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重组腺相关病毒介导的HSV—tk／GCV体系对兔晶状体上皮细胞的抑制作用被引量：3: 2009年; 目的探讨2型重组腺相关病毒（rAAV2）载体介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶基因／丙氧鸟苷体系（HSV—tk／GCV）对体外培养兔晶状体上皮细胞（N／N1003A）的抑制作用，以及晶状体上皮细胞死亡的机制。方法实验研究。rAAV2载体介导增强型绿色荧光蛋白基因（EGFP）转染体外培养N／N1003A细胞，倒置荧光显微镜观察细胞中EGFP的表达，流式细胞仪检测病毒的转染效率。重组病毒rAAV2／HSV—tk转染体外培养的N／N1003A细胞为实验组，以没有转染重组病毒的细胞作为对照组，MTT法检测HSV—tk／GCV体系对细胞作用的浓度依赖性、时间依赖性和旁观者效应；相差显微镜、透射电镜、Hoechst33258染色观察细胞凋亡、坏死改变，流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期的变化。不同浓度GCV对两组细胞的作用结果采用两因素析因设计的方差分析；两组细胞周期和凋亡的比较采用两样本t检验。结果rAAV2载体能介导EGFP基因稳定高效转染N／N1003A细胞。GCV对两组细胞的杀伤作用有剂量-效应依赖关系（F=13076．239，P〈0．001）；实验组N／N1003A—tk细胞的存活率低于对照组，差异有统计学意义（F=53947．119，P〈0．001）。实验组GCV的IC50为2mg／L，而对照组IC50为524mg／L。GCV的杀伤效应随时间延长而增强，且存在明显的旁观者效应。N／N1003A-tk细胞在GCV作用下出现明显的细胞凋亡和坏死，细胞的凋亡率7．18％±2．04％，与对照组（3．50％±0．56％）比较差异有统计学意义（t=3．83，P〈0．01）；S期细胞比例明显增加，G0／G1期细胞比例明显减少，与对照组比较差异有统计学意义（S期细胞比例：f=3．55，P〈0．01；G0／G1期细胞比例：t=4．29，P〈0．01）。结论GCV可有效杀伤重组腺相关病毒rAAV2／HSV-tk转染的兔晶状体上皮细胞，并具有较强的旁观者效应。; 丁芝祥谭浅刘双珍杨静李忠庆刘丹胡梅; 关键词：依赖病毒单纯疱疹病毒属胸苷激酶上皮细胞

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杨静

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