王超
- 作品数：11 被引量：57H指数：3
- 供职机构：中国农业科学院上海兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划中央级公益性科研院所基本科研业务费专项公益性行业(农业)科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 细胞凋亡基因p53在固始鸡免疫器官内的表达及其生理意义
- 目的：探讨细胞凋亡基因p53存固始鸡免疫器官内的表达及其生理意义。
方法：应用免疫组织化学技术和Lica显微图像处理系统。
结果：p53阳性蛋白表达于法氏囊和脑腺内淋巴细胞细胞膜、细胞质和细胞核。在不...
- 李奎李建华方丽云王超刘英康相涛
- 关键词：细胞凋亡基因P53凋亡基因表达免疫器官固始鸡
- J亚群禽白血病病毒的LTR体外启动活性分析被引量：2
- 2011年
- 为分析J亚群禽白血病病毒LTR基因的体外启动活性,将其克隆至含有萤光素酶报告基因的pGL3载体中,构建了LTR重组质粒及其缺失不同区段的重组质粒,转染DF-1细胞测定萤光素酶的表达情况。结果显示,缺失U3时萤光素酶的表达量明显降低,缺失U5时萤光素酶的表达反而上升,这表明U3区可能具有强启动子功能,而U5区可能具有负调控功能。在此基础上,为鉴定LTR各区段是否具有增强子作用,将U3、RU5基因分别插入pGL3-promoter载体,转染DF-1细胞,测定萤光素酶的表达情况。结果显示,含有U3序列的重组质粒萤光素酶的表达量最高,而含有U5序列的重组质粒萤光素酶的表达量很低,表明U3区具有增强子作用,而U5区含有负调控功能。
- 张伟伟王超杨宗伟陈宗艳李传峰刘光清
- 关键词：J亚群禽白血病病毒长末端重复序列强启动子负调控萤光素酶
- 鸭病毒性肝炎病毒RNA聚合酶在真核细胞中的表达及亚细胞定位被引量：2
- 2012年
- 为研究鸭病毒性肝炎病毒RNA依赖性RNA聚合酶的分子生物学特性及其在细胞中的定位,构建了RNA依赖性RNA聚合酶与增强型绿色荧光蛋白融合表达的真核重组表达质粒;然后用脂质体介导转染MDCK细胞。分别使用荧光显微镜、激光共聚焦显微镜以及4,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色和蛋白免疫电泳试验等方法检测了RNA依赖性RNA聚合酶在细胞中的表达和亚细胞定位情况。结果表明,RNA依赖性RNA聚合酶能与增强型绿色荧光蛋白一起在MDCK细胞中良好表达,且主要分布于细胞核中,Western-blot分析结果显示,融合蛋白在80ku处出现阳性条带,说明表达的外源蛋白具有免疫活性。表明成功构建了RNA依赖性RNA聚合酶与增强型绿色荧光蛋白融合表达载体,并在真核细胞内实现了表达,通过检测荧光蛋白,发现RNA依赖性RNA聚合酶主要在细胞核中发挥复制酶的功能。
- 王超李传峰陈宗艳付玉志吴润刘光清
- 关键词：鸭病毒性肝炎病毒亚细胞定位
- 正链RNA病毒复制酶结构与功能研究进展被引量：4
- 2011年
- 正链RNA病毒是家族非常庞大,可以感染多种动、植物及人的一类病毒。研究这类病毒的复制机理和调控方式对于阐明病毒的致病机制,以及研制新型抗病毒药物和疫苗等具有重要意义。RNA依赖性RNA聚合酶(RNA-dependent RNA polymerase,RdRp)是正链RNA病毒进行复制的关键蛋白酶,研究其结构与功能是了解病毒复制机理的前提和基础。本文即对近年来关于正链RNA病毒RdRp的结构与功能研究进展情况进行综述。
- 王超吴润刘光清
- 关键词：正链RNA病毒
- J亚群禽白血病毒gp85基因表达及初步应用被引量：1
- 2011年
- J亚群禽白血病毒(Avian leukosis virus subgroup J,ALV-J)的囊膜糖蛋白GP85是亚群特异性抗原。将ALV-J的gp85基因克隆至原核表达载体pET-30a(+)EcoRⅠ和SalⅠ两个酶切位点之间,经IPTG诱导在大肠杆菌中以His-Tag融合蛋白的形式获得了高效表达,Western blot显示该表达产物具有生物学活性。GP85蛋白经纯化、复性后免疫家兔,制备了抗ALV-J GP85的多克隆抗体。以纯化的蛋白为抗原包被ELISA检测板,对疑似血清样本进行了实验室检测,检出率较高。本研究为ALV-J的诊断和流行病学调查奠定了基础。
