王岚
- 作品数：55 被引量：191H指数：7
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖北省卫生厅科研基金湖北省卫生厅青年科技人才基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 左旋多巴治疗帕金森病诱发异动症的实验研究被引量：8
- 2004年
- 曹学兵孙圣刚徐岩王岚苏颖
- 关键词：左旋多巴帕金森病异动症动物模型脑啡肽
- 左旋多巴诱发异动症大鼠皮质纹状体突触超微结构与功能的变化被引量：16
- 2004年
- 目的 探讨左旋多巴诱发异动症 (levodopainduceddyskinesias ,LID)大鼠皮质纹状体突触结构和功能的变化。方法 6 羟多巴胺 (6 OHDA)立体定位注射制备偏侧帕金森病 (Parkinsondisease,PD)大鼠模型 ,复方左旋多巴 (L dopa)甲酯腹腔注射治疗 4周 (2 0mg·kg-1·d-1,每天 2次 )诱发LID大鼠模型。采用免疫组化及透射电镜方法对大鼠皮质纹状体突触界面的结构进行定量分析 ,并观察单次地佐环平 (MK 80 1,0 1mg/kg)治疗后突触前谷氨酸 (Glu)释放量的变化。结果 透射电镜证实皮质Glu能纤维与纹状体神经元的树突棘构成不对称突触 ,与PD大鼠比较 ,LID大鼠Glu能非对称性突触中穿孔性突触进一步增加 (P <0 0 1) ,且突触间隙变窄 ,突触后致密物质 (post synapticdensity ,PSD)厚度增加 (P <0 0 5 )。同时伴有突触前Glu释放量的增多 ,但可被N 甲基 D 门冬氨酸 (NMDA)受体拮抗剂MK 80 1所抑制。结论 慢性L dopa治疗使皮质纹状体突触功能进一步活化 ,其中涉及突触后形态和功能的改变及突触前活性的增强 。
- 曹学兵孙圣刚王岚徐岩童萼塘袁光雷
- 关键词：左旋多巴异动症突触超微结构6-OHDA
- 环境毒素导致多巴胺能神经元蛋白水解应激的实验研究被引量：1
- 2007年
- 目的探讨环境毒素诱发蛋白水解应激在多巴胺能神经元变性死亡中的作用。方法6-羟多巴(6-OHDA)、1-甲基4-苯基吡啶离子(MPP^+)、鱼藤酮作用于神经生长因子诱导的 PC12细胞,MTT 法检测各种药物的神经毒性作用,应用共聚焦免疫荧光双标染色观察药物处理后细胞内α-突触核蛋白及泛素化蛋白的表达及聚集。荧光分光光度计测量各组细胞蛋白酶体中各蛋白水解酶活性的变化。结果 3种神经诱变剂处理 PC12细胞后,细胞活力呈浓度依赖性下降,其中6-OHDA100 μmol/L、MPP^+75μmol/L、鱼藤酮20 nmol/L 作用24 h 使细胞活力分别下降52%、44%、40%(P<0.01)。共聚焦显微镜观察显示药物处理后细胞胞质内α-突触核蛋白及泛素表达上调,并形成蛋白颗粒物。酶活性测定提示 MPP^+75μmol/L、鱼藤酮20 nmol/L 处理使胰蛋白酶,糜蛋白酶及 PgH 水解酶活性明显下降(P<0.05),而6-OHDA 100μmol/L 处理使细胞蛋白酶水解能力轻度降低,差异无统计学意义(P>0.05),6-OHDA 200μmol/L 则诱导3种蛋白酶活性进一步下降,荧光指数分别为7.23±0.58,79.60±2.73和4.23±0.49(正常组为13.90±1.75,99.30±5.23和6.90±0.60,P<0.01)。结论神经诱变剂可导致多巴胺能神经元泛素蛋白酶体功能失调及α-突触核蛋白和泛素化蛋白的积聚,诱发蛋白水解应激异常状态。
- 王岚曹雪兵王建明曲瑞森徐丽乔娴孙圣刚
- 关键词：帕金森病Α-突触核蛋白蛋白酶体
- 内质网应激及其相关性凋亡在多巴胺能神经元选择性变性死亡中的作用被引量：5
- 2006年
