刘晓林
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
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- 人肌红蛋白原核表达载体的构建、表达及蛋白纯化
- 2007年
- 目的:构建人肌红蛋白(Mb)原核表达载体并诱导其表达、纯化及鉴定目的蛋白。pQE方法:根据已报道的人Mb基因序列,采用RT-PCR技术从人骨骼肌组织中获得肌红蛋白cDNA序列。将所得的PCR产物插入克隆载体pGEM-Teasy中,得重组质粒,经酶切、PCR及测序鉴定正确后,将酶切目的片段插入原核表达载体pQpQEE30中并转化大肠杆菌(E.coli)M15,通过IPTG诱导表达出带有6个组氨酸的融合蛋白。经镍固定金属亲和层析纯化。结果:序列分析表明,人Mb基因成熟肽编码区含有465 bp,编码153个氨基酸;与GenBank(NM203378)中已报道的Mb核苷酸序列有98.50%同源性。经IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳和免疫印迹分析显示,表达的融合蛋白占菌体蛋白总量的31%,相对分子质量约为16700,并与商品化的人Mb单抗呈特异性反应。经Ni2+-NTA agarose纯化获得SDS-PAGE电泳下单一条带。结论:在大肠杆菌中获得了人Mb的高效表达。
- 车媛媛许淑芬方艳秋段秀梅史宏博刘晓林刘力华候巍谭岩
- 关键词：肌红蛋白基因表达大肠杆菌
