黄鹤
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 转染不同基因的NIT细胞体外抗细胞毒T细胞杀伤作用
- 2007年
- 目的研究转染FADD缺失突变体（FADDdel）和WeelHu／GFP的胰岛β细胞株（NIT细胞）抵抗细胞毒T细胞的杀伤作用及其分泌胰岛素与细胞增殖所受的影响。方法采用免疫磁珠法测量转染WeelHu基因的NIT细胞培养上清中的胰岛素水平及观察其增殖速度。将分别转染空载体pUC-pIC、pCMV和转染pFADDdel、pCMV-WeelHu、pCMV-WeelHu／GFP的NIT细胞与活化的淋巴细胞共培养，利用^51Cr释放试验检测淋巴细胞对NIT细胞的杀伤作用。结果转染weelHu基因与未转染的NIT细胞胰岛素的分泌和生长速度没有明显变化（P〉0．05）。转染pCMV-WeelHu／GFP或pCMV-WeelHu的NIT细胞其抗淋巴细胞杀伤能力明显高于转染空载体的NIT细胞（P〈0．01），表达weelHu或WeelHu／GFP融合蛋白的胰岛细胞之间抗凋亡能力差异无统计学意义，转染FADDdel在低剂量效靶比时对胰岛β细胞有一定保护作用（P〈0．05），但在高剂量效靶比时与转染空载体比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论表达WeelHu或FADDdel的胰岛细胞可抵抗T细胞的杀伤，且对胰岛素的分泌及细胞增殖无明显影响。
- 廖雯君周新荣周华蓉雷萍王敏刘静文雪黄鹤朱慧芬沈关心
- 关键词：绿色荧光蛋白质类FADD
- 抗TfR-scFv-EGFP融合蛋白的构建与表达
- 2009年
- 目的:抗转铁蛋白受体单链抗体(TfR-scFv)-EGFP融合蛋白真核表达载体的构建与表达。方法:设计两对引物引入连接肽(Gly4Ser)3以及酶切位点HindⅢ和BamHⅠ,采用重叠延伸PCR扩增与构建具有前导肽的L-VH-Linker-VL单链抗体基因,亚克隆至pEGFP-N1,转染COS-7细胞,倒置相差荧光显微镜下观察荧光蛋白表达,流式细胞术(FCM)检测细胞分泌上清与乳腺癌细胞MCF-7及黑色素瘤细胞A375结合活性。结果:测序表明获得了正确的L-VH-Linker-VL单链抗体基因序列;亚克隆至pEGFP-N1后,表达载体转染COS-7细胞,经荧光显微镜观察转染细胞,及通过流式细胞术(FCM)检测细胞分泌上清,证实抗TfR-scFv-EGFP融合蛋白在转染细胞中分泌性表达,并能够与天然高表达TfR的细胞特异性结合。结论:抗TfR-scFv-EGFP融合蛋白真核表达载体构建成功,其表达产物具有与TfR阳性细胞结合的活性。
- 代维刘静黄鹤文雪袁晓梅雷萍朱慧芬沈关心
- 关键词：转铁蛋白受体单链抗体重叠延伸PCR
- EGFR特异性单链抗体与靶细胞结合的特异性被引量：2
- 2006年
- 目的:检测EGFR特异性单链抗体F4-scFv与EGFR阳性及阴性细胞结合特性。方法:提取细菌周质腔蛋白经N i-NTA柱纯化F4-scFv;采用流式细胞术及W estern b lot检测F4-scFv与EGFR阳性及阴性细胞结合的特异性。结果:N i2+柱纯化的F4-scFv经SDS-PAGE可见分子量为36 kDa单一条带,F4-scFv可与EGFR阳性细胞CHO-EGFR-GFP1、A431及MDA-MB-231特异性结合,而不与EGFR阴性细胞CHO-K1及SKOV3结合。结论:F4-scFv可与天然表达EGFR的细胞特异性结合,为其靶向抗肿瘤研究奠定了基础。
- 赵晓蓉戴维彭吉林黄鹤袁晓梅刘静朱慧芬沈关心
- 关键词：表皮生长因子受体单链抗体
