李颖
- 作品数：9 被引量：5H指数：2
- 供职机构：新疆医科大学基础医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
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- Flag-p107真核表达载体的构建及其在ECA109细胞表达及鉴定
- 2017年
- 目的构建N端含flag标签的p107的真核表达载体,及其在EC109细胞表达的鉴定。方法设计引物在p107蛋白N端增加flag标签,通过PCR扩增获得3×flag-p107cDNA片段,将此片段插入真核表达质粒CMV-MCS-SV40-Neomycin中;再与质粒CMV-MCS-SV40-Neomycin连接,将所得的融合基因进行PCR、酶切及DNA测序验证正确后,利用电转染将其转染至ECA109细胞中;利用Western-Blotting检测融合蛋白CMV-MCS-3flag-p107-SV40-Neomycin的表达情况。结果重组真核表达载体构建正确,该重组质粒能在ECA109细胞中表达。结论成功构建真核表达载体CMV-MCS-3flag-p107-SV40-Neomycin并建立了其在ECA109细胞的表达。
- 来雯婷崔元龙刘伊宁李晓苗吉别克.瓦提别克美丽吾尔提.达吾列提汗沙亚哈提.别尔克哈之王海峰李颖李惠武李卉
- 关键词：分子克隆
- 在Eca109细胞中Lrig1对Survivin和Caspase-9的调控研究
- 2018年
- 目的采用多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1(Lrig1)过表达的方式,确定在食管鳞癌细胞(Eca109细胞)中是否存在Lrig1对Survivin和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase-9)的调控。方法使用重组质粒GV-219-Lrig1转染Eca109细胞使其过表达Lrig1;采用荧光定量聚合酶链式反应(PCR)法和蛋白质印迹法分别检测细胞中Lrig1、Survivin和Caspase-9的信使核糖核酸(m RNA)及蛋白的表达水平,使用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果重组质粒GV-219-Lrig1转染Eca109细胞24 h后,在m RNA水平,Lrig1表达量显著增高(P<0.01),而Survivin和Caspase-9无明显变化(P>0.05);在蛋白水平,Lrig1和Cleaved-Caspase-9表达量都显著增加(P<0.05),而Survivin表达量无明显变化(P>0.05);流式细胞仪检测结果显示,与GV-219(NC组)相比,重组质粒GV-219-Lrig1转染的Eca109细胞24 h细胞晚期凋亡率增加1.6%。结论在Eca109细胞中,过表达Lrig1使其在转录和蛋白水平的表达量显著增加,可明显增加Cleaved-Caspase-9的蛋白水平。但对Survivin的表达没有影响。其调控机制尚待进一步研究。
- 李颖李惠武刘玲屈园张法煌贾粟枚芳芳陈艳李卉喻亮
- 关键词：食管鳞癌细胞LRIG1SURVIVINCASPASE-9
- Eca109细胞中自噬模型的建立被引量：1
- 2016年
- 目的:在食管鳞癌细胞Eca109中建立自噬模型.方法:按照常规细胞培养方法,将pmcherry-GFP-LC3质粒转染进入Eca109细胞,mcherry为红色荧光蛋白,GFP为绿色荧光蛋白,可示踪自噬体形成.加入浓度为50nmol/L自噬激活剂雷帕霉素,建立自噬模型.采用电镜观察雷帕霉素诱导后细胞中自噬小体的产生,激光共聚焦显微镜观察自噬发展的阶段,并对发生自噬行为的细胞进行计数.结果:雷帕霉素诱导后可见明显的自噬小体,激光共聚焦采图可见自噬细胞数量明显增多(P<0.05).结论:1.在Eca109细胞中通过加入自噬诱导剂雷帕霉素成功构建细胞自噬模型;2.细胞自噬模型的建立为研究肿瘤细胞自噬活动的现象和分子调控机制提供了新的实验平台.
