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刘培培
作品数:
1
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供职机构:
郑州大学第一附属医院
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发文基金:
国家自然科学基金
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相关领域:
医药卫生
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合作作者
张菊新
郑州大学人民医院
刘广芝
郑州大学人民医院
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刘广芝
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2014
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人斯钙素1在大肠杆菌中的重组表达与活性鉴定
2014年
目的通过原核表达的方法得到有活性的斯钙素1(STC1)重组蛋白。方法将优化合成的STC1 DNA片段克隆到表达载体pET-32b(+)上,重组质粒转入大肠杆菌诱导表达,在变性条件下纯化包涵体,经透析复性得到可溶的斯钙素1融合蛋白,凝血酶酶切后用高亲和镍离子树脂吸附多余多肽获得目的蛋白。Western印迹分析验证目的蛋白免疫活性。动物实验检测目的蛋白的生物学活性。结果构建了pET-32b(+)-STC1表达载体,表达并纯化了STC1融合蛋白包涵体,经复性、凝血酶切和纯化后获得可溶的目的蛋白。Western印迹分析验证正确。生物学活性检测表明重组STC1能增加大鼠排泄系统对磷酸盐的重吸收。结论获得了具有生物学活性的斯钙素1重组蛋白,为制备STC1单克隆抗体和进一步研究STC1与肿瘤治疗的关系奠定了基础。
刘培培
董创创
刘广芝
孙君波
张菊新
关键词:
原核表达
包涵体复性
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