陈华友
- 作品数：27 被引量：85H指数：6
- 供职机构：江苏大学更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学化学工程环境科学与工程更多>>
- 一种构建新型T载体的简便方法及应用被引量：4
- 2011年
- T载体能够用于PCR产物的快速克隆且易于操作。以常用的克隆载体pGEM-3zf(+)为出发材料,将其进行改造为通用的T载体。通过一步反向PCR方法在该载体中插入带有Xcm I酶切位点的一段序列,在Xcm I酶的切割下产生两端含有T核苷酸的线型核苷酸序列,最终获得用于克隆PCR产物的T载体。外源基因xdh克隆试验表明该载体构建成功,此载体完全可以用于PCR产物的基因克隆试验,为相关载体的改造提供了思路。
- 齐向辉陈辉沈琦何晨曦刘学郭齐陈华友徐虹
- 关键词：T载体I
- 枯草杆菌重组水蛭素的分离纯化工艺研究(摘要)(英文)被引量：7
- 2009年
- [目的]优化枯草杆菌重组水蛭素的分离纯化工艺。[方法]通过系列预处理和初步层析和精细纯化试验。发酵液固液分离和预处理:大批的发酵液采用连续流离心,取上清液,滴加50%三氯乙酸,当pH值达到2.2～2.5时停止滴加,静置1 h,离心,取上清液,用饱和NaOH调pH值回中性。然后利用SYNDER-UF202型超滤装置进行超滤浓缩脱盐,先用孔径为0.1μm的滤膜芯进行微滤除大固粒,再用截留分子量为1 000 Da的超滤膜芯进行超滤浓缩,加蒸馏水重复超滤浓缩脱盐。然后在等电点pH 4.0左右进行6倍体积的乙醇沉淀浓缩。离子交换初步层析:最佳pH值8.0,以Tris-HCl缓冲体系为佳;强阴离子交换选用Q Sepharose F.F.介质;系统电导率6 ms/cm,水蛭素的最大上样量以每毫升介质240 ATU为佳,流速1 ml/min;优化工艺在强阴离子交换HiPrep 16/10Q上放大。Sephacryl S-100凝胶过滤柱纯化水蛭素:在一定流速范围内,流速对纯化效果影响不大,上样量可在10ml左右。[结果]优化的分离纯化路线为:大量发酵液→离心→三氯乙酸处理(91%回收率)→再离心→超滤浓缩脱盐(80%回收率)→乙醇沉淀浓缩(82%回收率)→强阴离子交换(90%回收率)→硫酸氨沉淀浓缩(90%回收率)→Sepharcyl S-100凝胶过滤(回收率93%)→纯品(总回收率=91%×80%×82%×90%×90%×93%=45%,纯度95.1%)。[结论]可为进一步工业化分离纯化水蛭素研究提供借鉴。
- 陈华友齐向辉耿旭徐庆刚
- 关键词：水蛭素枯草杆菌离子交换分离纯化
- 枯草杆菌重组水蛭素(HV3)的发酵工艺研究被引量：1
- 2009年
- [目的]确定芽孢杆菌发酵生产水蛭素的最佳工艺条件。[方法]以枯草芽孢杆菌为供试菌种,研究菌种活化时间、接种量、培养基装量、温度、初始pH值、碳源、氮源等对发酵的影响,在此基础上对发酵条件进行优化。[结果]最佳发酵条件为:温度37℃,初始pH值7,培养基装量20ml/250ml,菌种活化时间6h,接种量3%,氮源为1.5%Tryptone,碳源为9.0%大豆浸出液,转速220r/min,16h后添加0.3%Tween80,发酵时间29h。[结论]优化条件下,发酵液活性可达210ATU/ml,较优化前提高13.1倍;优化条件上50L罐放大后具有很好的重复性,发酵液活性可达208ATU/ml。
- 陈华友齐向辉谭小力乌慧玲
- 关键词：水蛭素枯草杆菌发酵
- 基因工程菌发酵研究进展被引量：6
- 2012年
- 基因工程菌发酵主要目标是获取高产外源基因表达蛋白。介绍并分析了基因工程菌发酵过程中表达系统、培养基、温度、pH值、溶解氧和诱导条件等因素对发酵的影响;论述了工程菌高密度培养所需的培养方式,并总结了基因工程菌发酵领域近年来的一些进展。
- 张金红陈华友李萍萍
- 关键词：基因工程菌
- 河豚4SNc-Tudor蛋白的鉴定及生物信息分析被引量：6
- 2010年
- [目的]对河豚4SNc-Tudor蛋白(SN4TDR)进行序列与结构相关的生物信息分析,为认识该蛋白结构与功能提供借鉴。[方法]应用双向电泳及基质辅助激光解吸离子化-飞行时间质谱(MALD I-TOFMS)技术,从河豚肝脏总蛋白中鉴定到河豚的4SNc-Tudor结构域蛋白。并对其进行生物信息学分析。[结果]首次从河豚肝脏总蛋白中鉴定到河豚的4SNc-Tudor结构域蛋白SN4TDR。河豚SN4TDR定位于细胞质,无信号肽,为非分泌蛋白,有多个磷酸化位点。蛋白SN4TDR存在α-螺旋、β-折叠和无规则卷曲结构,有一个可能形成跨膜结构的片段。并用同源建模的方法,预测了河豚SN4TDR的三维结构模型。[结论]分析河豚SN4TDR基因及蛋白结构,有助于进一步研究该蛋白及其基因的分子和生物学功能。
