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岳少妲
作品数:
1
被引量:1
H指数:1
供职机构:
青岛大学
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发文基金:
山东省自然科学基金
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相关领域:
医药卫生
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合作作者
赵晴
青岛大学
马蕊
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徐岩
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中华肾脏病杂...
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2016
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7,8-二羟基黄酮对缺氧诱导下肾小管上皮细胞内质网应激的抑制作用
被引量:1
2016年
目的观察7,8-二羟基黄酮(7,8-DHF)对缺氧诱导的人近端肾小管上皮细胞内质网应激(ERS)损伤的影响,并探讨其可能的分子机制。方法体外培养人近端肾小管上皮细胞(HK-2),采用缺氧培养箱建立细胞缺氧损伤模型,排除含血清培养基对缺氧的影响后,实验分为5组,分别为缺氧0h、4h、8h、12h、16h组。实时荧光定量PCR(RT-PCR)法筛选缺氧诱导ERS的最佳缺氧时间。用不同浓度(50、100、150、200、250wm01/L)7,8.DHF处理HK-2细胞,采用细胞增殖与活性实验筛选7,8-DHF的安全浓度。用7,8-DHF预处理HK-2细胞缺氧模型,按以下处理因素分组:对照组、缺氧+DMSO组、缺氧+7,8-DHF组(包括100μmol/L组和150μmol/L组),通过检测细胞增殖与活性筛选最佳给药浓度。后将细胞随机分为缺氧组、缺氧+7,8-DHF组(100μmol/L),Western印迹法检测细胞蛋白激酶(Akt)、磷酸化蛋白激酶(p-Akt)、富含半胱氨酸蛋白61(Cyr61)、ERS相关促凋亡蛋白CCAAT增强子结合蛋白(CHOP)的表达。用重组Cyr61慢病毒载体构建稳定表达Cyr61蛋白的Cyr61-HK-2细胞株进行缺氧实验,按如下处理因素分组:缺氧+空质粒转染组,缺氧+Cyr61过表达组,膜连蛋白V和碘化丙啶(AnnexinV.FITC/PI)染色后,采用流式细胞仪检测细胞凋亡,Western印迹法检测Cyr61和CHOP蛋白的表达情况。结果(1)与对照组细胞相比,RT-PCR实验结果显示12h为诱导ERS的最佳缺氧时间(P〈0.01)。(2)与对照组相比,细胞增殖与活性实验结果显示100μmol/L的7,8-DHF组为最佳给药浓度(P〈0.01)。(3)与缺氧+DMSO组相比,缺氧+7,8-DHF细胞p-Akt、Cyr61表达量均明显增加,CHOP表达量明显降低(均P〈0.05);LY294002处理可抑制p-Akt的表达,减少Cyr61及增加CHOP的表达(均P〈0.05)。(4)与缺氧+空质粒转染组相比,过表达C
马蕊
岳少妲
赵晴
徐岩
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内质网应激
富含半胱氨酸蛋白61
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