- 日本脑炎病毒受体功能缺陷细胞的筛选和鉴定被引量：3
- 2007年
- 目的筛选并鉴定日本脑炎病毒(JEV)受体功能缺陷的BHK-21细胞突变株。方法用化学诱变剂ICR-191人工诱变JEV易感细胞系BHK-21,经JEV攻击,对存活细胞克隆化,RT-PCR筛选JEV RNA阴性细胞,用流式细胞术,免疫荧光和空斑实验鉴定其对JEV的敏感性。结果筛选到1株JEV RNA阴性细胞3A10-3F。流式细胞术检测3A10-3F细胞与JEV的结合率为2.10%,免疫荧光和空斑实验证实其对JEV感染有相当程度的抵抗,在JEV感染复数MOI 1时3A10-3F细胞培养上清中JEV最高滴度比BHK-21细胞中JEV最高滴度下降2个数量级。结论用化学诱变法筛选到1株JEV受体功能缺陷细胞,为进一步鉴定JEV受体,深入研究JEV致病机理提供了有益线索。
- 任君萍张伟黄庆生高淑娴宋建华丁天兵马文煜
- 关键词：病毒受体BHK-21细胞
- 乙型脑炎病毒E蛋白Ⅲ区基因的克隆表达及亲合层析纯化被引量：1
- 2007年
- 克隆表达JEVE蛋白Ⅲ区基因,序列测定正确后进行融合表达、纯化。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)从JEVcDNA中扩增Ⅲ区基因,用限制性内切酶消化后插入到PMD-18T载体,序列测定正确后,再亚克隆到融合表达载体pET32a中。转化大肠杆菌BL21(DE3),目的基因经IPTG诱导,由T7启动子调控表达了氨基端带6个连续组氨酸残基的JEVEⅢ区蛋白。在变性条件下对目的蛋白进行纯化,获得了融合6个组氨酸残基的JEVEⅢ区蛋白,蛋白纯度大于80%。证实构建了JEVEⅢ基因的重组表达载体,并获得了高纯度的融合表达蛋白,为以后的深入研究奠定了基础。
- 任君萍高淑娴张伟雷迎峰丁天兵宋建华马文煜
- 关键词：日本脑炎病毒克隆纯化
- 乙脑病毒E蛋白的原核表达、纯化及初步鉴定被引量：2
- 2007年
- 目的:构建乙脑病毒(JEV)E蛋白重组载体并在原核细胞BL21(DE3)中表达.方法:采用RT-PCR扩增片段,定向克隆入pET28a(+)中;重组载体pET28a-6His-E转化BL21(DE3),通过酶切、SDS-PAGE和Western Blotting检测其载体构建和蛋白表达;表达产物包涵体经Ni-NTA亲和层析纯化.结果:构建得到原核融合重组载体pET28a-6His-E;诱导后表达得到6His-E融合蛋白,纯化得到表达产物并进行了初步的鉴定.结论:表达并纯化得到JEVE蛋白原核表达产物.
- 高淑娴张伟任君萍雷迎峰丁天兵宋建华马文煜徐志凯
- 关键词：病毒包膜蛋白质类
