蔡行
- 作品数：10 被引量：10H指数：2
- 供职机构：长江大学动物科学学院更多>>
- 发文基金：湖北省农业科技创新中心资助项目国家自然科学基金国家重点实验室开放基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学文化科学更多>>
- 猪肺炎支原体脂蛋白LppB的克隆表达及其编码氨基酸的生物学分析被引量：1
- 2017年
- 本研究旨在获得猪肺炎支原体脂蛋白LppB的表达产物,分析其编码氨基酸的生物学特性,为进一步研究脂蛋白LppB的功能奠定基础。试验构建重组表达质粒pET30a-LppB,通过快速定点突变试剂盒将LppB基因中1 068,1 353,1 578nt处的A突变为G,使改造后的LppB基因能在大肠杆菌系统中正确表达,IPTG诱导重组蛋白的表达并进行蛋白纯化。SDS-PAGE分析结果显示,IPTG诱导表达后获得一条特异性蛋白条带,相对分子质量约为70 000,与预期蛋白大小一致。可溶性分析结果表明目的蛋白主要以可溶的形式表达于上清中;Western blot鉴定结果表明纯化的蛋白能与抗6×His标签的单抗发生特异性反应。采用DNAStar Protean模块对脂蛋白LppB进行了二级结构、蛋白质骨架柔性区域、抗原指数的预测,并确定了B细胞抗原优势表位的可能分布。
- 刘威袁芳艳周丹娜刘泽文杨克礼段正赢郭锐蔡行刘保亮吴修竹肖少波田永祥
- 关键词：猪肺炎支原体脂蛋白
- 五种中草药杀灭钉螺与血吸虫毛蚴的比较研究
- 2014年
- 为了了解中草药植物对血吸虫中间宿主及其幼虫的影响,试验比较了阿魏、羊蹄、毛茛、苦楝子、田皂角这5种中草药的不同浓度浸煮液对钉螺及血吸虫毛蚴的杀灭作用。结果表明:这5种中草药浸煮液均有杀灭钉螺及血吸虫毛蚴的作用,其中阿魏杀灭钉螺效果极显著(P<0.01),羊蹄杀灭钉螺效果显著(P<0.05),且对水生生物影响不大。说明中草药阿魏与羊蹄均可以作为钉螺与血吸虫毛蚴的抑制剂。
- 魏强强苏加义王洁蔡行
- 关键词：中草药钉螺日本血吸虫毛蚴中间宿主
- 乙型脑炎病毒非结构蛋白1单克隆抗体的制备
- 2014年
- 日本乙型脑炎(JE)是由乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)引起的蚊媒性人畜共患病,造成人畜中枢神经系统损害,威胁人畜健康。JEV的非结构蛋白1(Nonstructural protein 1,NS1)是其重要的非结构蛋白,一方面可以诱导机体产生保护性免疫,另一方面参与病毒复制等多种生物学过程。试验采用化学融合法获得分泌乙型脑炎NS1蛋白单克隆抗体(Mc Ab)的杂交瘤细胞系5D5,经检测获得的杂交瘤细胞系平均染色体数目约为90条,分泌的单抗为Ig G1亚型,细胞上清效价为27。接种小鼠后,收取腹水,经辛酸-硫酸铵法进行纯化后,测得腹水效价为105。Western blot鉴定结果表明所制备单抗能够与JEV NS1蛋白特异性结合,具有良好的免疫反应性,可为JE诊断方法的建立以及NS1蛋白生物学功能的研究提供物质基础。
- 周丹娜夏菲段正赢刘学郭锐杨克礼袁芳艳刘泽文孟丽蔡行田永祥
- 关键词：日本乙型脑炎单克隆抗体
- 猪肺炎支原体脂蛋白LppT的多克隆抗体制备及鉴定被引量：2
- 2017年
