王彦云
- 作品数：5 被引量：23H指数：4
- 供职机构：苏州大学更多>>
- 发文基金：国家现代农业产业技术体系建设项目江苏高校优势学科建设工程项目国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 家蚕丝氨酸蛋白酶抑制剂基因serpin-6在不同发育时期的表达分析被引量：4
- 2010年
- 丝氨酸蛋白酶抑制剂(serpin)是一类具有重要生理调控功能的蛋白酶超家族。为研究家蚕serpin-6基因(Bmserpin-6)在蚕体内的功能,利用半定量RT-PCR方法,分析该基因mRNA在家蚕不同发育时期的转录水平。Bmserpin-6基因在家蚕各个发育阶段均有表达,在4龄眠期、5龄6d、吐丝48h(化蛹前)和化蛹6d的转录水平较高,在5龄4d、吐丝初期和蛹末期的转录水平较低。Bmserpin-6基因在5龄期家蚕精巢和卵巢中的表达均呈现先下降后上升的趋势。研究结果表明,Bmserpin-6基因mRNA的转录具有明显的时空特异性,推测其在家蚕不同的变态发育期执行不同的功能。
- 俞燕芳查宏贤王彦云卫正国李兵陈玉华许雅香沈卫德
- 关键词：家蚕丝氨酸蛋白酶抑制剂基因转录变态发育
- 家蚕丝氨酸蛋白酶抑制剂serpin6基因转录特异性分析及多克隆抗体制备
- 为研究家蚕丝氨酸蛋白酶抑制剂serpin6基因（Bmserpin-6）与家蚕表皮黑化硬化、蜕皮变态、先天性免疫等生理过程的关系，以家蚕（大造）为材料，采用实时荧光定量PCR方法，分析了家蚕多个发育时期，多个组织中Bmse...
- 王彦云
- 关键词：家蚕MRNA转录多克隆抗体
- 文献传递
- 家蚕丝氨酸蛋白酶抑制剂4(serpin-4)的基因克隆、原核表达和多克隆抗体制备被引量：15
- 2011年
- 丝氨酸蛋白酶抑制剂4(serpin-4)为丝氨酸蛋白酶抑制剂家族中的一员。本研究旨在研制高效价的家蚕Bombyxmoriserpin-4多克隆抗体,为深入研究serpin-4基因的生理功能打下物质基础。首先于家蚕脂肪体中克隆了serpin-4基因,利用基因重组技术构建了pET28a-serpin-4原核表达载体,经IPTG诱导,获得原核表达重组融合蛋白,利用镍柱回收纯化技术,获得目的蛋白;经SDS-PAGE和抗His多抗检测,纯化蛋白的分子量大小与预测的一致,即获得了高纯度的目的蛋白,以此蛋白为免疫抗原,采用4次免疫方式对昆明小鼠进行抗原免疫,最终获得抗serpin-4的多克隆抗体血清;该血清经ELISA和Westernblot验证,效价达到1:20000,特异性较好。家蚕serpin-4多克隆抗体的成功制备,一方面表明应用于其他生物的多克隆抗体制备所采用的方法对于家蚕serpin基因的研究同样适用;另一方面,也为深入研究家蚕serpin-4的生理功能打下了物质基础。
- 查宏贤刘罡张晨王彦云卫正国李兵陈玉华许雅香沈卫德
- 关键词：家蚕丝氨酸蛋白酶抑制剂基因克隆原核表达多克隆抗体
- 家蚕丝氨酸蛋白酶抑制剂基因Bmserpin-6的特异性表达分析被引量：6
- 2013年
- 丝氨酸蛋白酶抑制剂(Serpin)在昆虫的先天性免疫及生长发育中发挥重要作用。为研究家蚕丝氨酸蛋白酶抑制剂6(Bmserpin-6)在家蚕表皮黑化反应、蜕皮变态和先天性免疫等生理过程中的功能作用,采用实时荧光定量PCR方法,检测Bm-serpin-6 mRNA在家蚕幼虫组织和蜕皮过程以及免疫刺激处理后的转录特征。结果表明:Bmserpin-6 mRNA在4龄幼虫的头部、表皮、中肠、丝腺和脂肪体中有转录,其中在表皮中高水平转录,但在眠中的转录水平下调;在5龄幼虫头部的转录水平随发育时间呈先升后降的趋势;脂多糖(LPS)刺激5龄第3天幼虫后,Bmserpin-6 mRNA在血液和脂肪体中的转录水平上升,其中在脂肪体中的转录水平自刺激后6 h达到最高值,在血液中的转录水平自刺激后9 h达到最高值。结果提示,Bmserpin-6可能与家蚕的表皮黑化反应及蜕皮有一定关系。
- 王彦云何渐鸣李国胜王明慧沈卫德许雅香
- 关键词：家蚕丝氨酸蛋白酶抑制剂实时荧光定量PCR基因转录
- 家蚕丝氨酸蛋白酶抑制剂5的多克隆抗体制备及组织表达分析被引量：4
- 2013年
- 为探讨家蚕丝氨酸蛋白酶抑制剂5(Serpin-5)的功能,制备其多克隆抗体并分析该蛋白质在家蚕组织中的表达特征。克隆获得去除信号肽的家蚕serpin-5基因,该基因大小为1 140 bp,编码379个氨基酸残基,预测蛋白质分子质量42.6 kD,等电点6.02。构建用于原核表达的pET28a-serpin-5载体,并在E.coli BL21中进行重组蛋白的诱导表达。经SDS-PAGE分析表明重组家蚕Serpin-5蛋白多以包涵体的形式存在,纯化后的融合蛋白的分子质量与预测值相符。以此为抗原免疫昆明小鼠,Western blot检测制备的多克隆抗体具有较高的特异性,ELISA检测该多抗对免疫抗原的效价达到1∶24 000。在制备高效价抗体的基础上,通过Western blot检测家蚕Serpin-5蛋白在5龄第3天幼虫精巢、卵巢中的表达量较高,中肠次之,在丝腺、马氏管、脂肪体中的表达量较低。推测家蚕Serpin-5蛋白在生殖腺中的高表达可能与家蚕的生殖功能相关。
- 李国胜王彦云王明慧徐开遵陈玉华沈卫德许雅香
- 关键词：家蚕丝氨酸蛋白酶抑制剂原核表达多克隆抗体
