胡亮
- 作品数：4 被引量：8H指数：2
- 供职机构：大连海洋大学更多>>
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- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 迟钝爱德华氏菌Ⅲ型分泌系统基因克隆及多重PCR检测方法建立
- 采用PCR法检测了大菱鲆出血性败血症病原菌迟钝爱德华氏菌L-49231菌株TTSS中的esaC、eseB、eseC、eseD、esrA和esrB六种基因,将PCR产物回收后克隆到载体PMD19-T中,并对阳性克隆产物进行...
- 王斌赵凤梅王惠胡亮
- 关键词：迟钝爱德华氏菌克隆多重PCR
- 文献传递
- 仿刺参不同组织液的抗菌活性被引量：5
- 2010年
- 采用平板菌落计数法测定仿刺参Apostichopus japonicus体腔液、体腔液上清液、体腔细胞悬液和体壁内皮组织匀浆液对哈氏弧菌Vibrio harveyi的抑制作用,并对健康仿刺参与感染后仿刺参的体壁内皮组织匀浆液的抑菌作用进行了比较;采用乙醇沉淀、离心等方法从仿刺参体壁内皮组织中粗提得到一种水溶性成分,测定了该成分对哈氏弧菌、白色葡萄球菌Staphylococcus albus和迟钝爱德华氏菌Edwardsiella tarda的抑菌活性,并初步研究了该成分的基本性质。结果表明:仿刺参体壁内皮组织匀浆液对哈氏弧菌的抑制效果显著,体腔液、体腔液上清液、体腔细胞悬液对哈氏弧菌的抑制效果不显著;感染状态下,仿刺参体壁内皮组织匀浆液的抑菌作用与健康状态相比有所降低。提取的水溶性成分对哈氏弧菌、白色葡萄球菌和迟钝爱德华氏菌均有明显的抑制作用;该成分的茚三酮反应呈阳性,其中蛋白质的质量分数为17.48%;该成分经SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分离得到5个蛋白条带,相对分子质量大约为55 300、46 100、34 700、19 500和14 500,初步认为其含有肽类抗菌活性物质。
- 王斌胡亮程振远姜白洁宋坚杨笑谈袁甜
- 关键词：仿刺参抗菌活性
- 迟钝爱德华氏菌Ⅲ型分泌系统效应蛋白功能域预测被引量：2
- 2013年
- 采用PCR法检测了大菱鲆出血性败血症病原菌迟钝爱德华氏菌L-49231菌株Ⅲ型分泌系统中的eseB、eseC、eseD基因,经PCR产物克隆测序;利用生物信息学方法对eseB、eseC、eseD表达蛋白的分子量、氨基酸组成、疏水性、跨膜结构、信号肽等进行初步预测和分析。结果显示,迟钝爱德华氏菌L-49231菌株eseB、eseC、eseD基因分别为:594、934、445bp,与GenBank中登录的迟钝爱德华氏菌PPD FL6-60菌株的eseB、eseC、eseD基因碱基序列的同源性分别为100%、100%、99%。eseB蛋白分子量为21 732.26u,天冬氨酸含量最高,占10.61%;eseC蛋白分子量为53 606.08u,丙氨酸含量最高,占14.43%;eseD蛋白的分子量为21 112.43u,谷氨酰胺含量最高,占11.04%。3种蛋白质中甘氨酸、丙氨酸、亮氨酸含量都很高,而半胱氨酸、色氨酸含量都很低或缺少。3种蛋白均为亲水性蛋白质。eseB无明显的跨膜结构;eseC在192～210aa、213～233aa、263～284aa处形成3个跨膜区域;eseD在90～106aa处形成一个跨膜区域。3种蛋白均不含信号肽。
- 王斌李军伟赵凤梅王惠胡亮姜志强
- 关键词：迟钝爱德华氏菌克隆生物信息
- 迟钝爱德华氏菌Ⅲ型分泌系统基因的克隆及多重PCR检测方法的建立被引量：2
- 2013年
- 采用PCR法扩增大菱鲆Scophthalmus maximus出血性败血症病原菌迟钝爱德华氏菌Edwardsiella tardaL-49231菌株Ⅲ型分泌系统(TTSS)的装置蛋白(esaC)、效应蛋白(eseB、eseC、eseD)和调节蛋白(esrA、esrB)6种基因,并将其克隆到载体PMD19-T中分别进行测序;通过优化反应条件,建立一次检出效应蛋白eseB、eseC和eseD 3种基因片段的多重PCR方法;采用所建立的多重PCR方法检测迟钝爱德华氏菌不同菌株(L-49231、GhAn080310、GhAn080313和GhAn080314)、沙门氏菌Salmonella enterica、大肠杆菌Escherichia coli和肠杆菌Enterobacter中效应蛋白基因的存在情况。结果表明:L-49231菌株中存在esaC、eseB、eseC、eseD、esrA和esrB 6种基因片段,大小分别为837、184、934、445、464、458 bp,与GenBank中迟钝爱德华氏菌PPD130/91菌株的这6种基因的同源性分别为99%、97%、99%、99%、99%、98%;通过优化反应条件,在退火温度为54℃,基因eseB、eseC和eseD引物浓度(μmol/L)组合比为5∶10∶2,Mg2+浓度为1.5 mmol/L时,能够得到清晰、稳定且均一的多重PCR产物,并与目的条带分子量一致;采用所建立的多重PCR方法进行检测,迟钝爱德华氏菌L-49231菌株中存在eseB、eseC和eseD 3种基因片段,迟钝爱德华氏菌GhAn080310、GhAn080313、GhAn080314菌株中存在eseB和eseC基因片段,但未检出eseD基因片段;沙门氏菌、大肠杆菌和肠杆菌中均未检出eseB、eseC和eseD基因。表明所建立的多重PCR方法对迟钝爱德华氏菌具有较好的特异性,可检出具有Ⅲ型分泌系统效应蛋白的菌株。
- 王斌赵凤梅李军伟沈皓王惠胡亮
- 关键词：迟钝爱德华氏菌克隆多重PCR