- 试验构建猪肺炎支原体重组表达质粒pET30a-LppT,通过快速定点突变试剂盒将LppT基因中513、945、1 860、2 547 bp处的A突变为G,使改造后的LppT基因能在大肠杆菌系统中正确表达,IPTG诱导重组蛋白的表达并进行了蛋白纯化,纯化的目的蛋白与佐剂混合、乳化制备免疫原,免疫新西兰大白兔制备LppT蛋白多克隆抗体。SDS-PAGE分析结果显示,IPTG诱导表达后获得1条特异性蛋白条带,分子质量约为110 ku,与预期蛋白大小一致。可溶性分析结果表明目的蛋白以可溶形式表达于上清中,纯化的蛋白经SDS-PAGE分离后,用制备的LppT多克隆抗体进行Western Blot检测,结果表明制备的LppT多克隆抗体具有较强的特异性。
- 刘威袁芳艳周丹娜刘泽文杨克礼段正赢郭锐蔡行肖少波田永祥
- 关键词：猪肺炎支原体脂蛋白多克隆抗体
- 日本乙型脑炎病毒NS3蛋白的真核表达及鉴定被引量：1
- 2019年
- 为了探讨日本乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)的复制机制及其蛋白与宿主蛋白的相互作用关系,试验以GenBank中收录的JEV HW1株NS3基因序列为模板设计引物,经PCR扩增获得NS3基因序列后,采用ClonExpress克隆技术将NS3基因连接到真核表达载体p EGFP-C3上,将得到的产物pEGFP-C3-NS3送生工生物工程(上海)股份有限公司测序;使用X-tremeGENE HP DNA Transfection Reagent体外转染幼地鼠肾细胞(BHK21细胞),观察24 h后应用Western-blot和IFA法进行鉴定。结果表明:PCR克隆获得的基因片段大小约为1 370 bp,NS3基因片段与HW1株同源性为100%;BHK21细胞密度在70%~80%时质粒转染效果最佳,质粒质量与转染试剂体积的比例为1∶3;Western-blot鉴定融合蛋白成功表达,分子质量约为79 ku;IFA鉴定融合蛋白成功表达,24 h为转染高峰期,绿色荧光最强,pEGFP-C3-NS3与NS3阳性血清反应显红色荧光。说明在BHK21细胞中成功表达出NS3蛋白。
- 王双双赵红梅周丹娜蔡行耿超
- 关键词：日本乙型脑炎病毒真核表达转染IFAWESTERN-BLOT
- 日本乙型脑炎病毒NS5rdrp蛋白的真核表达及鉴定
- 2019年
- 为了探究日本乙型脑炎病毒( Japanese encephalitis virus,JEV)的复制机理和研制以 JEV 复制复合体为靶标的药物,试验以 GenBank 中收录的 JEV HW1 株基因序列为模板,设计针对 NS5rdrp 的特异性引物,提取 JEV RNA,反转录得到 cDNA,以其为模板使用 PCR方法克隆得到 NS5rdrp 基因片段;利用 T4DNA 连接酶构建重组质粒 pcDNA3. 1-NS5rdrp,并对产物测序;提取去除内毒素的重组质粒,用转染试剂 X-tremeGENE HP DNA Transfection Reagent 转染 BHK21 细胞,转染 24 h 后观察结果;最后利用 Western-blot 技术检测 NS5rarp 蛋白的表达情况。结果表明: PCR扩增得到大小约为920 bp的 NS5rdrp 基因片段;测序结果经 NCBI 上 BLAST 比对分析,克隆得到的 NS5rdrp 基因与 HW1 株的同源性为 100%;转染时细胞的最佳密度区间为 70%~ 80%,转染试剂与转染质粒的比例为 3 ∶ 1;经过Western-blot 检测,重组质粒在细胞内正常表达,NS5rdrp 蛋白的分子质量约为 37 ku。说明试验通过真核表达成功获得 NS5rdrp 蛋白。
- 耿超赵红梅周丹娜蔡行王双双
- 关键词：日本乙型脑炎病毒蛋白真核表达聚合酶链式反应细胞免疫印迹分析
- 动物科学与动物医学基础课程实验教学的改革被引量：1