- 目的探讨内质网应激反应(endoplasmic reticulum stress response,ERS)及相关凋亡途径在多巴胺能神经元变性死亡中的作用。方法6-羟基多巴胺(6-OHDA)、N-甲基-4苯基吡啶离子(MPP^+)、鱼藤酮作用于神经生长因子(NGF)诱导的PC12细胞,MTT及流式细胞仪方法检测各种药物的神经毒性作用及细胞凋亡率,应用RT-PCR和Western印迹技术观察以上药物处理后ERS通路中XBP1、Grp78、CHOP表达水平的变化及相关凋亡因子caspase-12的活化和利血平耗竭胞内多巴胺水平后的影响。结果3种神经诱变剂处理PC12细胞后,细胞活力呈浓度依赖性下降,其中6-OHDA 100μmol/L、MPP^+75μmol/L、鱼藤酮20 nmol/L作用24 h使细胞活力分别下降52%、44%、40%。流式细胞仪显示的细胞凋亡率在8 h、16 h、24 h内逐渐增高(P＜0．01)。RT-PCR及免疫组化检测显示处理后XBP1、Grp78表达和CHOP的基因及蛋白表达水平明显增加,分别在8 h、16～24 h达到高峰(P＜10．01)。caspase-12 mRNA水平也在诱导后16 h显著升高(P＜0．01),利血平预处理使其基因表达减弱(P＜0．05)。结论内质网应激和相关凋亡途径是多巴胺能神经元选择性变性死亡的内在环节之一。
- 王岚孙圣刚曹学兵张振涛徐丽
- 关键词：内质网多巴胺帕金森病
- 清脑灵诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化成神经元样细胞被引量：4
- 2010年
- 目的观察清脑灵煎剂是否能诱导大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)分化成神经元样细胞。方法通过贴壁法分离获得大鼠骨使髓间充质干细胞,体外扩增培养,用流式细胞仪检测细胞表面抗原的表达。用浓度为1mg/mL的清脑灵煎剂诱导MSCs,分别于5h、12h、1d、3d、7d在倒置显微镜下观察细胞形态变化,用免疫细胞化学方法观察被诱导细胞巢蛋白(nestin)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。结果流式细胞仪检示MSCs不表达CD11b、CD45,诱导后细胞的免疫细胞化学示nestin阳性细胞、NSE阳性细胞和GFAP阴性细胞。结论清脑灵能诱导MSCs分化神经元样细胞。
- 王金良薛卡明刘建国王岚谢仪凤
- 关键词：清脑灵骨髓问充质干细胞神经元样细胞
- 帕金森病发病机制研究进展被引量：18
- 2006年
- 王岚孙圣刚
- 关键词：帕金森病发病机制线粒体氧化应激Α-突触核蛋白
- 重组大鼠肝再生增强因子原核表达载体构建及多克隆抗体制备被引量：2
- 2010年
- 背景:国外有1篇文献报道了肝再生增强因子在中枢神经系统内的分布与表达。由于关于重组大鼠肝再生增强因子蛋白多克隆抗体制备、鉴定及原核表达载体如何构建的相关文献较少,国内对于其在中枢神经系统的研究目前未见报道。目的:利用大肠杆菌BL21表达大鼠肝再生增强因子融合蛋白,并制备和鉴定其多克隆抗体。方法:提取SD大鼠海马组织RNA,构建原核表达重组质粒pET28a-ALR并转化到宿主菌BL21中,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导表达目的融合蛋白,经Ni2+亲和层析纯化回收,4次免疫日本大耳白兔后,心脏取血,吸取血清作为多克隆抗体,以ELISA测定抗体血清效价,Western-blotting检测抗体的特异性和亲和性。观察:①原核表达重组质粒pET28a-ALR构建。②pET28a-ALR重组体酶切鉴定。③ELISA及Western-blotting检测结果。结果与结论:双酶切电泳检测结果显示得到了预期条带,其大小分别为5.3kb和0.4kb,经核苷酸序列分析证明成功构建了pET28a-ALR原核表达载体。成功获得分子质量约为19ku纯化的融合蛋白。ELISA测定显示多克隆抗体效价可达到1∶2000,说明抗体与纯化的重组肝再生增强因子蛋白具有良好的反应性,有较高的效价,可满足实验的要求。通过Western-blotting检测证明该抗体可以特异性识别肝再生增强因子蛋白。实验成功地利用原核表达体系表达了肝再生增强因子融合蛋白,并制备、纯化了抗肝再生增强因子蛋白的多克隆抗体,经鉴定能够满足针对肝再生增强因子免疫印迹检测的实验要求。
