钟雄霖
- 作品数：7 被引量：24H指数：2
- 供职机构：中国人民解放军第一军医大学更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 一种改进的大引物PCR定点诱变方法被引量：20
- 2002年
- 目的 建立一种改进的、简便易行的大引物 PCR定点诱变技术。方法 在两轮 PCR中设计了两种不同的质粒 DNA模板 ,两者分别缺少正向或反向外侧引物可结合的互补序列 ;当两种模板和两条外侧引物同时存在于一个反应管时 ,可以完全避免对野生型目的基因全长的扩增。第 1轮 PCR由正向外侧引物和突变引物合成大引物 ,这一产物无需凝胶纯化而直接用于第 2轮 PCR。第 2轮 PCR的第 1阶段由大引物延伸合成全长突变终产物 ,两条外侧引物则在第 2阶段指数扩增 ,所有终产物均含所需致突变位点。结果 用此方法对中国人 β地中海贫血 15种稀少突变类型进行定点诱变 ,并将诱变得到的全长人 β珠蛋白基因克隆到 p GEM○R- T载体后全长测序 ,所有克隆均鉴定为所需突变型。结论 这种改进的大引物PCR定点诱变技术省时、省工 ,诱变的成功率可达 10 0 % ,适于实验室常规应用。
- 莫秋华徐湘民钟雄霖刘忠英
- 关键词：聚合酶链反应定点诱变
- 大鼠肝tRNA^(Ile)基因的克隆与体外转录被引量：1
- 1997年
- 采用PCR扩增出大鼠肝tRNAIle基因，构建了重组质粒pGWIW，并用T7RNA聚合酶／启动子系统对其进行了体外表达．经过对转录产物片段大小及运用Northernblot鉴定，证明获得了不含修饰核苷酸的大鼠肝tRNAIle生物学活性检测显示：合成基因体外转录产物氨基酰化活性是天然tRNA的40％。
- 张璐钟雄霖彭朝晖徐钤
- 关键词：体外转录基因克隆
- 大鼠肝tRNA^(He)基因化学合成及克隆
- 1997年
- tRNA在蛋白质生物合成中的主要作用是转运氨基酸,此外,tRNA与第二套密码的研究及与多胺的作用亦受到重视。传统的专一tRNA制备方法,不仅步骤繁多且收获量极少（6.5 mg/4000g肝组织）,难于满足进一步用NMR,ESR等技术研究的需要。利用基因工程的手段,在细胞中表达专一的tRNA可以克服传统制备方法的不足。为此我们设计合成了大鼠肝tRNAIle基因。合成的基因全长120bp,将其中U,Ψ,D核苷酸换成T,I换成G。
- 钟雄霖张璐彭朝晖
- 关键词：大鼠肝分子生物学研究氨基酰化DNA序列分析
- 一种缺失型人α珠蛋白基因的PCR检测方法
- 本发明提供一种缺失型人α珠蛋白基因的PCR检测方法，本发明采用4个(2对)引物P1、P2、P7、P4组成2对PCR反应，分别针对正常等位基因和缺失等位基因(-<Sup>SEA</Sup>/基因)，提供了引物的设计方案和结...
- 徐湘民肖维威钟雄霖刘忠英
- 文献传递
- 一种缺失型人α珠蛋白基因的PCR检测方法
- 本发明提供一种缺失型人α珠蛋白基因的PCR检测方法,本发明采用4个(2对)引物P1、P2、P7、P4组成2对PCR反应,分别针对正常等位基因和缺失等位基因(－SEA/基因),提供了引物的设计方案和结果的解释。根据本发明的...
- 徐湘民肖维威钟雄霖刘忠英
- 文献传递
- 用T7RNA聚合酶体外转录合成大鼠肝tRNA^(Ile)被引量：3
- 1997年
- 采用PCR技术从rec M1 3mp1 8中扩增出 1 2 0bp的大鼠肝tRNAIle合成基因片段 ,经限制性内切酶BstNⅠ酶切后作为模板 ,利用T7RNA聚合酶在体外无细胞体系转录由T7启动子带动的大鼠肝tRNAIle基因 ,生成不含修饰碱基的tRNAIle,并对体外转录反应条件进行了优化 ,回收的tRNA产量可达DNA模板量的 4
- 张璐钟雄霖彭朝晖徐钤
- 关键词：TRNAT7RNA聚合酶体外转录
- 大鼠肝tRNA^(Ⅱe)基因在大肠杆菌中的表达及分离纯化
- 1997年
- 利用T7RNA聚合酶／启动子表达系统在大肠杆菌JM109（DE3）中表达化学合成的大鼠肝tRNAⅡe基因．经酚抽提、DEAE-52离子交换柱层析及HPLC层析，分离纯化大鼠肝tRNAⅡe．变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和Northern-blot鉴定表明，大鼠肝tRNAⅡe基因成功地获得表达．氨酸化活性检测表明：纯化后，每1A260单位（40μg）的tRNAⅡe可负载约650pmol的Ⅱe，纯度为54．2％．说明从大肠杆菌中分离纯化出具有一定生物学活性，一定纯度的合成基因表达产物．
- 张潞钟雄霖彭朝晖徐钤
- 关键词：基因表达纯化