- 2014年
- 动物科学与动物医学以往的动物生理学、动物病理生理学、动物药理学、动物毒理学等以传授知识为主,实验教学附属于理论教学,实验内容侧重于演示现象、验证理论,忽视了能力与素质的培养。
- 刘利赵红梅王洁蔡行纪美静黄帅
- 关键词：动物科学动物医学实验教学
- 猪流行性腹泻病毒湖北株的分离鉴定及其s1基因进化分析被引量：4
- 2016年
- 猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）是猪的肠道传染病病原,主要引起仔猪呕吐、腹泻和脱水,对一周龄内的哺乳仔猪危害最为严重,死亡率可达50%～100%。利用Vero86细胞从湖北某猪场腹泻仔猪小肠病料中分离到一株病毒,经RT-PCR检测、序列比对后确定其为PEDV,命名为HB201503株。设计PEDV s1基因的全长扩增引物,获得该株病毒的s1基因全长序列并进行了进化分析,结果表明该毒株与近年来在Gen Bank登陆的PEDV s1基因核苷酸序列相似性在91.4%～99.2%,与疫苗株CV777相似性较低,仅为91.8%。通过s1基因进化树分析表明HB201503以及近几年国内分离毒株主要集中在第I个亚群,且HB201503株与KM406183（2014,四川）和KM609206（2015,江苏）同源性较高。此外,s1蛋白氨基酸序列比对显示,HB201503与近几年分离毒株及疫苗株CV777均在55-74、157-163位氨基酸出现了连续4个以上氨基酸的缺失或替换,而且HB201503株与CV777及近几年分离毒株相比,还在270-283位氨基酸上出现了1个氨基酸的缺失和10个氨基酸的替换。
- 桂锐郭锐田永祥李文浩蔡行段正赢杨克礼刘泽文袁芳艳刘威邢崔昱周丹娜
- 关键词：EPIDEMICDIARRHEAS1基因进化分析
- 猪链球菌的分离鉴定及药敏试验被引量：1
- 2016年
- 为了鉴定导致湖北省某养猪场猪只急性死亡的致病菌,并控制该猪场病情,试验采用PCR方法对菌株进行鉴定与分型,再对分离菌进行药敏试验和致病性试验。结果表明:该病原菌为非1,2,7,9型的其他型猪链球菌,具有致病性,可导致小鼠死亡;该病原菌对头孢菌素、青霉素、氨苄西林、氯霉素、利福平、万古霉素、阿莫西林、氧氟沙星、左氧氟沙星等高度敏感,对环丙沙星、恩诺沙星、复方新诺明、四环素中度敏感,对丁胺卡那霉素、多黏霉素B、磺胺甲基异唑、林可霉素等具有较强的耐药性。说明该猪场致病菌为猪链球菌,且可使用头孢菌素和青霉素等药物进行治疗。
- 程尧李助南郭咪咪蔡行田永祥袁芳艳刘泽文刘威谭永强
- 关键词：猪链球菌聚合酶链式反应药敏试验致病力试验耐药性
- 日本脑炎病毒NS3蛋白多克隆抗体的制备
- 2016年
- 日本脑炎(JE)是由日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)引起的一种中枢神经系统疾病。该病可以感染人和多种动物,并造成不可逆的神经损害。NS3蛋白在JEV多聚蛋白水解过程中起着重要的作用,是日本脑炎病毒复制所必需的。因此,NS3蛋白可能成为治疗日本脑炎的潜在药物靶标。研究成功构建了p ET-28a-NS3质粒,并在IPTG诱导下被大肠杆菌BL21(DE3)成功表达,表达的重组蛋白分子量为55 ku,与预测分子量相符;用NS3蛋白免疫BALB/c小鼠,制备阳性血清,经间接免疫荧光法(IFA)鉴定。结果表明:制备的NS3蛋白阳性血清可与感染JEV病毒的细胞产生荧光反应。
- 蔡行赵红梅周丹娜
- 关键词：非结构蛋白NS3多克隆抗体免疫印迹分析