- 刘正芳王建明王岚曾晓云熊玲罗志秀伍俊伊
- 关键词：肝再生增强因子原核表达多克隆抗体
- 消瘤汤含药血清对人肝癌细胞HepG2凋亡相关因子表达的影响被引量：6
- 2009年
- [目的]观察消瘤汤含药血清对人肝癌细胞HepG2凋亡相关因子表达的影响,进一步证实该方对肿瘤细胞的抑制作用,并初步探讨其诱导肝癌细胞凋亡的作用机制。[方法]给予昆明种小鼠中药煎剂灌胃3d后,制备消瘤汤鼠含药血清,将其作用于HepG2细胞,用四氮唑盐法(MTT法)检测含药血清对HepG2细胞增殖的抑制作用,通过流式细胞技术测定肿瘤细胞的凋亡情况,应用免疫组化法检测半胱氨酸蛋白酸3(Caspase-3)、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)蛋白表达水平。[结果]消瘤汤鼠含药血清作用于HepG2细胞72h后,对肿瘤细胞生长有明显抑制作用。流式细胞仪检测可见含药血清组在细胞G1/G0期前出现明显的凋亡峰,即"亚二倍体峰"。凋亡率为22.3%,明显高于对照组的1.05%(P<0.05)。免疫组化结果表明Caspase-3在含药血清干预后,表达明显增加,而Bcl-2在含药血清干预后,表达明显降低。[结论]消瘤汤可能通过激活Caspase-3及抑制Bcl-2的活性,从而诱导肝癌细胞凋亡,有效地抑制肝癌细胞生长,达到抗肿瘤的作用。
- 王岚刘建国朱锐杨胜兰张喆赵洪波王金良
- 关键词：消瘤汤HEPG2
- 泛素蛋白酶体抑制剂诱发多巴胺能神经元内质网应激反应及其凋亡的作用被引量：5
- 2006年
- 目的 探讨泛素蛋白酶体(ubiquitin proteasome,UP)功能失调诱发的内质网应激反应(endoplasmic reticulum stress response,ERS)机制在多巴胺(dopamine,DA)能神经元变性死亡中的作用.方法 通过MTT及流式细胞仪检测UPS抑制剂Lactacystin对NGF诱导的PC12细胞的神经毒性作用,应用RT-PCR和Western blot技术观察Lactacystin处理后ERS通路中XBP1、Grp78、CHOP表达水平的变化及利血平耗竭胞内DA水平后的影响.结果 不同浓度的Lactacystin 5～20μmol/L处理PC12细胞后,细胞活力呈浓度依赖性下降,其中Lactacystin 10μmo1/L作用24h使细胞活力下降51%.在相同浓度条件下(10μmol/L)流式细胞仪显示的细胞凋亡率在4h、8h、1 6h、24h内逐渐增高(6.1%、14.1%、24.9%、30.9%)(P＜0.01).RT-PCR及免疫印迹检测显示UPS抑制剂处理后XBP1、Grp78和CHOP的基因及蛋白表达水平明显增加,分别在8h、16～24h达到高峰(P＜0.05).Caspase-12基因水平也在Lactacystin诱导后16h显著升高(P＜0.05).利血平预处理则使CHOP、caspase-12基因表达减弱(P＜0.05).结论 UPS功能抑制诱发的内质网应激和相关凋亡途径机制是DA能神经元选择性变性死亡的内在环节之一.
- 王岚孙圣刚曹学兵张振涛徐丽
- 关键词：泛素蛋白酶体内质网应激帕金森病
- 脑卒中患者情感需求状况的调查分析及对策
- 2013年
- 目的探讨脑卒中患者情感需求特点及护理对策。方法对110例脑卒中患者应用自行设计的情感需求袁问卷进行调查及回访反馈，并结合汉密顿抑郁量和焦虑量表对患者的情感状态影响进行分析。结果脑卒中患者情感需求范围较广泛，尤其是“需要亲人的陪伴和照顾”以及“希望保持与家人的感情”等方面需求强烈，同时情感需求满足程度越差其越易发生情感障碍。结论脑卒中患者情感需求较广，但需求满足程度欠理想，需进行针对性护理以提高患者的情感需求满足程度，降低患者情感障碍的发生风险。
- 闫青王岚
- 关键词：脑卒中情感需求护理
