徐丽
- 作品数：37 被引量：72H指数：5
- 供职机构：贵州大学动物科学学院更多>>
- 发文基金：贵州省科学技术基金国家自然科学基金博士科研启动基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白2分段真核表达及其细胞定位分析
- 2019年
- 为探讨非结构蛋白2(non-structural protein 2,NSP2)在猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)复制过程中的作用及机制,本研究构建真核重组质粒pcDNA 3.1-5'Flag-NSP2-147-323,并瞬时转染至HEK 293T中,同时设置完整NSP2基因序列重组质粒作为对照,转染48 h后分别用不同的抗体进行间接免疫荧光监测。结果显示,转染对照组中细胞核周围可见特异性荧光,而转染真核重组质粒pcDNA 3.1-5'Flag-NSP2-147-323后,不仅在细胞核周围,在细胞核内也可以观察到特异性荧光。本研究成功构建真核重组质粒pcDNA 3.1-5'Flag-NSP2-147-323,并可在HEK 293T细胞中正确表达,为进一步研究NSP2在PRRSV复制过程中的作用提供依据和基础。
- 徐丽温贵兰温贵兰张升波李昌红林汉卿李昌红田浪
- 关键词：转染
- 从江香猪源干扰素γ植物表达载体构建及在生菜中瞬时表达
- 2019年
- 为构建从江香猪源干扰素γ(IFNγ)植物表达载体,通过农杆菌真空渗透法在新鲜生菜中实现瞬时表达。参考GenBank登录的猪IFNγ基因序列设计1对特异性IFNγ引物,采用RT-PCR方法从贵州从江香猪源肝脏组织扩增IFNγ基因序列,将其克隆至植物表达载体PBI121,转化根癌农杆菌LBA4404,筛选阳性菌株提取质粒,对重组质粒进行PCR扩增、双酶切及测序鉴定;携带重组质粒根癌农杆菌真空渗透法感染生菜,GUS染色检测感染的生菜叶片,ELISA检测感染生菜叶片中从江香猪源IFNγ蛋白,分析重组质粒在生菜中表达效果;采用细胞病变抑制实验检测生菜中从江香猪源IFNγ蛋白抗病毒活性。结果表明:本研究成功地从贵州从江香猪源肝脏组织扩增获得IFNγ基因序列并构建了从江香猪源IFNγ植物表达载体PBI121-IFNγ;GUS染色感染的生菜叶片可见蓝色物质;ELISA检测感染生菜叶片中从江香猪源IFNγ蛋白含量为169.397、170.657、170.37 pg/mL;生菜中表达从江香猪源IFNγ经4^-6稀释在Marc145细胞上仍能够抑制100 TCID50的PRRSV的致细胞病变作用。本实验成功构建从江香猪源IFNγ植物表达载体PBI121-IFNγ,生菜中瞬时表达蛋白具有免疫反应性和抗病毒活性,为从江香猪源IFNγ药用植物蛋白的研究开发提供参考依据。
- 田浪温贵兰张升波杨佰启李昌红李昌红陈广徐丽
- 关键词：植物表达载体生菜抗病毒活性
- 贵州某鸡场一株卡氏杆菌的分离与16S rDNA基因的分析鉴定
- 引言禽卡氏杆菌病是由卡氏杆菌引起的危害蛋鸡鸡群重要的传染病之一,临床上常以输卵管囊肿和卵巢炎等为主要特征。1950年,Hansen首次发现卡氏杆菌,1960年被定为溶血性巴氏杆菌,Christensen等2003年以该细...
