张青
- 作品数：1 被引量：1H指数：1
- 供职机构：南京师范大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 寡核苷酸介导的重组工程法构建容纳毒性基因ccdB的新型菌株被引量：1
- 2016年
- 毒性基因ccd B是最为常用的一种负筛选标记,ccd B基因和R6K复制子一起组成了高效的基因克隆和基因组修饰的遗传操作元件.为获得高转化效率的容纳ccd B基因的菌株,本研究采用重组工程手段,以经优化去除了错配修复的寡核苷酸与p UC骨架、含有ccd B基因的质粒p MK2010共转化,直接对含pir116基因型的大肠杆菌DH10B衍生菌株的基因组进行修饰.在筛选的10个菌株中,7个为预期的Gyr A462基因型.为消除p MK2010,构建了一个p UC骨架、氨苄青霉素抗性的诱导自剪切质粒p LS2750.p LS2750通过质粒不相容性去除p MK2010后,经诱导I-Sce I自剪切而消除.所得菌株LS027的电转化效率为6.9×10~8/mg,是对照菌株的约100倍,R6K质粒呈现高拷贝.以LS027为宿主菌的构建了系列克隆载体,以只进行基因克隆可避免载体自连的干扰.新型ccd B基因容纳菌株LS027有着基因操作方面广泛运用的潜力.
- 严振亚柴美霞张青骆希尚广东
- 关键词：CCD寡核苷酸
