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孙旭
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1
被引量:10
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郑州大学附属郑州中心医院
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李韬
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微小RNA-451靶向巨噬细胞游走抑制因子调控甲状腺癌细胞增殖、凋亡的机制
被引量:10
2017年
目的探讨微小RAN(miR)-451靶向巨噬细胞游走抑制因子(MIF)对甲状腺癌细胞增殖、凋亡的影响及机制。方法反转录.聚合酶链反应(RT—PCR)检测甲状腺癌组织及滤泡状(PTC-133)、乳头状(K1)及未分化(8505C)甲状腺癌细胞株中miR-451的mRNA表达;miR—NC、miR-451模拟物(mimics)、miR-451抑制物(inhibitor)转染K1甲状腺癌细胞,Western blot检测MIF蛋白表达,3组共转染组miR-NC+miR-451、Wt—MIF+miR-451mimics、Mut-MIF+miR-451mimics转染K1甲状腺癌细胞,检测荧光素酶活性,以此证实MIF是否为miR-451靶基因;后续实验分为miR—NC、miR-451mimics、miR-451mimics+pcDNA3.1-MIF及miR—NC+pcDNA3.1-MIF4组,各组细胞培养48h后,细胞计数试剂盒(CCK-8)实验检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot检测活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(Cleaved Caspase-3)、磷脂酰肌醇-3-激酶(P13K)、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)蛋白表达。结果甲状腺癌组织中miR-451的mRNA表达(0.889±0.367)显著低于癌旁组织(6.214±0.884)(t=28.883,P=0.004),甲状腺癌细胞中K1细胞的表达最低,选择作为后续研究;MIF是miR-451的靶基因;与miR-NC组比较P13K(0.562±0.051);p-Akt(0.134±.022);CleavedCaspase-3(0.052±0.014);细胞凋亡率(5.16±0.77)%,miR-451mimics和nliR-451mimics+pcDNA3.1-MIF组P13K(0.133±0.021、0.223±0.026)、p—Akt(0.034±0.011、0.062±0.013)蛋白表达显著降低(与miR-451mimics组比较:tPI3K=30.157,P=0.003;tp-Akt=46.626,P=0.001。结论MIF是miR-451的靶基因,miR-451可通过靶向MIF抑制P13K/Akt信号通路抑制K1甲状腺癌细胞增殖及促进细胞凋亡。
李晓娜
李玉杰
董玉科
于敏
黄炜
李冬枝
赵春红
孙旭
李韬
邢国臣
闫巧辉
关键词:
巨噬细胞游走抑制因子
甲状腺癌
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