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木薯磷脂酰肌醇磷酸5-激酶PIP5K9基因的克隆及表达分析被引量：2: 2016年; 磷脂酰肌醇磷酸5-激酶9(PIP5K9)参与负调控植物碱性/中性转化酶的活性。本研究根据拟南芥PIP5K9基因序列信息,BLAST搜索木薯基因组数据库,找到木薯PIP5K9基因序列信息,利用RT-PCR方法克隆了木薯PIP5K9基因,命名为Me PIP5K9。生物信息学分析结果表明,该基因全长5 421 bp,包含8个外显子和7个内含子,CDS区全长2 496 bp,编码831个氨基酸。蛋白的N端包含8个MORN结构域,C端具有PIPKc结构域。序列比对和系统进化树分析结果表明,Me PIP5K9与麻风树PIP5K9亲缘关系最近,其次为蓖麻。基因表达分析发现,Me PIP5K9在叶片中表达量最高,其次是须根、茎和花,在块根和果中的表达量最低。本研究分离鉴定了木薯PIP5K9基因,分析了该基因的生物学信息及在不同组织中的表达模式,为进一步探讨其调控木薯碱性/中性转化酶的活性奠定基础。; 孙冲姚远耿梦婷王运林尚璐胡新文郭建春; 关键词：木薯基因克隆

木薯己糖激酶MeHXK4的功能鉴定: 2017年; 己糖激酶可催化葡萄糖和果糖磷酸化生成磷酸己糖,在植物的碳水化合物代谢及糖信号转导中具有重要的作用。前期我们已克隆获得木薯己糖激酶基因Me HXK4,根据生物信息学分析其编码的蛋白可能不具有催化活性。本研究主要利用己糖激酶酵母突变菌株YSH7.4-3C进行酵母功能互补实验,鉴定Me HXK4是否具有催化己糖磷酸化的功能。结果发现,转了p DR195-Me HXK4的YSH7.4-3C酵母可以在以葡萄糖或果糖为唯一碳源的培养基中生长,表明Me HXK4能催化己糖磷酸化为酵母的生长提供碳水化合物和能量。本研究结果为进一步研究Me HXK4的生理功能提供依据。; 姚远陆小花王运林孙冲吴晓慧耿梦婷尚璐李崭符少萍李瑞梅段瑞军刘姣胡新文郭建春; 关键词：木薯己糖激酶

木薯碱性/中性转化酶MeNINV1基因启动子的克隆及激素应答表达分析被引量：1: 2017年; 为了解木薯碱性/中性转化酶基因MeNINV1对激素的应答模式及调控机制本研究采用PCR技术,从木薯基因组中分离出MeNINV1基因启动子序列。分析结果显示该启动子长度1 714 bp,含有TATA box和CAAT box保守元件,以及四个激素响应元件:ERE(乙烯应答)、ABRE(ABA应答)、TAC-element(SA应答)和P-box(GA应答)。根据启动子上存在的参与激素应答相关的顺式作用元件信息,选用30μmol/L GA3、30μmol/L ABA、100μmol/L SA和1%乙烯利四种外源激素胁迫处理木薯SC8组培苗,利用实时荧光定量PCR技术,研究MeNINV1基因在不同激素处理下的表达模式。结果表明,MeNINV1基因的表达受激素的调控,因此推断碱性/中性转化酶基因MeNINV1启动子上的激素应答元件响应激素诱导,调控基因的表达。研究结果为进一步研究激素信号如何调控木薯块根蔗糖的分解代谢提供理论基础。; 王运林姚远耿梦婷孙冲尚璐李瑞梅符少萍胡新文郭建春; 关键词：木薯启动子顺式作用元件激素

木薯己糖激酶MeHXK5的催化功能鉴定被引量：2: 2017年; 己糖激酶是植物体内催化己糖磷酸化的关键酶,参与植物的生长发育过程。前期已克隆获得了主要在木薯花中表达的己糖激酶基因MeHXK5。该研究主要利用己糖激酶酵母突变菌株YSH7.4-3C进行酵母功能互补实验,验证MeHXK5催化己糖磷酸化的功能。结果表明:转pDR195-MeHXK5载体的YSH7.4-3C酵母可以在以葡萄糖或果糖为唯一碳源的培养基中生长,表明MeHXK5能催化己糖磷酸化为酵母的生长提供碳水化合物和能量。该研究结果为进一步研究MeHXK5参与木薯的开花过程的生理功能奠定了基础。; 姚远孙冲陆小花王运林耿梦婷吴晓慧尚璐李崭符少萍李瑞梅段瑞军刘姣胡新文郭建春; 关键词：木薯己糖激酶

