液体培养基(BD,美国BD公司)对牛樟芝菌丝体进行摇床培养60 d后,收获发酵液并用乙酸乙酯对其进行萃取,浓缩至干获得提取物;同时,采用抑菌圈法评价培养物对13种致病细菌抗菌活性(蜡样芽孢杆菌、缓慢芽孢杆菌、无乳链球菌、短小芽孢杆菌、福氏志贺氏菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、藤黄微球菌、副溶血性弧菌、溶血性葡萄球菌、铜尿假单胞菌、乙型副伤寒沙门氏菌、大肠埃希菌),并检测相应致病细菌的最低抑制浓度(MIC)。结果表明:牛樟芝麦芽浸粉肉汤发酵液提取物对供试的13种致病菌均有抑菌活性;在供试的13种致病菌中,提取物对缓慢芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、副溶血性弧菌、藤黄微球菌5种致病菌的最低抑制浓度值均小于80μg·m L^(-1),其中对藤黄微球菌的最低抑制浓度最低为66.5μg·m^(-1);随着培养时间的增加,提取物的抗菌活性也增加。这说明牛樟芝菌丝体在液体培养条件下,能够产生广谱高效抑菌活性的次生代谢产物。该研究结果为牛樟芝进一步的有效利用开发奠定了理论基础。; 赵能原晓龙陈剑陈中华王娟杨宇明王毅; 关键词：致病细菌

滇牡丹籽油与凤丹牡丹籽油品质及活性对比研究被引量：16: 2016年; 以超临界CO2萃取法提取的滇牡丹籽油与凤丹牡丹籽油为原料,以酸值、碘值、皂化值、过氧化值及两种牡丹籽油脂肪酸组成为品质评价指标,以DPPH自由基清除率及对酪氨酸酶抑制率为活性评价指标,对比研究二者品质和活性。结果表明:滇牡丹籽油与凤丹牡丹籽油的酸值(KOH)分别为1.628 mg/g和1.724 mg/g,碘值(I)分别为172 g/100 g和168 g/100 g,滇牡丹籽油的皂化值(KOH)为186.4 mg/g,在药典规定的注射用油皂化值(KOH)(185~200 mg/g)范围内。二者清除DPPH自由基能力均高于橄榄油,滇牡丹籽油清除DPPH自由基能力稍低于凤丹牡丹籽油,而抗酪氨酸酶活性强于凤丹牡丹籽油。; 赵能肖丰坤施蕊王毅原晓龙王娟; 关键词：理化性质抗氧化

基因组步移技术克隆思茅松α-蒎烯合成酶基因及表达分析被引量：4: 2019年; 蒎烯合成酶(α-pinene synthase, APS)是α-蒎烯生物合成的关键酶。本研究利用同源克隆及基因组步移法从思茅松中克隆得到一个α-蒎烯合成酶基因,命名为PkAPS (GenBank登录号为KX394684),基因全长3 523 bp,含有10个内含子,其c DNA全长1 956 bp,编码651个氨基酸残基。生物信息学分析显示PkAPS属于萜烯合成酶家族蛋白;系统进化树分析显示PkAPS与马尾松α-蒎烯合成酶亲缘关系最近。基因表达分析显示:PkAPS在高产脂思茅松个体各组织的表达量均高于低产产脂思茅松个体;而在高产脂思茅松不同组织中的表达比较中,PkAPS在小枝中的表达量最高。本研究将有利于进一步研究思茅松α-蒎烯合成酶调控机理及培育高产α-蒎烯思茅松新品种的研究。; 王毅朱金鑫原晓龙陈伟李江; 关键词：VAR.

七彩红竹查尔酮合成酶IhCHS1基因的克隆与分析被引量：6: 2014年; 通过已报道查尔酮合成酶基因的保守序列设计特异引物,扩增得到七彩红竹(Indosasa hispida cv.rainbow)查尔酮合成酶(Chalcone Synthase,CHS)基因片段,再以RACE法获得CHS基因全长cDNA序列。该cDNA全长1953 bp,含1542 bp的开放阅读框,编码含513个氨基酸残基的蛋白质。多序列比对结果表明IhCHS1推断的蛋白与节节麦(Aegilops tauschii)等禾本科植物的CHS相似性在87%以上,临位法构建系统发生树显示IhCHS1与禾本科植物CHS亲缘关系较近。RT-PCR结果显示IhCHS1在幼嫩红秆中大量表达。; 周旭王晨晨毕玮王娟杨宇明王毅; 关键词：查尔酮合成酶基因克隆

滇牡丹ω-3脂肪酸脱氢酶基因克隆与功能分析被引量：2: 2017年; ω-3脂肪酸脱氢酶是多不饱和脂肪酸亚麻酸生物合成途径的关键酶。依据转录组数据设计特异性引物,使用RT-PCR方法从滇牡丹克隆得到1个FAD3基因的c DNA全长序列,命名为Pd FAD3(Gene Bank登录号为KX289610)。生物信息学分析结果表明Pd FAD3基因片段序列全长2 134 bp,包含完整的c DNA开放阅读框,编码含有450个氨基酸残基的蛋白质;Blast比对结果显示该蛋白质属于FAD蛋白质家族;系统进化树分析结果显示与芍药属芍药组植物芍药亲缘关系较近;该蛋白质属于跨膜蛋白质,亲水性较低;RT-PCR结果显示其在种子中的表达随着种子成熟出现双峰型的表达量变化,与目前所报道的其他物种的FAD3表达情况相似。为进一步研究其调控机理提供理论依据及获得含高不饱和脂肪酸转基因滇牡丹品种奠定理论基础。; 朱金鑫孙金金原晓龙王娟杨宇明王毅; 关键词：滇牡丹基因克隆基因功能分析

温水和GA_3浸种对冷藏7a云南松种子发芽的影响被引量：2: 2016年; 为了解温水和赤霉素(GA3)浸种对冷藏7 a云南松种子发芽的影响,采用L9(34)正交设计开展试验。试验结果表明,处理组合的发芽率和发芽速分别为8.6%~57.1%和0.3~1.7 d,处理组合间发芽率具有极显著的差异(P=2.43E-11<0.01)。温水浸种是影响种子发芽率的主导因子,浸泡12 h极显著地降低发芽率(P=1.65E-14<0.01),但加速种子发芽;GA3浸种则是影响发芽速的主要因子。清水与低浓度(0.05 g/L^(-1))的GA3浸种组合可提高种子的发芽率,冷藏可延长云南松种子的寿命。; 唐惠李莲芳李春贤王毅杨家伟陈南波; 关键词：温水浸种赤霉素浸种发芽率

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王毅

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