宁良菊
- 作品数：7 被引量：13H指数：2
- 供职机构：四川大学华西医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金教育部留学回国人员科研启动基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 脱细胞肌腱片促进兔肩袖损伤腱-骨愈合的实验研究被引量：2
- 2013年
- 目的评价犬脱细胞肌腱片(decellularized tendon slices,DTSs)对兔肩袖损伤腱-骨愈合的作用。方法取成年比格犬跟腱经反复冻融5次结合核酸酶处理12 h制备DTSs,体外对DTSs行组织学观察和细胞相容性评价。取成年雄性新西兰大白兔24只,体重2.5～3.0 kg,随机选取一侧肩关节自冈下肌腱止点处纵向作宽大于正常肌腱50%、长为8 mm的U形缺损,用犬DTSs修复冈下肌腱缺损并重建腱-骨止点(实验组);对侧肩关节不作任何处理(对照组)。术后4、8、12周取两组标本行组织学观察和生物力学测试。结果体外组织学观察示犬DTSs胶原结构保留完整,无细胞残留;细胞相容性实验示成纤维细胞与DTSs良好黏附。生物力学测试示,随时间延长,实验组最大载荷和刚度均呈增加趋势,12周时显著高于4周及8周(P<0.05);除12周实验组最大载荷与对照组比较差异无统计学意义(t=0.969,P=0.361)外,其余各时间点实验组最大载荷及刚度均显著小于对照组(P<0.05)。组织学观察示,对照组可见腱-骨止点的4层结构。实验组术后4周腱-骨界面由肉芽组织填充,少量类似Sharpey纤维连接于腱-骨间;随时间延长肉芽组织界面消失,成纤维细胞、Sharpey纤维、新生软骨和软骨细胞数量增多,腱-骨界面逐渐成熟,但未见位于矿化纤维软骨与非矿化纤维软骨间的潮线。结论经反复冻融5次结合核酸酶处理12 h制备的犬DTSs可促进兔肩袖损伤腱-骨愈合,提高肩袖损伤修复的生物力学性能。
- 潘娟刘国明宁良菊罗静聪黄富国秦廷武
- 关键词：肩袖损伤腱-骨愈合
- 应变诱导BMSCs腱向分化的实验研究被引量：4
- 2010年
- 目的研究大鼠BMSCs与小肠黏膜下层(small intestinal submucosa,SIS)复合后,施加动态应变刺激能否使BMSCs在体外分化为肌腱细胞(tenocytes,TCs)。方法取1周龄SD大鼠骨髓,采用贴壁培养法分离培养大鼠BMSCs,并用多向分化诱导法和流式细胞仪检测进行鉴定。用生物力学试验机行SIS的拉伸破坏实验,计算SIS的弹性应变。将分离纯化后的第2代BMSCs以2.5×105个/cm2细胞密度种植于3cm×1cm大小的SIS上,形成BMSCs-SIS复合物,固定于应变培养装置对其进行静态培养2d后,施加应变刺激(拉伸频率为0.02Hz,作用时间为15min/h、12h/d,应变幅度为5%)动态培养5d,作为实验组;BMSCs-SIS复合物持续静态培养作为对照组;采用组织块法分离培养SD大鼠鼠尾TCs,用第2代TCs与SIS复合,相同条件下静态培养作为阳性对照组。扫描电镜观察应变培养后BMSCs形态变化,ELISA法检测培养后细胞上清液中2种TCs标志蛋白Scleraxis和Tenomodulin的含量。结果分离培养的SD大鼠BMSCs经多向分化诱导后,可以分化为成骨细胞和脂肪细胞,且流式细胞仪检测示表面标志抗原CD34、CD45为阴性,CD90为阳性,符合BMSCs生物学特性。SIS拉伸破坏实验结果显示,SIS平均弹性应变为39.5%。扫描电镜观察示实验组材料上细胞具有类TCs形态;ELISA法检测示,实验组应变培养后细胞上清液中Scleraxis和Tenomodulin含量分别为(3.56±0.91)μmol/L和(4.27±1.10)μmol/L,阳性对照组分别为(14.73±2.30)μmol/L和(10.65±1.51)μmol/L,对照组分别为(0.23±0.14)μmol/L和(0.16±0.10)μmol/L;3组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论适当的应变刺激培养可在体外诱导BMSCs向TCs方向分化,尚需进一步研究最佳的应变刺激诱导条件。
- 廖梅旭宁良菊陈晓禾李秀群罗静聪秦廷武
- 关键词：BMSCS肌腱细胞
- 功能性组织工程肌腱的研究和应用被引量：2
- 2010年
- 目的总结功能性组织工程肌腱(functional tissue engineered tendons,FTETs)的研究和应用。方法查阅近年来国内外有关FTETs研究的相关文献,并进行综合分析。结果功能性组织工程(functional tissue engineering,FTE)作为一种新方法 ,强调了机械应力对于成功构建组织工程复合物的重要性以及对体内组织重塑的影响。在组织工程肌腱的研究中引入FTE方法 ,通过测量正常肌腱组织的体内载荷,利用这些信息指导设计能承受体内载荷的合适的组织工程肌腱复合物,可望解决修复肌腱缺损的组织工程肌腱生物力学功能不能满足体内力学环境需要的问题。结论 FTETs对于治疗肌腱缺损具有广阔的应用前景。
- 宁良菊秦廷武
- 一种用于肌腱胶原纤维束及周围腱内膜组分分布形态学观察的快速组织学制片方法研究被引量：4