木薯MeNINV4基因在原核细胞中的表达及优化被引量：1: 2020年; 转化酶是植物中蔗糖降解过程的关键酶之一,可催化蔗糖不可逆地分解为葡萄糖和果糖,在植物生长发育、平衡碳水化合物及对逆境胁迫的响应等方面具有重要的作用。本研究利用从木薯中克隆到碱性/中性转化酶MeNINV4基因,将其重组构建到原核表达载体pGEX-6p-1上,构建重组载体MeNINV4-pGEX-6p-1,并对其融合蛋白表达的IPTG诱导浓度、起始菌液浓度、诱导温度和诱导时间条件进行优化。研究结果发现:GST-MeNINV4融合蛋白的表达量在一定范围内随着IPTG诱导浓度、起始菌液浓度和IPTG添加时间的增加而增加。重组菌在OD600为1.0左右,IPTG浓度为0.6 mmol/L,在37℃条件下诱导5 h后,重组蛋白的表达量达到最大值。本研究通过诱导目的蛋白在原核细胞中的表达并且优化表达条件,使目的蛋白在原核细胞中的表达量显著增加,为进一步研究目的蛋白的结构、功能及酶学特性等生物学功能提供理论依据。; 陆小花尚璐姚远李崭王运林耿梦婷符少萍李瑞梅刘姣胡新文郭建春; 关键词：木薯转化酶原核表达

HPLC-ELSD法测定木薯块根中蔗糖、葡萄糖、果糖的含量被引量：1: 2017年; 可溶性糖为木薯块根淀粉的合成提供底物和能量,准确测定其含量有助于进一步了解木薯块根淀粉积累过程。本研究以水提法提取木薯块根中的可溶性糖,采用高效液相色谱-蒸发光散射检测法(HPLCELSD)测定样品中果糖、葡萄糖、蔗糖的含量。以Waters-NH2色谱柱结合Alltech 3300 ELSD蒸发光检测器进行糖含量的测定,流动相为乙腈/水(70/30,V/V),含0.1%的氨水。果糖、葡萄糖和蔗糖的分离效果较好,在1~25μg范围内线性关系良好,精密度RSD分别为0.31%、0.22%和1.42%,回收率分别为97.62%、98.03%、96.30%,样品稳定性实验的RSD分别为0.88%、0.48%和1.05%。实验结果表明HPLC-ELSD法是分析木薯块根中的蔗糖、葡萄糖、果糖含量的有效技术,可为研究淀粉含量不同的木薯品种在糖代谢过程中的差异奠定基础。; 姚远吴晓慧耿梦婷尚璐陆小花李崭符少萍李瑞梅段瑞军刘姣胡新文郭建春; 关键词：木薯 HPLC-ELSD 果糖葡萄糖蔗糖

MeNINVs在不同品种木薯的表达模式及酶活性分析: 2016年; 碱性/中性转化酶(NINV)催化蔗糖分解成葡萄糖和果糖,是木薯块根的蔗糖分解代谢的关键酶之一。本研究以淀粉含量不同的木薯品种(SC8-高淀粉,SC124-中淀粉,9Ⅰ-低淀粉)为材料,研究木薯块根膨大期,Me NINV基因家族在源库器官的表达模式以及酶活性特点。结果表明,不同品种木薯Me NINVs的表达模式相似,Me NINV1、Me NINV16、Me NINV110及n INV1在叶片中表达量均高于其他成员;同时,Me NINV1和NINV1在块根中的表达量也高于其他成员。不同品种木薯叶片中的Me NINVs表达及酶活性差别不大,但是高淀粉品种SC8块根中的Me NINVs表达量比9Ⅰ低,而NINV酶活性却远高于9Ⅰ,推测木薯NINV酶活性存在转录后调控机制。本研究为进一步研究碱性/中性转化酶在木薯淀粉积累过程中的作用奠定了基础。; 姚远耿梦婷吴晓慧王运林王运林尚璐孙冲尚璐; 关键词：木薯基因表达酶活性

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尚璐