- 张升波温贵兰陈绍品管国丹林汉卿李昌红徐丽
- 文献传递
- 从江香猪IFN-β基因的序列分析及原核表达被引量：6
- 2019年
- 试验旨在探明从江香猪β-干扰素(interferon-beta,IFN-β)基因编码区分子序列及原核表达产物特征。以从江香猪为研究对象,提取肝脏总RNA并反转录为cDNA,设计特异性引物扩增IFN-β基因编码区,将目的基因片段克隆至原核表达质粒pET-28a上,获得重组质粒pET28a-CJpoIFN-β,并利用生物学软件对江香猪IFN-β基因编码区进行序列分析;将鉴定正确的重组质粒pET28a-CJpoIFN-β转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达、SDS-PAGE与Western blotting分析原核表达蛋白。结果表明,从江香猪IFN-β基因编码区长为561bp,编码186个氨基酸;该蛋白为分泌性蛋白,前21个氨基酸为信号肽序列;二级结构主要以α-螺旋(77.42%)和无规则卷曲(17.74%)为主。从江香猪与其他猪源IFN-β基因核苷酸序列同源性为99.5%～100.0%,与禽的同源性最低(35.2%);从江香猪与巴马猪、梅山猪IFN-β氨基酸同源性均为100.0%,但与贵州白香猪IFN-β同源性为99.5%,存在E43Q、K73R和C161R3处氨基酸的差异。Western blotting结果显示,带His标签的重组表达蛋白能被His单抗识别,条带大小约为24ku。本试验结果为进一步研究IFN-β基因生物学活性及加快从江香猪这一品种资源的有效利用提供参考依据。
- 温贵兰张升波李昌红徐丽田浪文明王开功程振涛赵德刚
- 关键词：从江香猪原核表达
- 从江香猪EDC3基因的克隆及其在不同组织中表达的分析被引量：2
- 2018年
- 为获得从江香猪源m RNA脱帽增强因子3 (EDC3)基因编码区序列,并分析其在从江香猪器官组织和淋巴组织中的表达情况,本研究利用套式PCR扩增获得EDC3全基因序列,对其进行测序分析;同时建立荧光定量PCR(qPCR)方法,分析EDC3在组织中的表达情况。结果显示,从江香猪源EDC3基因全长1 404 bp,编码468 aa。不同物种间EDC3基因核苷酸序列和推导氨基酸序列具有较高的保守性,该蛋白中存在丰富的磷酸化位点,空间结构以无规则卷曲和α-螺旋为主。q PCR结果显示,EDC3基因在从江香猪不同器官组织及淋巴组织中均有分布且有不同程度的表达,在淋巴组织表达量最高,肺脏中表达量最低。综上,本研究首次克隆出猪源EDC3基因,且与预测野猪EDC3基因编码区序列相比缺失123 bp,在第100、473、819、1252位出现了单个碱基置换;其在不同组织中广泛分布。研究结果为进一步探究哺乳动物源EDC3的作用机制奠定基础。
- 李昌红温贵兰温贵兰徐丽林汉卿徐丽杨佰启林汉卿汪德生
- 关键词：从江香猪克隆
- 稳定表达猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP_2细胞株的建立及其对p65核转位影响的研究被引量：1
- 2018年
- 为建立一株稳定表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)非结构蛋白2(NSP_2)的细胞株,本研究通过脂质体2000介导的方法将携带有PRRSV NSP_2基因序列的真核表达载体(pcDNA3.1-5'Flag-Nsp_2)瞬时转染于HEK293细胞,应用G418筛选、间接免疫荧光(IFA)与western blot方法进行鉴定,获得了1株稳定表达NSP_2的阳性细胞株,命名为NSP_2-11C1-HEK293;将TNF-α作用于该细胞株,采用IFA分析稳转细胞内NSP_2对p65入核的影响。IFA结果显示NSP_2主要在细胞浆中围绕细胞核表达,在细胞中的表达率达95%以上;western blot结果显示出现120 ku的蛋白条带,与预期相符。结果表明本研究获得了一株稳定表达NSP_2的阳性细胞株,在该稳转细胞内NSP_2对p65的入核并没有影响,这为进一步研究揭示PRRSV的致病机理奠定基础。
- 温贵兰张升波李昌红徐丽
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒
- 从江香猪源切除信号肽β干扰素原核载体的构建
- 2018年
- β干扰素(IFN-β)具有重要的抗病毒生物学功能,为了研究从江香猪源IFN-β生物活性,试验设计1对扩增切除信号肽序列的香猪源IFN-β编码区引物,以pUCm-T-IFN-β为模板进行PCR扩增,经菌液PCR筛选、测序鉴定后,获得重组质粒pColdⅠ-CJ-poIFN-β,将其转入大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞中,IPTG诱导表达后用SDS-PAGE蛋白电泳,Western blot方法对重组表达蛋白进行分析。结果:切除信号肽序列的从江香猪源IFN-β序列编码区长为498 bp,表明该片段已正确插入原核表达质粒pColdⅠ中;SDS-PAGE蛋白电泳在预期位置未见蛋白条带,但Western blot检测显示带His标签的重组表达蛋白能被His单抗识别,显色后条带为18.26 ku,与预期大小相符。结果显示:试验成功构建了携带切除信号肽序列的香猪源IFN-β基因的原核表达质粒,但重组蛋白表达量极低,试验结果为进一步研究从江香猪源-β干扰素的生物活性奠定基础。
- 温贵兰陈绍品张升波李昌红徐丽田浪文明王开功程振涛赵德刚
- 关键词：从江香猪Β干扰素信号肽原核表达
- 2017年贵阳市犬、猫、猪弓形虫感染情况调查研究被引量：2
- 2018年
- 为掌握贵阳市犬、猫、猪弓形虫感染情况,2017年从贵阳市不同地区收集犬血清34份,猫血清32份,猪血清24份,采用间接ELISA试验对弓形虫Ig G抗体进行检测,然后对ELISA检测阳性样本进行表面抗原SAG1基因PCR扩增。结果:90份血清样本中,总体阳性率为22.22%(20/90),其中犬血清阳性率为11.76%(4/34),猫血清阳性率为21.88%(7/32),猪血清阳性率为37.50%(9/24);PCR未检出弓形虫表面抗原SAG1基因。
- 徐丽袁俊温贵兰温贵兰谢晓东何涛潘永陈国权
- 关键词：弓形虫阳性率
- 黄颡鱼源拟态弧菌的分离鉴定被引量：5
- 2020年
- 采用病理剖检、分离培养、染色镜检、生化试验和16S rRNA基因序列分析等方法对分离菌株进行鉴定,结果显示该分离菌的培养特性、菌落形特征、生理生化特征均与拟态弧菌相同;药敏试验结果表明,该分离菌对链霉素、罗红霉素、丁胺卡那、氧氟沙星高度敏感,对多黏菌素敏感,对青霉素、氟苯尼考、头孢曲松、强力霉素耐药;16S rRNA基因序列同源性分析结果显示,该分离菌与弧菌科弧菌属的同源性为92.8%~99.9%,其中与中国分离的2株拟态弧菌的同源性最高(99.9%)。遗传进化树结果表明,分离株与霍乱弧菌、易北河弧菌、溶藻弧菌、拟态弧菌等自成一个分支,其中在这分支下与中国分离的拟态弧菌SCCF04(KC503059.1)、拟态弧菌XQ(KJ604709.1)单独另成一个小分支。从黄颡鱼中分离出1株拟态弧菌,并将命名为201811,试验结果可为黄颡鱼拟态弧菌病的防控提供参考。
- 陈彦希杨佰启温贵兰田浪张升波徐丽李昌红龚新勇汪德生文明程振涛
- 关键词：拟态弧菌黄颡鱼RRNA基因
- 鸡源巴氏杆菌GZ-TZ2017株的分离及其16S rRNA序列分析被引量：1
- 2019年
- 为了探明贵州某肉鸡养殖场突发疾病病因,试验通过解剖、细菌分离、染色镜检、药敏试验、生化试验、16S rRNA的PCR扩增及序列分析等方法对病原进行分析。结果表明:从病鸡内脏中分离得到1株革兰氏阴性、两极浓染的球杆菌,将其命名为GZ-TZ2017;该菌株的培养特性、菌体形态、生化试验特征均与已报道的巴氏杆菌相似;GZ-TZ2017菌株对米诺环素、氧氟沙星和诺氟沙星等抗生素较为敏感,对头孢拉啶、苯唑西林、卡那霉素、青霉素等抗生素耐药;16S rRNA PCR扩增得到大小为1 400 bp左右的目的片段,分离菌GZ-TZ2017与各地分离的多杀性巴氏杆菌的同源性极高,均在99.0%以上;GZ-TZ2017与多杀性巴氏杆菌属细菌属于一个分支,和重庆分离株PM-LK(GenBank登录号为KX579746)、安徽滁州分离株CZ-6(GenBank登录号为KY673151)在同一小分支上,属于禽巴氏杆菌。说明该肉鸡场鸡群感染了禽巴氏杆菌。
- 李昌红温贵兰温贵兰林汉卿徐丽林汉卿管国丹徐丽嵇辛勤文明周碧君汪德生
- 关键词：多杀性巴氏杆菌耐药性RRNA
