李明英
- 作品数：7 被引量：10H指数：1
- 供职机构：大连大学生命科学与技术学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金辽宁省自然科学基金大连市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 原核表达Lunasin的抗炎生物学活性鉴定及其对J774A.1细胞组织因子表达的影响被引量：1
- 2017年
- 目的检测原核表达Lunasin(露那辛)的抗炎生物学活性,为Lunasin今后在生物医药领域的开发奠定基础。方法利用基因工程技术将PCR扩增得到的Lunasin DNA片段定向克隆至表达载体p ET28,酶切及测序鉴定后对其诱导表达,利用镍离子亲和层析法对其进行纯化;Griess法和ELISA法检测小鼠J774A.1细胞培养液中Lunasin对一氧化氮和肿瘤坏死因子α、白细胞介素6等炎症因子含量的影响;Western blot检测Lunasin对核因子κB(NF-κB)p65磷酸化以及组织因子(TF)表达的影响。结果成功构建了Lunasin的原核表达载体,获得纯度达90%的Lunasin多肽。Lunasin能通过抑制脂多糖(LPS)诱导小鼠J774A.1细胞NF-κB的活化而抑制一氧化氮合成以及下游基因肿瘤坏死因子α、白细胞介素6的表达。Lunasin对LPS诱导的J774A.1细胞TF的表达也具有显著抑制作用。结论原核表达的Lunasin表现出显著的抗炎生物学活性,明显抑制LPS诱导的J774A.1细胞TF表达,其机制可能是通过抑制NF-κB的活化而实现的。
- 陈玉华付常振李明英李敬达迟彦
- 关键词：核因子ΚB脂多糖
- 人血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1双顺反子表达载体的构建及其在293T细胞中的表达被引量：1
- 2017年
- 目的尝试构建人血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1(LOX-1)基因双顺反子表达载体并检测其在293T细胞中的表达情况和生物学活性,为深入探讨LOX-1在动脉粥样硬化中的作用和以LOX-1为靶点建立干预机制治疗动脉粥样硬化奠定基础。方法首先根据Primer5.0软件设计引物,采用聚合酶链反应法以LOX-1 c DNA片段为模板扩增LOX-1基因完整编码区,克隆至T载体,经测序成功后亚克隆到双顺反子真核表达载体p IRES2-Ac GFP1-Nuc。利用脂质体转染法将双顺反子重组表达质粒转染至293T细胞,倒置荧光显微镜检测质粒转染情况。采用逆转录聚合酶链反应和免疫印迹法鉴定LOX-1基因在核酸和蛋白水平的表达,采用激光共聚焦检测LOX-1基因在293T细胞膜上的表达,激光共聚焦和流式细胞术检测表达在293T细胞膜上的LOX-1结合氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)的生物学活性。结果成功构建p IRES2-LOX-1双顺反子重组表达载体,将其转染293T细胞后,观察到绿色荧光蛋白基因的表达,初步表明LOX-1基因转染至293T细胞。进一步分子水平鉴定结果表明LOX-1基因在293T细胞核酸和蛋白水平均得到表达,激光共聚焦结果证明LOX-1基因在293T细胞膜上表达。最后激光共聚焦和流式细胞术结果证实表达在293T细胞膜上的人LOX-1基因可以结合氧化型低密度脂蛋白。结论成功构建人LOX-1基因双顺反子表达载体,在此基础上证明其在293T细胞膜上得到表达,并且具有结合ox-LDL的生物学活性,为后续体外研究其在动脉粥样硬化中的作用以及以此为靶点建立干预机制奠定了基础。
- 于田田李敬达刘庆平王仁军乔辉陈玉华李明英于柯楠迟彦
- 关键词：血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1氧化型低密度脂蛋白动脉粥样硬化
- 组织因子与动脉粥样硬化继发血栓形成关系的研究进展被引量：6
- 2017年
- 组织因子(TF)又名血栓形成质,是外源性凝血途径的关键启动子,是决定动脉粥样硬化斑块形成血栓的重要因素之一。本文主要从TF的结构特征、存在形式、动脉粥样硬化斑块内TF的细胞来源、调解组织因子表达的分子机制及TF的治疗意义等方面进行综述,为深入研究其与动脉粥样硬化继发血栓形成的密切关系和开发抑制TF活性的药物提供参考。
- 陈玉华于田田李明英迟彦
- 关键词：动脉粥样硬化血栓形成
- β2糖蛋白Ⅰ第五结构域及其突变体、短肽片段的原核表达及活性分析被引量：1