- 张伟伟杨宗伟陈宗艳王超李传峰刘光清
- 关键词：囊膜糖蛋白ELISA
- I型鸭肝炎病毒在鸭胚成纤维细胞系中的增殖特性研究被引量：8
- 2013年
- 为研究I型鸭肝炎病毒(DHV-1)在鸭胚成纤维细胞系(DEF-h)中的增殖规律,本研究将DHV-1野毒株(ZJ-08株)接种DEF-h细胞,连续传代3次后,观察病毒对细胞的致病变效应(CPE),并对病毒核酸及其蛋白的表达和病毒增殖特性进行了鉴定。研究结果显示,DHV ZJ-08株能够在DEF-h中有效增殖,并产生典型的CPE,病毒蛋白在细胞中也获得了良好表达,并与DHV-1特异性抗体发生反应。一步生长曲线显示ZJ-08株病毒感染DEF-h 12 h开始增殖,36 h～60 h进入快速增殖期,72 h达到峰值,TCID50为10-4.3/mL。本实验为进一步的DHV-1的致病机理和细胞灭活疫苗的研制奠定了基础。
- 付玉志张洪辉李传峰陈宗艳王超陈铁桥刘光清
- 关键词：成纤维细胞
- 鸭病毒性肝炎病毒RNA聚合酶在真核细胞中的表达及亚细胞定位
- 为研究鸭病毒性肝炎病毒RNA聚合酶(RdRp)的分子生物学特性及其在细胞中的定位，本文构建了RdRp与绿色荧光蛋白(GFP)融合表达的真核重组表达质粒;然后用脂质体介导转染MDCK细胞。分别使用荧光显微镜、激光共聚焦显微...
- 王超李传峰陈宗艳付玉志吴润刘光清
- 关键词：鸭病毒性肝炎病毒RNA聚合酶亚细胞定位真核细胞
- SV40-LT基因的原核表达及免疫原性检测
- 2012年
- 为了获得纯化的SV40-大T抗原(SV40-LT)及其特异性抗体,本研究利用原核表达系统高效表达了SV40大T抗原的高抗原指数区域,然后将纯化的大T抗原免疫试验兔,制备了相应的特异性抗体。经蛋白免疫电泳和ELISA方法检测,结果表明本研究获得的原核表达产物,不仅具有较好的免疫原性,而且能够诱导试验兔产生较高的抗体水平(抗体效价为1∶6 400)。
- 付玉志李传峰陈宗艳王超陈铁桥刘光清
- 关键词：原核表达特异性抗体ELISA
- J亚型禽白血病病毒的拯救与鉴定被引量：2
- 2011年
- 为鉴定含J亚群禽白血病病毒(ALV-J)全长cDNA分子克隆(pBlALV)的感染性,首先将pBlALV转染CEF细胞,拯救出病毒(rALV),然后连续传代3次,对拯救病毒进行增殖培养。分别利用RT-PCR、westernblot、IFA等方法,对拯救病毒进行鉴定,并应用实时荧光定量PCR方法对拯救病毒的复制动力学进行了测定。研究结果证明,本研究成功拯救出了具有感染性的rALV-J,为研究禽白血病的致病机理和探讨新的防制措施等提供了良好的ALV的反向遗传操作技术平台。
- 王超缪华先谢宝婵张伟伟吴润刘光清
- 关键词：J亚群禽白血病病毒ALV-J感染性克隆
- Ⅰ型鸭肝炎病毒RNA聚合酶基因的克隆及原核表达
- 2011年
- 根据Ⅰ型鸭肝炎病毒（Duck hepatitis virus,DHV-Ⅰ）ZJ-Ⅴ株基因组序列（GenBank登录号：EF382778）,设计了一对扩增RNA聚合酶基因（RNA-dependent RNA polymerase,RdRp）的特异性引物,以ZJ-Ⅴ株基因组为模板,扩增DHV-Ⅰ的RdRp基因。运用DNAStar软件对ZJ-Ⅴ株病毒与GenBank上已发表的其他不同DHV毒株的RdRp基因序列进行同源性比较和遗传进化分析,结果表明,ZJ-Ⅴ株与A型DHV-ⅠR85952株（DQ226541）的同源性为97.1%,亲缘关系最近,与2株台湾新型（B型）DHV之间为76.9%和77.0%,与C-GY株和4株韩国新型（C型）DHV株之间为76.2%~76.5%,亲缘关系较远。将RdRp基因克隆至原核表达载体pET-32a（＋）,获得重组表达质粒pET-RdRp,转化宿主菌E.coli BL21（DE3）,用IPTG进行诱导表达。SDS-PAGE分析结果显示RdRp蛋白分子量约为65 kDa,Western blot检测证明RdRp蛋白能与Ⅰ型鸭病毒性肝炎阳性血清产生特异性免疫反应,具有良好的免疫学活性。本文为进一步研究DHV-Ⅰ的复制机理奠定了基础。
- 王超付玉志张伟伟陈宗艳李传峰杨宗伟吴润刘光清
- 关键词：原核表达