- 2019年
- 目的探讨一种用于观察肌腱胶原纤维束及周围腱内膜形态与组分分布的快速组织学制片方法。方法以猪趾浅屈肌腱组织为例,行冰冻切片,片厚6μm。大体观察切片完整性,HE染色观察组织完整性与冰晶形成情况。然后,将切片分为5组,A组行过碘酸雪夫(Priodic acid-Shiff,PAS)染色,B组行Masson染色,C组行网状纤维染色,D组行Ⅲ型胶原免疫组织化学和免疫荧光染色,E组切片经65℃烘烤10 min后行Masson染色。观察各组肌腱胶原纤维束与周围腱内膜组分分布情况。结果大体观察切片连续均匀;HE染色见组织整体结构完整清晰,无冰晶空隙形成,但无法观察到胶原纤维束与周围腱内膜组分分布情况。A、B、C组肌腱组织整体单一染色,无法辨认胶原纤维束与周围腱内膜组分分布;D组周围腱内膜单独弱显色,两组分能差异化染色,但对比度不明显;E组胶原纤维束与周围腱内膜差异化染色,两组分清晰可见。结论猪趾浅屈肌腱冰冻切片后,通过65℃烘烤10 min联合Masson染色方法可以快速准确显示胶原纤维束与周围腱内膜组分分布形态学表征。
- 张忆周利唐林巧秦廷武宁良菊
- 关键词：肌腱冰冻切片MASSON染色
- 不同周期的高脂血症大鼠模型的相关指标变化分析被引量：1
- 2023年
- 目的探讨不同周期的高脂血症大鼠模型的血脂水平及氧化应激水平,科学地分析其变化规律。方法SD大鼠随机分为对照组(正常饮食饮水)和处理组(正常饮水,给予高脂饲料喂养:基础饲料+15%猪油+20%蔗糖+1.2%胆固醇+0.2%胆酸钠),两个组别在分为0、15、30、60和90 d 5个小组,观察记录动物的一般状态,在不同的时间节点处理动物,取血清、检测血脂水平和氧化应激水平,肝称重,计算肝系数,部分肝置于4%多聚甲醛中,进行HE组织病理学染色,部分肝组织匀浆,检测血脂水平。结果模型组动物被毛暗淡无光泽,出现脱毛、行动迟缓的状态;体质量自15 d增长较为明显,肝系数自30 d开始明显增加,与对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05);模型组30 d和60 d血清中TG和CHO明显的升高,差异具有统计学意义(P<0.05),但90 d的TG与对照组相比,差异并无统计学意义;处理组自15 d开始血清中MDA升高,SOD明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05);T-AOC自30 d开始明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。处理组动物的肝组织自15 d开始,淋巴细胞聚集,肝细胞肿胀变性,细胞核挤向一侧,直到90 d肝索排列紊乱,肝细胞肿胀,发生脂肪变性,胞质内有大小不等的空泡肝血窦受压变形等病理改变。结论高脂血症动物模型成模率较高,但在药物预防和治疗作用的研究与分析中,应考虑到代谢的变化和周期的长短,除了血清指标外,建议增加组织和其他代谢酶活性的检测指标,更科学地分析药物的作用。
- 侯红平张广平彭博魏晓露王丽芳宋玲高云航陈腾飞宁良菊
- 关键词：高脂血症动物模型血脂水平氧化应激
- 一种用于肌腱二级纤维束及周围腱内膜形态观察的扫描电镜制样方法研究
- 2020年
- 目的探讨一种用于肌腱二级纤维束及周围腱内膜形态观察的扫描电镜制样方法。方法以猪趾浅屈肌腱为例,将肌腱在常温下横切为1 cm左右的肌腱段,通过双光子荧光显微镜观察组织完整性,行冰冻切片联合特殊Masson染色,观察肌腱二级纤维束及周围腱内膜分布情况。另取肌腱段若干经10%中性甲醛固定4 h,分为5组,采用不同的扫面电镜制样方法:A组,单纯梯度脱水;B组,行冰冻切片,再将肌腱切片进行梯度脱水;C组,梯度脱水至70%,行冰冻切片,再将肌腱切片进行梯度脱水;D组,梯度脱水至80%,行冰冻切片,再将肌腱切片进行梯度脱水;E组,梯度脱水至100%,行冰冻切片。各梯度脱水试剂为乙醇配制,梯度脱水终浓度均为100%。冰冻切片厚度均为100μm。经临界点干燥喷金后行体视显微镜和扫描电镜观察。结果双光子二次谐波显微成像观察示肌腱结构完整连续。Masson染色观察示周围腱内膜较薄区域难以辨别独立胶原纤维束。体视显微镜观察示肌腱切片电镜制样后大体完整,三级纤维束的周围腱内膜清晰可见。扫描电镜观察示A、D、E组肌腱组织呈现不同程度的过度收缩,二级纤维束结构无法辨别;B组整体呈现无规律的冰晶空隙,二级纤维束结构难以辨认,胶原纤维排列清晰可见;C组连续完整,二级纤维束及其周围腱内膜、胶原纤维排列均清晰可见。结论扫描电镜的肌腱试样制备,可通过组织固定后经乙醇梯度脱水至70%,行冰冻切片,再将肌腱切片继续梯度脱水至100%,该方法能清晰观察到肌腱二级纤维束及周围腱内膜的形态。
- 张忆苏波杨桢胡若楠宁良菊
- 关键词：肌腱冰冻切片扫描电镜
- 肌腱修复支架的结构和力学性能研究
- (引言)肌腱是由Ⅰ型胶原原纤维分层排列的致密结缔组织，并且将力从肌肉传递到骨骼。每年，有大量的慢性和急性的肌腱损伤[1]。若损伤未予以及时修复，常会导致肢体功能障碍，重者甚至残废。因而肌腱损伤或缺损后其手术修复和功能重建...
- 崔静宁良菊姚璇卿泉张艳净张忆秦廷武
- 关键词：腱膜胶原纤维
