危敏
- 作品数：47 被引量：96H指数：5
- 供职机构：深圳市南山区妇幼保健院更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金广东省医学科学技术研究基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- 应用DNA芯片技术研究细胞松弛素B诱导K562细胞脱核的分子机制
- 该研究观察到在体外培养的条件下,CB对K562细胞有诱导脱核作用,且这种作用与药物浓度呈正相关,并随着处理时间的延长而增强.同时CB对K562细胞生长增殖有明显抑制作用.为进一步阐述CB作用的分子机制,我们首先应用限制性...
- 危敏
- 关键词：K562细胞细胞松弛素B限制性显示技术CDNA芯片
- 文献传递
- 同时进行HBV、HCV检测60-mer长链寡核苷酸芯片的研制
- 2007年
- 孙朝晖马文丽危敏王从容王蜀燕石玉玲
- 关键词：寡核苷酸芯片HCV检测CDNA芯片长链
- HPV病毒检测分型芯片的研制和优化
- 2009年
- 研制和优化寡核苷酸芯片以初步实现对多种常见HPV（Human papillomavirus）病毒的分型检测．应用生物学软件对四型常见HPV病毒（6、11、16、18型）的全基因组序列进行分析，设计具有型特异性、熔解温度（Tm）相近的-60mer寡核苷酸探针，对玻片片基进行优化处理后，点样制备成寡核苷酸基因芯片．将含HPV全长基因序列的质粒作为阳性标准品，利用梯度限制性荧光标记技术对其进行荧光标记，标记好的样品与芯片杂交．结果显示HPV样品与相应的型特异性探针杂交有明显的荧光信号，而与阴性对照探针和空白对照探针没有杂交信号．通过对芯片片基处理和样品荧光标记方法的优化，可以提高芯片检测的杂交特异性和荧光信号强度．
- 危敏马文丽孙朝晖张晋芳李凌郑文岭
- 关键词：寡核苷酸芯片
- 应用寡核苷酸芯片对乙型肝炎病毒转染HepG2细胞基因表达谱的研究
- 2008年
- HBV与肝细胞之间相互作用的分子机制还不清楚，对HBV蛋白调控宿主细胞基因表达情况也了解甚少。本实验选用基因芯片进行HBV基因表达谱改变的研究，筛选HBV感染应答基因，探讨HBV感染的分子致病机制，寻找预防和治疗HBV感染的靶点。
- 孙朝晖杨慧兰危敏王从容石玉玲
- 关键词：表达谱
- 长链非编码RNA SPATA31D5P吸附微小RNA-320a促进乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭
- 2021年
- 目的乳腺癌(BC)中存在多种长链非编码RNA(lncRNA)的异常表达,并且与生存预后密切相关。本研究旨在探讨lncRNA SPATA31D5P在乳腺癌中的表达并通过吸附miR-320a影响乳腺癌细胞增殖、侵袭和迁移能力。方法收集乳腺癌组织及癌旁组织各30例,采用Real-time PCR检测SPATA31D5P在乳腺癌组织及乳腺癌细胞系中的表达水平。选择乳腺癌MDA-MB-231细胞转染针对SPATA31D5P siRNA干扰载体,采用CCK-8法、5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(Ed U)法、Transwell小室实验和细胞划痕实验测定细胞增殖、侵袭和迁移能力,流式细胞术检测细胞周期和凋亡的改变。采用生物信息学方法筛选可与SPATA31D5P互补结合的miRNAs,Real-time PCR及双荧光素酶报告实验验证SPATA31D5P对miR-320a的调控作用。结果乳腺癌组织中SPATA31D5P水平显著高于邻近正常乳腺组织,各乳腺癌细胞系中SPATA31D5P表达都高于正常乳腺上皮细胞MCF10 A。siRNA干扰组的SPATA31D5P水平为0.288±0.052,低于空白对照组的1.114±0.096和阴性对照(NC)组的1.079±0.128(P<0.01)。与NC组和空白对照组相比,干扰组MDA-MB-231细胞的增殖活力明显下降并出现G_(1)期阻滞,凋亡率明显增加(P<0.01);干扰组的划痕愈合率和穿膜细胞数目分别为(14.36±1.75)%和(26±1.52)个,低于NC组的(52.25±1.87)%和(67.33±2.91)个(P<0.01)。双荧光素酶实验证实,SPATA31D5P能够直接调控miR-320a的表达及荧光素酶活性。结论 SPATA31D5P在乳腺癌中高表达,干扰其表达能有效抑制MDA-MB-231细胞增殖、迁移和侵袭,其作用机制可能与靶向调控miR-320a有关。
- 危敏余海浪王涵多郜蕊雷洁
- 关键词：乳腺癌长链非编码RNA实时定量聚合酶链反应
- 水通道蛋白1基因过表达对K562细胞红系分化和增殖的影响被引量：6
- 2012年
