张耀丹
- 作品数：8 被引量：4H指数：1
- 供职机构：中国农业科学院上海兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金公益性行业(农业)科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 鸡APOBEC4稳定表达细胞系的建立与应用
- 2022年
- 鸡APOBEC4是最新发现的载脂蛋白B mRNA编辑酶(APOBEC)家族成员,功能尚不明确。由于具有保守的胞苷脱氨酶基序,该家族蛋白能够诱导机体DNA或RNA发生广泛的胞嘧啶脱氨基突变,参与到机体免疫过程中去,在机体先天性免疫与适应性免疫中均发挥重要作用。这种RNA编辑作用亦可诱导病毒基因组突变,产生种类众多的突变株,但由于每种突变在群体中的比例极小,自然状态下会被优势准种掩盖难以检测,因此需要能够稳定表达该蛋白的细胞系作为模型进行研究。本实验室前期结果表明,鸡源APOBEC4主要在免疫细胞中表达,而传染性支气管炎病毒、流感病毒感染能够显著刺激鸡APOBEC4的大幅上调。为研究鸡APOBEC4编辑作用对病毒复制的影响,本研究利用慢病毒包装方法,将鸡源APOBEC4基因导入BHK21细胞,通过Real-time quantitative PCR和Western blot方法进行鉴定,得到能够稳定表达鸡APOBEC4的BHK21细胞系BHK21-APOBEC4,并发现鸡传染性支气管炎病毒(IBV)Beaudette株和禽流感病毒(AIV)H9N2株在该细胞系上的复制较对照组受到显著抑制,为进一步研究APOBEC4的生物学功能奠定基础。
- 石梦雨张耀丹孟春春孙英杰谭磊宋翠萍刘炜玮廖瑛仇旭升丁铲
- 关键词：抗病毒作用
- 鸡源锌指蛋白ZEB1基因解析及其在新城疫病毒感染中的作用研究
- 2017年
- 锌指蛋白ZEB1(zinc finger E-box binding homeobox 1)是一种在不同物种中相对保守的转录因子,尤其在发生肿瘤的组织中具有较高的表达水平。为了证实禽类锌指蛋白ZEB1在新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)感染中的作用,本研究扩增获得了鸡源ZEB1的基因序列,并通过生物信息学软件对不同物种的ZEB1基因进行了同源性比对。通过Real-time PCR技术测定NDV感染DF-1细胞、CEF细胞以及SPF鸡后ZEB1的表达量变化,证实NDV感染可使细胞中的ZEB1含量显著升高。但是在细胞中过表达ZEB1对NDV的增殖和蛋白表达没有明显的影响,其生物学意义有待进一步研究。
- 汪伟张耀丹任亭亭孟春春谭磊孙英杰宋翠萍廖瑛仇旭升丁铲罗廷荣
- 关键词：新城疫病毒锌指蛋白病毒增殖
- 新城疫P蛋白磷酸化位点的质谱分析和功能鉴定被引量：1
- 2019年
- 副黏病毒磷蛋白,即P蛋白(phosphoprotein),富含丝氨酸和苏氨酸,在自然条件下磷酸化水平较高。副黏病毒P蛋白的磷酸化对病毒的转录和复制具有重要的作用,但新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)P蛋白磷酸化位点及其功能依然尚不明确。本研究通过LC-MS/MS质谱对NDV La Sota病毒P蛋白的磷酸化位点进行了检测,鉴定了Ser56、Ser77、Thr78、Thr82、Ser164和Ser141六个磷酸化位点。通过在线分析,预测这些磷酸化位点的磷酸化激酶分别是PKC、CKII和GSK3。为了鉴定6个磷酸化位点的生物学功能,在已建立的表达GFP基因的NDV微型基因组质粒pTVT-LGT基础上,用荧光素酶报告基因(luciferase)替换GFP报告基因,建立了表达荧光素酶的NDV微型基因组系统。利用“丙氨酸扫描”对6个磷酸化位点进行突变后,在NDV微型基因组平台中进行功能鉴定。结果显示,T78、T82和S164位磷酸化位点的缺失显著影响了病毒RNA依赖性RNA聚合酶复合体(RNA dependent RNA polymerase,RdRp)的复制,其生物学意义有待进一步的研究。
- 李继红徐腾飞张耀丹汪伟孟春春孙英杰谭磊宋翠萍廖瑛仇旭升丁铲
- 关键词：新城疫病毒质谱磷酸化位点
- 针对新城疫病毒V蛋白单克隆抗体抗原表位的鉴定
- 李继红仇旭升任亭亭汪伟张耀丹徐腾飞董靖丁铲孙英杰孟春春廖英谭磊宋翠萍
- 针对新城疫病毒Ⅴ蛋白单克隆抗体抗原表位的鉴定
- 引言新城疫病毒(NDV)P基因通过RNA编辑得到V和W非结构蛋白[1].研究表明V蛋白是病毒拮抗干扰素机制以及病毒毒力的关键因素.但是关于V蛋白B细胞抗原表位的研究非常少.本研究通过杂交瘤融合技术成功制备了特异性识别ND...