- 李晓苗刘伊宁来雯婷吉别克.瓦提别克美丽吾尔提.达吾列提汗沙亚哈提.别尔克哈之王海峰李颖李惠武李卉
- 关键词：食管鳞癌ECA109细胞自噬雷帕霉素
- Bad真核表达载体的构建及鉴定
- 2017年
- 目的构建促凋亡基因Bad真核表达载体并鉴定其在人食管鳞癌细胞ECA109和KYSE450细胞中的表达。方法设计Bad基因引物,通过PCR扩增获得其cDNA片段,经双酶切后,将此片段克隆至真核表达载体GV142中,转入DH5α,获得重组质粒GV142-Bad;PCR扩增、酶切及测序验证后,将其及对照空载体转染人食管鳞癌ECA109和KYSE450细胞,转染后24h,通过荧光倒置显微镜观察细胞中绿色荧光信号的表达情况,提取总RNA,使用qPCR检测Bad在转录水平的表达。结果成功构建Bad真核表达载体,PCR扩增出长为545bp的特异性片段,经克隆至真核表达载体GV142后酶切及测序鉴定准确。重组质粒GV142-Bad成功转染食管鳞癌细胞并在荧光倒置显微镜下观察到不同强度的绿色荧光信号。应用qPCR检测重组质粒GV142-Bad转染ECA109和KYSE450细胞的Bad基因mRNA表达水平上调,与空载体转染组和空白组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论本研究成功构建Bad真核表达载体,用电转染法成功转染食管鳞癌ECA109和KYSE-450细胞,获得高表达并上调Bad基因mRNA的水平,为进一步研究Bad基因的功能奠定了基础。
- 美丽吾尔提.达吾列提汗吉别克.瓦提别克来雯婷刘伊宁李晓苗沙亚哈提.别尔克哈之王海峰李颖李惠武陈艳
- 关键词：BAD酶切
- 光纤传感快速分析氢溴酸加兰他敏注射液被引量：2
- 2009年
- 目的建立一种光纤传感快速测定氢溴酸加兰他敏注射液光谱和含量的方法。方法采用光纤传感过程分析系统,探测端浸入稀释后的注射剂溶液,输入样品相关信息及稀释倍数,计算机可显示扫描的图谱,并给出药物含量,同时比较该法与药典含量测定方法的一致性。结果本法可瞬间获得注射剂的特征图谱,提取相关参数;含量测定结果与药典方法进行比较,2种测定方法无显著性差异(P>0.05)。结论光纤传感分析法可用于快速分析氢溴酸加兰他敏注射液。
- 李颖李莉李新霞张奇洲陈坚
- 关键词：光纤传感氢溴酸加兰他敏注射剂
- 光纤传感原位分析布美他尼注射液被引量：3
- 2009年
- 目的:研究一种光纤传感原位快速分析注射剂的方法,快速定性、定量布美他尼注射液。方法:采用光纤传感原位技术对布美他尼注射液进行紫外吸收光谱鉴定和含量测定。探测端直接浸入注射剂原溶液,输入样品相关信息,计算机可显示光谱,并给出药物含量,同时采用药典含量测定方法进行对照。结果:光纤传感原位分析法可瞬间获得注射剂的特征图谱,提取相关参数;含量测定结果与药典方法比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:光纤传感原位分析法可用于布美他尼注射液的快速分析。
- 李颖李莉张奇洲李新霞陈坚
- 关键词：光纤传感布美他尼注射剂
- 光纤传感技术在注射剂快速分析中的应用研究
- 目的:药品快速鉴别系指在简单的试验设备条件下,采用药品外观鉴别、薄层色谱、化学鉴别、仪器分析等方法对药品(真伪)质量进行快速初步鉴定。这种方法作出的鉴定结果并非最终确定的药品质量结论,但对药品抽验起到了初筛作用,是基层药...
- 李颖
- 关键词：光纤传感注射剂
- 文献传递
- LRIG1基因过表达载体的构建、鉴定及在食管鳞癌细胞株Eca109中的表达
- 2018年
- 目的构建LRIG1基因过表达载体,并进行鉴定。方法采用PCR方法从食管癌的LRIG1c DNA表达阳性的标本中扩增出LRIG1基因,经用Xho I和Kpn I-HF双酶切后,与过表达载体GV219相连后转入E.coli DH5α。结果 DNA测序证明获得了包含ORF全长的LRIG1基因,并成功克隆入过表达载体GV219中。经转染Eca109细胞株后,应用蛋白免疫荧光技术检测过表达的LRIG1。结论构建过表达载体成功,为进一步探讨LRIG1基因在食管癌中的作用奠定了基础。
- 吉别克.瓦提别克李惠武喻亮路晨菲范志勤李颖李卉刘玲
- miRNA慢病毒表达载体的构建及其在原代培养的大鼠胚胎大脑皮层神经细胞中的稳定表达
- 2016年
- 目的:构建miRNA的慢病毒表达载体,使其在原代培养的大鼠胚胎大脑皮层神经细胞中稳定表达。方法:将该干扰片段构建入慢病毒载体(pL KD-Ubc-eG FP-U6-shRNA)的U6启动子下游,该载体可以实现在干扰小片段RNA的同时表达绿色荧光蛋白EGFP基因,便于观察载体工作状态。通过脂质体转染法转染原代培养的大鼠胚胎大脑皮层神经细胞,观察转染的原代培养的大鼠胚胎大脑皮层神经细胞的形态及表达情况。结果:针对筛选的miRNA构建的慢病毒载体,经过DNA测序结果和琼脂糖凝胶电泳鉴定成功构建了筛选的miRNA的慢病毒表达载体,重组质粒转染原代培养的大鼠胚胎大脑皮层神经细胞,经24 h后在荧光倒置显微镜下可以观察到部分细胞带有绿色荧光,筛选的miRNA构建的慢病毒载体在原代培养的大鼠胚胎大脑皮层神经细胞中稳定表达。结论:筛选的miRNA的慢病毒表达载体构建成功,并稳定的转染到原代培养的大鼠胚胎大脑皮层神经细胞中,为miRNA对神经细胞存活功能的研究提供了平台。
- 刘伊宁李晓苗来雯婷吉别克.瓦提别克美丽吾尔提.达吾列提汗沙亚哈提.别尔克哈之李卉李颖刘玲王海峰李惠武
- 关键词：大脑皮层神经细胞慢病毒表达载体MIRNAEGFP
