宋红勇
- 作品数：5 被引量：9H指数：2
- 供职机构：南京大学医学院公共健康医学中心更多>>
- 发文基金：国际科技合作与交流专项项目国家自然科学基金江苏省产学研联合创新资金项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 中国HIV-1B'亚型流行株gp120蛋白的表达与纯化被引量：1
- 2013年
- 目的:表达纯化中国HIV-1 B'亚型流行株gp120蛋白。方法:将gp120基因克隆至真核表达载体pTriEx-3 hygro,构建真核表达质粒pTriEx-3-gp120,转染CHO-K1细胞,96 h后收取上清,利用金属螯合层析的方法纯化该重组蛋白,并通过SDS-PAGE以及Western blotting验证重组蛋白的表达。结果:酶切及测序结果表明真核质粒表达构建正确,表达的重组蛋白可以被His标签抗体以及HIV-1阳性血清所识别,并从细胞转染上清中成功纯化了该蛋白。结论:我们成功构建了一个可用于免疫检测、疫苗设计以及其它相关研究的HIV-1免疫原。
- 楚鹰宋红勇吴稚伟
- 关键词：HIV-1GP120蛋白表达纯化
- 人CCR5基因真核表达质粒的构建及其鉴定被引量：1
- 2012年
- 目的:构建人CCR5基因的真核表达质粒并对其进行功能鉴定。方法:PCR扩增人CCR5基因,将其克隆入真核表达载体pcDNA3.1内,构建含人CCR5基因的真核表达质粒pcDNA3.1-CCR5。使用RT-PCR、流式细胞术和HIV假病毒感染实验的方法,鉴定CCR5在真核细胞中的表达和功能。结果:克隆的人CCR5基因与GenBank中已登记的基因序列100%同源。瞬时转染真核细胞后,RT-PCR在预期的位置检测出目的条带,流式细胞术检测到约25.6%的细胞表达CCR5蛋白,且该蛋白能介导HIV假病毒的感染。结论:成功构建了含人CCR5基因的真核表达质粒。
- 程林宋红勇吴喜林吴稚伟
- 关键词：CCR5基因质粒真核表达人类免疫缺陷病毒
- mTSLP-V1/V2融合蛋白的真核表达与鉴定被引量：1
- 2014年
- 目的:将鼠胸腺基质淋巴细胞生成素(mouse thymic stromal lymphopoietin,mTSLP)与人免疫缺陷病毒1型(human immunodeficiency virus type 1,HIV-1)B亚型分离株BAL的gp120 V1/V2结构域在293F真核细胞表达体系中进行融合表达。方法:以真核表达质粒pCEP-Pu为载体,构建mTSLP与gp120BALV1V2融合基因的重组蛋白表达质粒pCTV1V2BAL。限制性酶切电泳与测序验证质粒构建正确后,使用PEI瞬时转染293F悬浮细胞,表达产物以SDS-PAGE与Western blot进行分析,并对纯化后重组蛋白的V1/V2抗原表位进行了ELISA分析。结果:SDS-PAGE、Western blot分析显示,在表观分子量35 kD至55 kD的范围内存在一条不均一的糖蛋白条带,并且能与抗mTSLP多克隆抗体和抗His标签单克隆抗体发生反应。HIV-1阳性病人血清能够识别mTSLP-V1/V2BAL上的HIV-1V1/V2抗原表位。结论:在293F中成功表达了mTSLP-V1/V2BAL融合蛋白,该蛋白具有HIV-1gp120BALV1/V2区的抗原表位,能够用于HIV-1 gp120 V1/V2亚单位疫苗的研究。
- 楚鹰王亭亭芮昱文宋思维苏艾荣程林宋红勇郑大同吴稚伟
- 关键词：人免疫缺陷病毒1型融合蛋白
- HIV-1 CRF01_AE重组型gp120 V1/V2结构域单克隆抗体的制备与鉴定被引量：4
- 2017年
- 目的真核表达人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)CRF01_AE重组型gp120蛋白的V1/V2结构域,制备其单克隆抗体并鉴定其抗原反应性。方法构建pTriEx-3-V1/V2CNE55真核表达载体,在HEK293F细胞中表达V1/V2-His融合蛋白,纯化后作为抗原免疫BALB/c小鼠,取免疫后的小鼠脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合,ELISA筛选分泌抗V1/V2重组蛋白单克隆抗体的阳性杂交瘤,对单克隆抗体的特异性、型别以及效价进行鉴定。结果制备并获得一株稳定分泌抗HIV-1 AE亚型V1/V2结构域单克隆抗体的杂交瘤细胞株,ELISA测定腹水效价高达1∶81 000,单克隆抗体类型属于IgG1/κ型。Western blot结果表明该单克隆抗体同样能够识别不同亚型的HIV gp120蛋白。结论成功制备出抗HIV-1 AE重组型gp120蛋白V1/V2结构域的单克隆抗体。
- 楚鹰宫祥丹高建伟苏艾荣陈德燕宋红勇吴喜林吴稚伟
- 关键词：单克隆抗体
- HIV-1膜蛋白GP120V1/V2区域的真核表达、纯化和鉴定被引量：3
- 2012年
- 目的:真核表达北美HIV-1分离株BAL和中国分离株CNE1两种毒株的V1V2,并纯化、鉴定其生物活性,为血清学分析鉴别HIV-1感染病人抗体反应及性质提供实验基础。方法:本研究将HIV-1北美分离株BAL和中国分离株CNE1两种毒株的V1V2基因序列定向克隆到多系统表达载体pTriEx-3 Hygro vector(Merck&Co.,Inc.)中,构建了表达质粒,并将表达质粒瞬时转染293T细胞,144小时后收获上清液,经浓缩、纯化后,SDS-PAGE电泳,Western blot检测蛋白的表达,ELISA检测其与HIV-1阳性病人血清的反应性。结果:经SDS-PAGE电泳、Western blot、ELISA方法证实确实得到了有免疫反应活性的V1V2蛋白,从表观分子量判断,表达的V1V2蛋白被糖基化修饰。使用V1V2蛋白作为抗原,分析发现中国HIV-1阳性病人体内比较广泛的存在着V1V2的抗体,为血清学的分析奠定了实验基础。
- 宋红勇楚鹰吴稚伟
- 关键词：HIV-1真核表达
