- 克隆筛选纯化在大鼠脂肪源性干细胞原代培养中的作用
- 2011年
- 背景:研究中发现从成体的脂肪组织中可以分离出一种间质干细胞,即脂肪源性干细胞,但传统的分离方法仍存在一些问题需要改进。目的:在脂肪源性干细胞传统的分离方法的基础上进行改进,克隆筛选纯化脂肪源性干细胞。方法:消化离心法分离Lewis大鼠脂肪源性干细胞,有限密度稀释法克隆化及条件培养基筛选,进行原代培养,以克隆筛选的脂肪源性干细胞为实验组,未克隆筛选的脂肪源性干细胞为对照组,观察细胞形态,对比生长曲线、倍增时间,流式细胞仪鉴定脂肪源性干细胞表面标记CD49d、CD29、CD44。结果与结论:经克隆筛选的脂肪源性干细胞与未经克隆筛选的脂肪源性干细胞相比,前者形态均一,生长力旺盛,倍增时间短,多代培养后生长曲线无明显改变,通过流式细胞仪鉴定,实验组与对照组在3～6代之间均表达表面标记CD49d、CD29、CD44。结果证实克隆筛选的纯化方法是脂肪源性干细胞原代培养的有效、经济的纯化方法。
- 刘剑李立冉江华张升宁邵建春
- 关键词：脂肪源性干细胞原代培养流式细胞仪
- 体外诱导脂肪源性干细胞向类肝细胞的定向分化
- 2011年
- 背景:用脂肪源性干细胞治疗肝脏疾病之前,如何建立有效稳定的肝细胞分化诱导方案,纯化并快速扩增性能稳定的类肝细胞等问题亟待解决。目的:建立大鼠脂肪源性干细胞转化为类肝细胞的程序化诱导体系。方法:分离纯化Lewis大鼠脂肪源性干细胞,流式细胞仪鉴定其表面标志,分3个阶段加入含有肝细胞生长因子、成纤维细胞生长因子4、酸性成纤维细胞生长因子、制瘤素M细胞因子的诱导培养体系,使脂肪源性干细胞向肝细胞转化。结果与结论:大鼠脂肪源性干细胞诱导7,14,21d后,细胞阳性表达ALB、AFP、CK18mRNA,表达量随诱导时间延长而增强,类肝细胞具有白蛋白合成功能。氨代谢和尿素的合成功能在9～12d出现并持续存在。结果表明脂肪源性干细胞体外分段诱导可成功转化为类肝细胞。
- 刘剑李立冉江华张升宁邵剑春
- 关键词：脂肪源性干细胞分化类肝细胞