- 2018年
- β2糖蛋白Ⅰ（beta 2-glycoproteinⅠ,β2GPⅠ）是抗磷脂综合征（antiphospholipid syndrome,APS）血清中抗磷脂抗体（antiphospholipid antibody,a PL）的主要抗原。β2GPⅠ通过第五结构域与阴性磷脂ox LDL结合,进而被a PL识别,是APS动脉血栓发生的关键事件。该研究构建了编码β2GPⅠ第五结构域（β2GPⅠ-DⅤ）、β2GPⅠ-DⅤ突变体及β2GPⅠ-DⅤ的Phe280-Ala320片段的原核表达载体,对其进行诱导表达和纯化,解析了β2GPⅠ-DⅤ与阴性磷脂结合的分子机制,结果表明,β2GPⅠ-DⅤ中Cys281-Cys288以及Ser311-Lys317区段在空间上维持一定构型是与CL结合所必须的前提条件,而C245-C296,C288-C326两个二硫键在维持二者空间构型方面起到一定的作用。在此基础上,进一步检测了具有结合CL生物学活性的r DⅤ结合ox LDL以及APS血清中ox LDL的活性,表明r DⅤ具有与天然β2GPⅠ相一致的生物学活性。该研究获得的rβ2GPⅠ-DⅤ,以及与ox LDL结合的方法体系的建立,为APS早期实验室诊断奠定基础。
- 李明英王仁军张帆迟彦
- 关键词：抗磷脂综合征心磷脂氧化低密度脂蛋白原核表达
- 北方果树主要病毒聚合酶链式反应检测试剂盒的研制被引量：1
- 2019年
- 为使检测ACLSV、ASGV、ASPV、PNRSV和PDV5种果树主要病毒达到最优化检测。本研究以GF305、弗吉尼亚小苹果带毒(阳性)和非带毒(阴性)为试材,提取总RNA,根据ACLSV、ASGV、ASPV、PNRSV和PDV这5种病毒的外壳蛋白基因序列设计引物,利用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术进行检测,最终研制出上述5种果树主要病毒PCR检测试剂盒。利用本试剂盒(该试剂盒已获得国家发明专利授权(ZL200710010565.8)检测果园中存在的病毒,明确了果园中这5种病毒的感染率,实现了快速、灵敏、成本低、特异性强的检测目的。
- 迟彦李明英王冰贾高斌侯义龙
- 关键词：北方果树主要病毒聚合酶链式反应试剂盒
- 3D培养人工皮肤组织黑色素瘤模型建立及评价
- 2018年
- 目的建立体外人工皮肤组织黑色素瘤模型,为研究黑色素肿瘤侵袭和转移的机制及药物筛选奠定基础。方法采用3D培养技术,制备体外人工皮肤组织黑色素瘤C8161、A375模型。应用不同浓度血清(0.5%、5%)优化模型的最优培养条件。HE和免疫荧光观察该模型基底膜形成情况,检测黑色素瘤细胞C8161、A375侵袭能力。应用单层细胞培养检测细胞生长速度和细胞分泌E-钙黏素情况。采用Transwell实验检测不同黑色素瘤细胞侵袭能力。结果体外人工皮肤组织肿瘤模型建立成功,血清浓度0.5%为最佳3D培养条件。构建的人工皮肤组织肿瘤模型形成的基底膜良好,黑色素瘤细胞在此模型中发生侵袭和转移,且C8161侵袭能力强于A375细胞。侵袭力较弱的A375细胞增殖速度高于侵袭力较强的C8161细胞。C8161和A375细胞均不产生E-钙黏素。结论成功建立体外人工皮肤组织肿瘤模型,血清浓度为0.5%为最佳3D培养条件;黑色素瘤细胞的侵袭与生长速度并无直接关系,且失去E-钙黏素表达能力并不是导致肿瘤细胞侵袭的必要条件。
- 谢敏李明英张帆刘庆平秦建中迟彦
- 关键词：恶性黑色素瘤
- 人LOX-1基因毕赤酵母表达载体的构建与表达研究
- 2016年
- 目的构建血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)真核表达载体,筛选高表达菌株,为体外获得有活性重组蛋白奠定基础。方法以实验室保存的含有人源LOX-1基因的质粒为模板PCR扩增LOX-1基因,经过TA克隆后亚克隆至酵母表达载体p PICZαA,将获得的重组质粒电转化至毕赤酵母X-33,利用原位双膜法快速检测阳性高表达菌株,最后经过甲醇诱导,采用Western blot检测LOX-1的表达。结果成功构建LOX-1真核表达载体,双膜法筛选到高表达菌株;Western blot结果显示,LOX-1在上清中得到表达。结论 LOX-1基因在毕赤酵母细胞上清中得到表达,为体外获得活性重组蛋白和研究其致动脉粥样硬化功能奠定基础。
- 刘京于田田陈玉华李敬达陶娅妮李明英王晓陈勇迟彦
- 关键词：血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1真核表达载体构建毕赤酵母动脉粥样硬化
