董泽华
- 作品数：2 被引量：4H指数：1
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- 相关领域：生物学更多>>
- 优雅蝈螽水溶性和类膜结合型海藻糖酶编码cDNA的鉴定及其在体内的表达（英文）被引量：1
- 2017年
- 海藻糖酶是一种二糖水解酶,催化海藻糖转换为葡萄糖,为昆虫包括发育、壳多糖合成及飞翔代谢在内的多种生理过程所必需。尽管某些昆虫的海藻糖酶基因已被鉴定,但优雅蝈螽的海藻糖酶编码序列尚未见报告。本研究采用RACE结合多重PCR技术,分离鉴定优雅蝈螽的水溶性海藻糖酶(Gg Tre1)和类膜结合型海藻糖酶(Gg Tre2-like)的全长编码序列(cDNA),包括携带不同长度3'-非翻译区(3'-UTR)的3个Gg Tre1 cDNA亚型(Gen Bank:No.KY400001-KY400003)和3个Gg Tre2-like cDNA亚型(Gen Bank:No.KY400004-KY400006)。3个Gg Tre1 cDNA序列分别为2 107,2 021和1 914bp,具有相同长度的5'-UTR(33 bp),但3'-UTR长度不同,分别为322,248和129 bp。Gg Tre1-2 cDNA含1 740 bp,编码579个氨基酸残基组成的多肽链,分子量为67.29 k D;与之不同,根据cDNA演绎的Gg Tre1-1和Gg Tre1-3序列较Gg Tre1-2多4个氨基酸残基,多肽链的分子量为67.88 k D。3个Gg Tre2-like cDNA(Gg Tre2-like-1,-2和-3)序列全长分别为2 491,2 460和2 381 bp。5'-UTR均为284 bp,3'-UTR分别为398,367和285 bp。Gg Tre2-like cDNA开阅读框为1 809 bp,编码602氨基酸残基组成的多肽链,分子量为67.88 k D。实时定量PCR,分析Gg Tre1和Gg Tre2-like基因在雌、雄个体(各20个)的组织特异性表达。结果显示,Gg Tre1在卵巢和附腺表达量最高;Gg Tre2-like主要在卵巢表达,在雄性肌肉和马氏管的表达量高于其他组织。上述结果表明,本研究从优雅蝈螽分离到3'-UTR长度不同的3个水溶性和3个类膜结合型海藻糖酶cDNA序列。结果还提示,Gg Tre1在各组织的表达差异较大,而Gg Tre2-like在各组织的表达相对稳定。不同长度3'-UTR的Gg Tre1和Gg Tre2-like亚型的存在,以及不同长度的3'-UTR在翻译过程中的特殊作用,尚待今后研究证实。
- 骞蕾阳董泽华韩媛吕常岩林周志军
- 关键词：实时荧光定量PCR组织特异性表达
- 不同温度驯化策略诱导优雅蝈螽海藻糖合成酶基因表达及血淋巴糖类含量变化被引量：4
- 2017年
- [目的]研究模拟野外温度骤变和缓慢升降温驯化对优雅蝈螽Gampsocleis gratiosa海藻糖合成酶(Trehalose-6-phosphate synthase,TPS)基因表达量、血淋巴海藻糖及总糖含量的影响以及三者间的相关性。[方法]通过高通量转录组数据筛选,从优雅蝈螽中克隆TPS基因cDNA全长。采取模拟野外温度骤变和缓慢升降温两种温度驯化策略,以热电偶温度计测得优雅蝈螽体温与环境温度最为接近的温度值作为最适温度,实时荧光定量PCR测定优雅蝈螽TPS表达,硫酸蒽酮法测定血淋巴海藻糖和总糖含量(以25℃最适温度作为对照)。[结果]克隆得到的TPS基因命名为GgTPS(GenBank登录号:KU578006),全长3 225bp,包含2 430bp的开放阅读框,5'-非编码区(5'-untranslated region,5'-UTR)153 bp和3'-非编码区(3'-untranslated region,3'-UTR)642 bp。共编码809个氨基酸,预测的蛋白分子量(Mw)91.35 ku,理论等电点(pI)6.28。骤然降温阶段TPS相对表达量呈先升高后降低的变化趋势,在15℃最高,与最适温度25℃差异显著。海藻糖相对含量在0℃显著高于25℃。总糖相对含量在0℃和10℃显著高于25℃。骤然升温阶段,TPS相对表达量呈先降低后升高,再降低的变化趋势,40℃达到最高且与25℃差异显著。缓慢降温阶段TPS相对表达量呈先升高后降低的变化趋势,在15℃和20℃显著高于25℃;海藻糖含量表现出先降低后升高的变化趋势,0℃显著高于25℃,总糖含量在0℃、10℃和20℃与25℃差异显著。缓慢升温阶段TPS相对表达量先降低后升高,30℃和45℃显著低于25℃。海藻糖相对含量在40℃显著低于25℃。总糖相对含量呈先升高后降低的变化趋势,40℃和45℃显著高于25℃。不同温度驯化策略比较TPS相对表达量在15℃、40℃差异显著;海藻糖相对含量在40℃和45℃差异显著;总糖相对含量在10℃和20℃差异显著;体温在30℃差异显著。[结论]温度驯化能够提高昆虫的抗逆能力,昆�
- 骞蕾阳寇晓艳董泽华常岩林周志军
- 关键词：海藻糖总糖实时荧光定量PCR