- 目的:探讨水通道蛋白1(aquaporin-1,AQP1)过表达对人慢性髓细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)K562细胞红系分化和增殖的影响。方法:以人脑cDNA文库为模板,通过PCR扩增出AQP1基因的编码序列,构建pBABE-puro-AQP1真核表达载体;感染K562细胞,筛选建立稳定过表达AQP1基因的K562细胞株(命名为K562-AQP1);实时荧光定量PCR法、细胞免疫荧光染色法及蛋白质印迹法分别检测AQP1转录和蛋白表达水平。通过MTT法检测细胞生长增殖、实时荧光定量PCR法检测γ珠蛋白表达和分光光度法检测血红蛋白含量,研究AQP1过表达对K562细胞红系分化和增殖的影响。结果:与空载体对照组相比,pBABE-puro-AQP1转染入K562细胞后AQP1 mRNA和蛋白表达水平皆有显著升高(P<0.01),K562-AQP1细胞中红系分化指标γ珠蛋白和血红蛋白表达水平明显增加,同时细胞生长速度明显降低(P<0.05)。结论:AQP1过表达可以显著促进K562细胞向红系分化,同时抑制细胞增殖。推测AQP1可能成为临床诱导分化治疗CML的基因靶点之一。
- 危敏姜立王妮莎马文丽
- 关键词：水通道蛋白1细胞分化K562细胞
- 诺贝尔奖案例学习在蛋白质双语教学中的应用被引量：3
- 2014年
- 双语教学是培养高素质国际化医学人才的重要途径,医学生物化学双语教学存在专业术语难度大、跨度广、内容复杂等问题。"蛋白质的结构与功能"章节与生物化学突破性进展密切相关,在临床八年制及卓越创新班中,通过学生收集与课程相关诺贝尔奖案例的英文材料,"以学生为主体,以案例为中心"的双语教学新模式得到了实践。文章总结了双语教学的实施方法及教学效果评价。
- 石嵘马文丽郑文岭周珏宇危敏
- 关键词：生物化学双语教学
- 人乳头瘤病毒芯片寡核苷酸探针的研究
- 2006年
- 高危型人乳头瘤病毒(Humanpapillomavirus,HPV)是宫颈癌的主要致病因子。利用Arraydesigner2·0和BLAST等生物学软件对10种型别的人乳头瘤病毒全基因组序列进行分析,设计高特异性、熔解温度(Tm)和GC含量相近的60merHPV型特异性寡核苷酸探针,用于HPV检测芯片的制备,并对其中四型最常见HPV病毒(HPV6,11,16,18探针的有效性进行初步验证,结果表明设计所得的探针型特异性好,可以应用于HPV的检测与分型。
- 危敏马文丽李凌张宝郑文岭
- 关键词：人乳头瘤病毒寡核苷酸芯片
- 应用DNA芯片鉴定HPV18 E6-siRNA诱导HeLa细胞凋亡的分子机制被引量：1
- 2008年
- 高危型人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)的E6基因在宫颈癌的发生中起关键作用,特异siRNA能有效抑制宫颈癌HeLa细胞内HPV18E6基因的表达,诱导肿瘤细胞凋亡.为进一步探讨HPV18E6-siRNA诱导HeLa细胞凋亡的分子机制,针对HPV18E6基因设计siRNA序列,利用人源U6启动子为模板,经PCR表达框架法体外扩增,转染宫颈癌HeLa细胞抑制HPV18E6基因表达,从而诱导肿瘤细胞凋亡.对转染前后HeLa细胞总RNA样品进行荧光标记后,与Agilent Human1A寡核苷酸芯片杂交、扫描、数据分析及标准化处理,确定表达差异的基因并经荧光定量PCR对部分基因进行验证,结合PANTHER数据分析系统,将这些基因按照生物学功能进行归类,查阅GenBank数据库及相关文献,对其结果进行深入分析及讨论.在检测的18 716个基因和EST中,共筛出差异表达基因359个,其中307个基因表达上调,52个基因表达下调,主要包括细胞周期相关基因CCNG1、p21;凋亡相关基因CASP4、CASP6、IGFBP3、DFFA;泛素蛋白酶解途径相关基因E6-AP、UBE2C;角化细胞分化相关基因KRT4、KRT6E、KRT18;抑癌基因RECK、VHL等.研究结果表明,HPV18E6基因抑制引起的细胞凋亡效应主要是通过P53信号途径和泛素蛋白酶解信号途径调节细胞周期相关基因和凋亡相关基因的表达,从而抑制HeLa细胞增殖、促进细胞凋亡.同时,抑癌基因的激活,角化细胞分化和免疫相关基因的表达上调,都说明了E6抑制后肿瘤细胞恶性转化程度的下降.
- 危敏马文丽李凌郑文岭
- 关键词：HPV18E6基因细胞凋亡
- HSV-2对血管内皮样细胞ECV304的致病特性
- 2008年
- 为了探讨HSV-2对血管内皮样细胞ECV304的致病特性,通过体外培养血管内皮样细胞ECV304并感染HSV-2后,采用RT-PCR和间接免疫荧光法检测HSV-2病毒的潜伏相关转录体基因的表达,并利用相差显微镜及电子显微镜观察ECV304感染HSV-2后的细胞形态变化。结果表明,血管内皮样细胞ECV304感染HSV-2后12～24h即可检测到潜伏相关转录体基因表达;感染后1～2d即可出现明显的细胞病变,提示HSV-2可感染ECV304细胞,并在其中活化复制,诱导ECV304细胞出现细胞融合和破裂死亡。
- 赵海全马文丽危敏柯昌文郑焕英郑文岭
- 关键词：单纯疱疹病毒2型细胞病变细胞融合
