谢伟群
- 作品数：2 被引量：43H指数：1
- 供职机构：广州中医药大学基础医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人ApoC-Ⅰ基因的克隆、原核表达与纯化
- 2015年
- 【目的】进行含信号肽ApoC-Ⅰ(signal-ApoC-Ⅰ)和ApoC-Ⅰ成熟肽(mature-ApoC-Ⅰ)的基因克隆、原核表达和纯化。【方法】取肝癌切除手术患者的癌旁组织,提取总RNA后,逆转录成c DNA,并设计带酶切位点的特异引物分别扩增出signal-Apo C-Ⅰ、mature-Apo C-Ⅰ基因;将扩增出的基因通过T克隆入PMDTM19-T载体;T克隆经测序验证后,双酶切出目的基因,连入同样双酶切后的PET28a载体,构建原核表达质粒;再次测序验证后,将质粒转入BL21Star(DE3)中,表达条件优化后进行融合表达;将表达后产物用Ni-NTA树脂亲和层析进行重组蛋白纯化;纯化产物采用Western blot进行验证。【结果】构建了PET28a-signal-ApoC-Ⅰ、PET28a-mature-Apo C-Ⅰ表达质粒,重组质粒都经过测序鉴定正确;PET28a-signalApoC-Ⅰ诱导表达后能抑制宿主菌生长,但经过条件优化2个表达质粒都在BL21Star(DE3)菌中经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导大量表达和纯化,Western blot证实了表达的结果。【结论】含信号肽ApoC-Ⅰ、ApoC-Ⅰ成熟肽的基因克隆、原核表达和纯化成功,为进一步研究重组人Apo C-Ⅰ的作用奠定了基础。
- 谢伟群邝枣园孙砚辉张晓圆陈健刘思颖张韧
- 关键词：基因克隆基因表达蛋白纯化
- 黄芩苷对代谢性炎症及肠道菌群的调节作用探讨被引量：43
- 2016年
- 【目的】探讨黄芩苷对高脂血症模型代谢性炎症及肠道菌群的调节作用。【方法】选取32只C57BL/6J雄性小鼠随机平均分为正常组、模型组、黄芩苷高剂量组(剂量为50 mg·kg-1·d-1)、黄芩苷低剂量组(剂量为25 mg·kg-1·d-1)。高脂饲料喂养3周后,2个黄芩苷用药组分别给予不同浓度黄芩苷灌胃5周。采用酶联免疫吸附法检测各组小鼠血清血脂水平以及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)及内毒素水平,采用Miseq平台对小鼠肠道粪便微生物进行基因测序。【结果】与正常组比较,模型组总胆固醇及低密度脂蛋白水平显著升高(P<0.01),高密度脂蛋白水平显著降低(P<0.01),血清TNF-α、IL-6和内毒素水平显著升高(P<0.01);黄芩苷高剂量组的TNF-α、IL-6、内毒素水平均较模型组显著降低(P<0.05或P<0.01),黄芩苷低剂量组内毒素水平亦较模型组显著降低(P<0.01)。测序生物信息学分析发现,在门的水平,模型组脱铁杆菌门和变形杆菌门数目较正常组显著增多,疣微菌门数目较正常组显著减少。在属的水平,模型组Christensenella、uncultured_Peptococcaceae、脱硫弧菌属数目较正常组显著增多,而粪球菌属、Akkermansia及uncultured_Lachnospiraceae数目较正常组显著减少;黄芩苷高、低剂量组脱硫弧菌属丰度均较模型组降低。各组革兰氏阴性菌与革兰氏阳性菌数目之比,模型组较正常组显著升高(P<0.05),黄芩苷低剂量组较模型组显著降低(P<0.05)。【结论】黄芩苷能治疗高脂饮食引起的代谢性炎症,这可能与黄芩苷能调节肠道菌群的结构有关。
- 刘思颖邝枣园张韧谢伟群陈健
- 关键词：黄芩苷肠道菌群革兰氏阴性菌
