本研究采用16S r DNA PCR-RFLP、IGS PCR-RFLP和16S r DNA基因测序和系统发育分析等分子鉴定方法,对分离的汝州白三叶草共生根瘤菌进行了多样性研究。结果表明,21株供试菌株仅产生了一种16S r DNA酶切图谱组合类型,通过IGS PCR-RFLP又把所有的供试菌株分为了6种酶切图谱类型。经过对代表菌株的16S r DNA基因测序及系统发育分析,6个代表菌株之间具有99.9%~100%的相似性,且供试菌株与根瘤菌属的已知种群Rhizobium anhuiense和Rhizobium leguminosarum等也具有99.9%~100%的相似性,因此,分离自汝州的白三叶草根瘤菌属于根瘤菌属(Rhizobium)。
为了获取更多的野生酵母优质菌种资源,本研究采用传统的微生物分离手段,从河南辉县太行山区的野生葡萄表皮共分离纯化得到6株酵母菌(W1—W6)。首先采用形态学观察方法对其进行初步分类,然后采用26S r DNA D1/D2区域序列系统发育分析,对6株酵母菌进行分子生物学鉴定。形态学初步鉴定结果表明,6株酵母菌呈现出菌落形态、细胞显微形态、子囊孢子形态和液体生长特征的多样性,并初步归为5个形态学群;而26S r DNA D1/D2区序列分析结果表明,6株供试菌分别属于酵母菌4个属的5个种:Hanseniaspora uvarum(W1)、Metschnikowia pulcherrima(W2)、Metschnikowia fructicola(W3)、Debaryomyces hansenii(W4和W6)和Pichia fermentans(W5)。该结果与形态学鉴定结果一致,共同确定了对6株酵母菌菌株的鉴定结果。该结果也丰富了对野生山葡萄蕴含酵母菌资源的认识。
研究比较和分析不同梅鹿辄葡萄株系果实表皮所蕴含的酵母菌种群的组成差异。实验选取郑州果树研究所4个梅鹿辄不同株系的葡萄作为研究对象,通过果实表皮酵母菌群的富集培养、YEPD培养基的分离与纯化,一共分离得到56个菌株;经过WL鉴别培养基的培养与菌落和显微形态观察对获得的菌株进行初步分类,得到9个具有显著差异的酵母形态群;然后对各形态群的代表菌株进行DNA提取及26S r DNA D1/D2区段的PCR扩增和测序分析,将供试菌株归入6个酵母菌种群;最后,对葡萄株系与相关酵母菌种群进行组成差异的分析,结果发现,4个梅鹿辄株系果皮上都含有的酵母菌种群为Filobasidium floriforme,而Sporidiobolus ruineniae和Hanseniaspora vineae仅为1个株系所独有,而Rhodotorula graminis(Rhodosporidium babjevae)则为2个株系所共有。由结果可以推断,由于4个株系都来自同一个品种且种植的客观环境一致,它们果皮都含有酵母菌种群Filobasidium floriforme,但是由于株系本身的不同,又分别含有不同于其他株系的特殊的酵母菌种群。研究表明,在今后的葡萄相关酵母菌研究中,要重视葡萄种群内株系间的差异,而不能只关注种群水平的组成差异。
