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GFP-ESAT6融合蛋白表达载体的构建及表达纯化被引量：3: 2009年; 根据GenBank中发表的结核杆菌H37Rv的ESAT6基因序列设计1对引物,以热灭活的结核杆菌H37Rv菌悬液为模板,用PCR方法扩增得到ESAT6基因DNA片段。将扩增片段克隆于pGM-T载体中,成功构建克隆载体pGM-T-ESAT6。分别将pET28a-GFP质粒和pGM-T-ESAT6质粒用限制性内切酶EcoRⅠ和SalⅠ双酶切,并将纯化的ESAT6基因亚克隆至pET28a-GFP中,构建原核表达载体pET28a-GFP-ESAT6。将pET28a-GFP-ESAT6转化E.coliBL 21(DE3),经IPTG诱导、SDS-PAGE和Western-blot分析,可见相对分子质量约37 200的外源蛋白带,表明GFP-ESAT6融合基因在大肠杆菌中得到了表达。用Ni-NTA Agarose试剂盒进行蛋白纯化,获得纯化的GFP-ESAT6融合蛋白。; 曹旭东陈创夫王远志姜文亿刘景; 关键词：结核分枝杆菌 ESAT6 GFP 原核表达

结核分枝杆菌快速检测方法的建立及其fadB4//cysD基因的表达: 近些年,结核病发病率持续上升,耐药性结核病的增多以及艾滋病在全球范围内迅速蔓延,传统的结核杆菌检测手段如抗酸染色、分枝杆菌培养、药敏试验与菌种鉴定技术以及抗体检测等已经远远不能满足临床诊断需求,建立一种简洁而敏感的诊断方...; 刘景; 关键词：结核分枝杆菌巢式PCR; 文献传递

结核分枝杆菌巢式PCR诊断技术的建立和初步评价: 2008年; 以结核分枝杆菌特有的插入序列IS6110设计巢式PCR引物,对痰样本结核分枝杆菌的基因组DNA进行扩增,建立了检测结核病病原的巢式PCR诊断方法,试验验证有较好的特异性和敏感性,采用此方法扩增结核分枝杆菌可以获得244 bp的目的片段,对常见病原菌金黄色葡萄球菌、链球菌、沙门氏菌、大肠杆菌、李氏杆菌、布鲁氏菌等以及无结核病史的痰样本检测阴性,通过扩增不同浓度梯度稀释的模拟阳性痰样本确定了其敏感性为4个拷贝/反应。对送检的41份痰样本采用本方法进行检测,阳性率为60.98%。; 刘景陈创夫张辉曹旭东任艳唐丽燕; 关键词：结核分枝杆菌巢式PCR

新疆巴州部分地区布鲁氏菌病血清流行病学初步调查: 2017年; 以新疆巴州地区各县布病疫情流行病学检疫资料为基础，重点进行布病的流行病学调查，了解布病流行情况。本研究采用虎红平板凝集试验（RBPT）和试管凝集试验（STA）血清学方法进行筛选和确诊。结果表明，2015年共采集巴州地区四个县11个乡镇的散养农户牛、羊436份血清样本，RBPT检测的平均阳性率为8％，试管凝集试验（STA）检测的阳性率为4．37％。; 唐莉娟马博刘景张振; 关键词：布鲁氏菌平板凝集试管凝集流行病学调查

结核分枝杆菌硫酸化酶基因的克隆及其原核表达、鉴定及纯化: 2017年; 本文拟对结核分枝杆菌ATP硫酸化酶基因进行原核表达,并鉴定其抗原性。根据结核分枝杆菌H37Rv ATP硫酸化酶(cys D)基因设计引物,扩增出大小约为999bp的目的基因片段。将PCR纯化产物克隆至PMD18-T中,构建重组质粒载体PMD18-T-cys D。以SacⅠ和HindⅢ双酶切重组载体PMD18-T-cys D和表达载体p ET-32a(+),并将纯化的cys D基因亚克隆至p ET-32a(+)中,构建出原核重组表达质粒p ET-32a-cys D。将p ET-32a-cys D重组质粒转化至感受态细胞E.coli BL21(DE3)中,经IPTG诱导和SDS-PAGE分析,可见约55KD目的蛋白带。用Western blot分析方法鉴定该蛋白。结果显示纯化后所获得的融合蛋白与抗结核分支杆菌阳性血清发生特异性反应。表明研究成功构建了p ET-32a-cys原核表达载体,纯化的融合蛋白具有良好的免疫原性。; 唐莉娟马博刘景周鸿淼张振; 关键词：结核杆菌原核表达

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刘景