- 徐庆刚陆健郑建洲陈华友陈克平
- 关键词：河豚MS
- 实时荧光定量PCR技术在生物饲料中的应用被引量：4
- 2021年
- 生物饲料技术主要指通过微生物发酵,有效降解转化饲料中的抗营养因子,促进养分的消化吸收,分泌小肽、有机酸等功能物质,菌群演变是其重要内容。目前,发酵菌群的定量数据大多通过传统的依赖于培养的微生物学方法获得,由于其局限性,发酵饲料的微生物生态学尚未被很好地了解。因此,本文主要介绍了实时荧光定量PCR技术的原理和分类,综述了近年来实时荧光定量PCR技术在生物饲料研究领域中的应用及注意事项,为该领域的深入发展提供理论依据。
- 康凌宇倪忠武俊明陈华友
- 关键词：实时荧光定量PCR生物饲料微生物
- 枯草杆菌重组水蛭素的分离纯化工艺研究被引量：7
- 2009年
- [目的]优化枯草杆菌重组水蛭素的分离纯化工艺。[方法]采用系列预处理、初步层析和精细纯化试验。[结果]优化的分离纯化工艺为:发酵液经离心、三氯乙酸处理、超滤浓缩脱盐,再上阴离子交换柱,或用乙醇处理后贮存,为离子交换备用。初步层析介质用阴离子交换QSepharoseF.F.,缓冲体系为Tris-HCl(pH值8.0),体系电导率为6.0mS/cm,上样量为240.0ATU/ml介质,产品纯度为70.2%,回收率达90.0%。用SephacrylSi-100凝胶过滤柱精细纯化水蛭素,在一定流速范围内,流速对纯化效果影响不大,上样量可为10.0ml,得到的纯品纯度可达95.1%,得率为93.0%,SDS-PAGE电泳为单一条带。[结论]可为进一步工业化分离纯化水蛭素研究提供借鉴。
- 陈华友齐向辉耿旭徐庆刚
- 关键词：水蛭素枯草杆菌离子交换分离纯化
- 白囊耙齿菌锰过氧化物酶在粟酒裂殖酵母中表达鉴定及菌酶协同发酵
- 2022年
- 首次将源于白囊耙齿菌(Irpexlacteus,I.lacteus)的一种锰过氧化物酶基因mnp(GenBank:MH120207.1)经密码子优化后与无任何抗性基因且有Gfa基因的高效表达载体pREP相连,构建原核-真核穿梭表达载体pREP-mnp,再电转化导入Gfa营养缺陷型粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)中,构建生物安全级粟酒裂殖酵母,SDS-PAGE验证目的蛋白表达。所构建的工程菌胞外表达MnP,酶活力在第4天达到峰值,为17.46 U/L。所构建的工程菌经混菌发酵菌种筛选和氮源优化,在菌酶协同发酵中有显著的促进玉米秸秆木质素降解的效果。玉米秸秆中添加0.5%尿素、2%(NH_(4))_(2)SO_(4)、0.02%Tween-80、使基质终浓度为0.5 mmol/L的草酸、0.5%CaCl_(2)、0.3%MnSO_(4),S.pombe-pREP-mnp与N.crassa、S.pombe-man、C.utili、1%Lac、0.4%GOD协同发酵3 d后,玉米秸秆中木质素、半纤维素和纤维素的降解率分别为60.79%、27.61%和25.49%,真蛋白含量提高了310.99%。
- 衡新宇崔周磊梁晓玉房燕洲武俊明陈华友
- 关键词：锰过氧化物酶粟酒裂殖酵母基因表达木质素降解真蛋白
- 枯草芽胞杆菌孢子表面展示外源蛋白的研究被引量：1
- 2014年
- 枯草芽胞杆菌孢子表面展示技术是最近十几年新兴的一种外源蛋白固定方法,已在酶学、疫苗学、靶向药物制备、金属污染治理等领域获得了广泛应用。以孢子衣壳蛋白为载体蛋白,已经成功地把许多抗原、酶和其他蛋白展示在孢子外表面。枯草芽胞杆菌孢子衣壳由多种衣壳蛋白组成,但可用做载体蛋白的并不多,且它们的特性不同。综合介绍了枯草芽胞杆菌孢子表面展示外源蛋白这种新型技术的具体机理,及其在国内外各领域应用的研究进展。
- 孙腾云田瑞张天喜陈华友
- 关键词：枯草芽胞杆菌孢子
- 嗜热厌氧菌联合生物加工生物质产乙醇的研究
- 纤维素生物质能源已引起各国的重视,大量的人力财力投入到关于木霉酵母及木霉运动发酵单胞菌作用模式进行研究,但是要实现产业化,还面临着很多瓶颈。嗜热厌氧菌联合生物加工生物质产乙醇研究报道较少,然而,这一工艺能在高温下直接分泌...
- 陈华友张金红陆健李萍萍杨胜利
- 关键词：嗜热厌氧菌电转化生物能源