- 李继红仇旭升任亭亭汪伟张耀丹徐腾飞董靖丁铲孙英杰孟春春廖英谭磊宋翠萍
- 鸡源ADAR2基因克隆及其抗新城疫病毒作用研究被引量：3
- 2017年
- 目前对家禽中双链RNA特异性腺苷脱氨酶(adenosine deaminase acting on double-stranded RNA,ADAR)的种类、组织分布及其功能尚不明了。本研究中以刀豆素、poly I:C以及新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)作为刺激物诱导鸡胚成纤维细胞(chicken embryo fibroblast,CEF)中ADARs基因上调,扩增获得鸡ADAR2基因的mRNA。为了鉴定ADAR2的抗病毒作用,本研究构建了能够偶联有绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的ADAR2重组真核表达质粒,转染DF1细胞,结果显示在过量表达ADAR2的细胞中,NDV的增殖受到了显著抑制,表明ADAR2在NDV感染过程中发挥重要的抗病毒作用,这为进一步研究鸡RNA编辑酶对NDV RNA编辑奠定了基础。
- 张耀丹汪伟李继红刘开春孟春春孙英杰谭磊宋翠萍廖瑛仇旭升丁铲
- 关键词：新城疫病毒RNA编辑抗病毒作用
- 针对新城疫病毒V蛋白单克隆抗体抗原表位的鉴定
- 引言新城疫病毒(NDV) P基因通过RNA编辑得到V和W非结构蛋白。研究表明V蛋白是病毒拮抗干扰素机制以及病毒毒力的关键因素。但是关于V蛋白B细胞抗原表位的研究非常少。本研究通过杂交瘤融合技术成功制备了特异性识别NDV基...
- 李继红仇旭升任亭亭汪伟张耀丹徐腾飞董靖丁铲孙英杰孟春春廖英谭磊宋翠萍
- 文献传递
- 鸡源AID基因的克隆及其抗新城疫病毒作用
- 2019年
- APOBEC家族成员中AID蛋白具有DNA/RNA编辑酶功能,同时具有抑制病毒增殖的作用,但具体机制尚不明了。本研究首先根据NCBI公布的鸡全基因组序列进行生物信息学分析,预测鸡AID的基因序列并通过设计PCR引物,成功在鸡法氏囊cDNA样品中扩增出鸡AID基因(chAID)。通过建立并优化chAID的实时定量RT-PCR(rRT-PCR)检测方法,对鸡体内AID基因的表达以及其分布情况进行检测;同时通过Western blot试验对chAID蛋白在鸡细胞中的表达进行检测。试验显示,chAID基因能够在鸡细胞以及组织脏器中正常表达。新城疫病毒(NDV)感染鸡原代成纤维细胞、淋巴细胞后能够引起内源性chAID基因水平的上调;SPF鸡感染NDV后,chAID基因在不同组织脏器中均出现上调现象,以免疫器官最为显著。为了进一步验证chAID基因对NDV增殖的影响,进一步检测在细胞中过表达chAID基因对NDV增殖的影响。研究结果表明:重组chAID蛋白具有抗NDV病毒活性,本研究为进一步研究鸡chAID奠定了基础。
- 徐腾飞张耀丹李继红汪伟孟春春孙英杰谭磊宋翠萍廖瑛丁铲仇旭升刁有祥
- 关键词：抗病毒作用
